The present invention relates to an immunofluorescence kit for detecting ER and PR antigens and its application. The detection principle of the method is as follows: first, enrich non-humoral rare nuclear cells, and then, according to the principle of antigen-antibody reaction, detect the expression of target protein in enriched cells by immunofluorescence detection method. In this kit, target cells and common antigen CD45 of leukocytes were labeled by fluorescence, and target protein-positive and CD45-negative cells were screened to read and count specific protein-positive non-humoral rare nuclear cells.
【技术实现步骤摘要】
一种检测ER、PR抗原的免疫荧光试剂盒及应用
:本专利技术涉及一种医用检测方法,特别涉及体液中的肿瘤细胞的检测,具体涉及人ER、PR抗原免疫荧光检测试剂盒,适用于乳腺癌、子宫内膜癌等ER、PR抗原检测,还涉及该试剂盒在检测ER、PR抗原中的用途。
技术介绍
:目前癌症发病率较高,严重威胁人类健康。有些癌症较难早期发现,诊断时多为晚期。相应的,晚期癌症的5年存活率显著低于早期患者,早发现早诊断精准治疗可显著延长患者的存活时间。乳腺癌、子宫内膜癌常有雌激素受体(Estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(Progesteronereceptor,PR)的高表达。当其高表达时,内分泌治疗有效率高。因此,及时检测ER、PR,可根据结果合理地选择内分泌治疗并判断患者的预后。以乳腺癌为例,它是女性最常见的恶性肿瘤,年发病数占全球癌症新发病例数23%,死亡人数占14%,位居女性肿瘤发生首位(JemalA,etal.CACancerJClin,2011)。乳腺癌发生于乳腺腺上皮组织,其主要死亡原因为复发和转移。目前,内分泌治疗是乳腺癌主要治疗方式之一。临床实践(OlivottoIA,etal.JClinOncol,2004)表明:当雌激素受体(Estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(Progesteronereceptor,PR)表达均为阳性时,内分泌治疗药物三苯氧胺(Tamoxiefen,TAM)治疗有效率为60%~75%;而两者之一为阳性时(ER+PR-或ER-PR+)有效率下降至35%~50%。表明ER、PR表达与内分泌治疗疗效密切相关,其检 ...
【技术保护点】
1.一种检测ER、PR抗原的方法,所述方法,步骤如下:1)稀有有核细胞的富集取血液和其他体液样品,对其中的非体液性稀有有核细胞进行富集,其中所述富集,方法可选用任何一种稀有有核细胞的分离富集方法,选自:红细胞去除、阴性富集、阳性富集、密度梯度分离法、膜过滤法、微流控法、流式细胞技术等;也可以不经富集将血标本涂于多张载玻片,富集后的样本采用固定液固定,所述固定液选自:乙醇、甲醇、福尔马林、丙酮、冰醋酸、甲醛、多聚甲醛、戊二醛、丙烯醛、苦味酸、PLP液、ECD‑G液,2)将富集的稀有有核细胞进行免疫荧光检测,免疫荧光检测方法步骤如下:2.1)CYP1洗载玻片3min×3次,每次100~150μL,确保覆盖满整个标本区;2.2)吸去载玻片上多余液体,加入CYPP作用5min,用CYP1同上洗片3min×1次;吸去多余液体,加200μl冰丙酮:甲醇(7:3)作用5min,CYP1洗片3min×3次,吸去多余水分;2.3)加100~150μl封闭液室温封闭20~30min,吸去多余封闭液,加100~150μl稀释好的ER抗体、PR抗体和CD45抗体,室温湿盒内避光孵育1~2h;2.4)避光,取C ...
【技术特征摘要】
1.一种检测ER、PR抗原的方法,所述方法,步骤如下:1)稀有有核细胞的富集取血液和其他体液样品,对其中的非体液性稀有有核细胞进行富集,其中所述富集,方法可选用任何一种稀有有核细胞的分离富集方法,选自:红细胞去除、阴性富集、阳性富集、密度梯度分离法、膜过滤法、微流控法、流式细胞技术等;也可以不经富集将血标本涂于多张载玻片,富集后的样本采用固定液固定,所述固定液选自:乙醇、甲醇、福尔马林、丙酮、冰醋酸、甲醛、多聚甲醛、戊二醛、丙烯醛、苦味酸、PLP液、ECD-G液,2)将富集的稀有有核细胞进行免疫荧光检测,免疫荧光检测方法步骤如下:2.1)CYP1洗载玻片3min×3次,每次100~150μL,确保覆盖满整个标本区;2.2)吸去载玻片上多余液体,加入CYPP作用5min,用CYP1同上洗片3min×1次;吸去多余液体,加200μl冰丙酮:甲醇(7:3)作用5min,CYP1洗片3min×3次,吸去多余水分;2.3)加100~150μl封闭液室温封闭20~30min,吸去多余封闭液,加100~150μl稀释好的ER抗体、PR抗体和CD45抗体,室温湿盒内避光孵育1~2h;2.4)避光,取CYP2100~150μL/片洗片3min×3次,吸去多余水分;2.5)加100~150μL稀释好的荧光二抗,湿盒内避光孵育,CYP2洗3min×4次,吸去多余水分,2.6)复染:取10μLDAPI染液,加至标本区,2.7)盖上盖玻片,并吸去周边液体,镜下观察或置于2~8℃或-20℃环境下避光保存,3)对样本进行镜检观察将样本置于荧光显微镜下,扫描整个标本区,若发现片状或者圈状信号时,切换至高倍镜下进一步鉴定,记录每个阳性细胞的坐标,并且40×物镜分别在不同通道下拍照,必要时可使用油镜观察,4)结果判断阳性细胞:目的蛋白荧光信号阳性且无血源性白细胞表面抗原荧光信号的有核细胞,记为一个阳性细胞,阴性细胞:细胞有血源性白细胞表面抗原荧光信号,不论目的蛋白是否有荧光均记为阴性。2.根据权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员:郭素杰,郭志敏,樊晓婷,
申请(专利权)人:北京莱尔生物医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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