公主岭霉素抑菌活性检测方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种公主岭霉素抑菌活性检测方法及应用，涉及抑菌活性检测方法技术领域，所述方法包括如下步骤：提供公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液，然后将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，得到公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，根据该临界抑菌体积比，确定公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性，缓解了现有的抑菌活性检测方法中物理化学检测方法要求高，微生物法不易操作的技术问题，本发明专利技术提供的方法直观性好、灵敏度高、稳定性好、简单方便，耗时短，适用范围广，更安全，更可靠，费用更低，为公主岭霉素抑菌活性检测提供了一种新途径。

Detection method and application of antibacterial activity of Gongzhuling mycin

The invention provides a method for detecting the bacteriostatic activity of Gongzhulingmycin and its application, which relates to the technical field of bacteriostatic activity detection method. The method comprises the following steps: providing water extract of Gongzhulingmycin and suspension of tested bacteria, and then mixing water extract of Gongzhulingmycin with suspension of tested bacteria of different volume ratio to obtain a common product. According to the critical volume ratio of water extract of Princess lingmycin and suspension of tested bacteria, the bacteriostatic activity of water extract of Princess lingmycin to tested bacteria is determined, which alleviates the technical problems of high requirements of physical and chemical detection methods in existing bacteriostatic activity detection methods and difficult operation of microbial method. The method provided is intuitive, sensitive, stable, simple, convenient, time-consuming, widely applicable, safer, more reliable and cheaper. It provides a new way for the detection of the bacteriostatic activity of Principal Lingmycin.

【技术实现步骤摘要】
公主岭霉素抑菌活性检测方法及应用
本专利技术涉及抑菌活性检测方法
，尤其是涉及一种公主岭霉素抑菌活性检测方法及应用。
技术介绍
农抗"769"是由吉林省农科院专家1967年从公主岭土壤中分离筛选得到的一株农用链霉菌菌株，公主岭霉素是农抗"769"的代谢产物，是一种自然生物合成的混合制剂。目前，评定公主岭霉素质量的一个重要指标为抑菌活性，其测定方法有物理化学法和微生物法。物理化学法虽然简便、快速，但是对公主岭霉素纯度要求很高，否则会造成很大偏差，且测定仪器昂贵，检测费用高昂。微生物法包括稀释法、比浊法、管蝶法、呼吸度量法和脱氢法，这些方法灵敏度高，安全可靠，得到了广泛应用，但是这些微生物检测法操作步骤多，试验过程长，影响因素较多，不易于检测人员掌握。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种公主岭霉素抑菌活性检测方法，以缓解现有的物理化学检测方法要求高，微生物法不易操作等技术问题。本专利技术提供的公主岭霉素抑菌活性检测方法，包括如下步骤：(a)提供公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液；(b)将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，分别调查供试菌的生长情况，得到公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，根据公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，确定公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性。进一步的，在步骤(b)中，将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，培养2-6天后，再分别调查供试菌的生长情况。进一步的，所述供试菌为真菌；优选地，所述供试菌选自玉米大斑病菌、烟草赤星病菌或球孢白僵菌中的一种。进一步的，在步骤(b)中，供试菌菌悬液的OD值为0.3-0.35。进一步的，所述公主岭霉素水提液按照如下步骤制备而成：(m)将农抗“769”菌种接种到培养基质中，完全培养，得到公主岭霉素和培养基质的混合物；(n)将公主岭霉素和培养基质的混合物进行干燥，得到公主岭霉素固体物，将公主岭霉素固体物粉碎，用水浸提，得到公主岭霉素浸提液；(s)将公主岭霉素浸提液离心，取上清液，即得到公主岭霉素水提液。进一步的，在步骤(m)中，培养时间为5-7天，优选为6天。进一步的，在步骤(n)中，浸提时间为24-48h，优选为36h。进一步的，在步骤(n)中，公主岭霉素固体物粉碎后的粉碎物与水的体积比为1:2-10，优选为1:2。进一步的，在步骤(m)中，所述培养基质为玉米碴；优选地，所述玉米碴经过浸泡、沥干和灭菌处理；优选地，用水对玉米碴进行浸泡，玉米碴浸泡时间为1.5-8h，优选为3h；优选地，所述灭菌处理时间为15-25min，优选为20min。本专利技术的目的之二在于提供本专利技术提供的公主岭霉素和抑菌活性检测方法在抗生素抑菌活性检测中的应用。本专利技术提供的公主岭霉素抑菌活性检测方法具有如下有益效果：(1)通过观测不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合后供试菌生长情况，得到公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性，更直观，更灵敏，更稳定；(2)操作过程中无有毒有害试剂引入，更安全，更可靠，也更节约检测费用；(3)操作步骤少，耗时短，影响因素少，更易于检测人员掌握；(4)适用范围广，能够用于检测其它抗生素的抑菌活性。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。目前，评定公主岭霉素质量的一个重要指标为抑菌活性，其测定方法有物理化学法和微生物法。物理化学法虽然简便、快速，但是对公主岭霉素纯度要求很高，否则会造成很大偏差，且测定仪器昂贵，检测费用高昂。微生物法包括稀释法、比浊法、管蝶法、呼吸度量法和脱氢法，这些方法灵敏度高，安全可靠，得到了广泛应用，但是这些微生物检测法操作步骤多，试验过程长，影响因素较多，不易于检测人员掌握，且这些方法均未排除由供试菌菌量差异带来的误差。根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种公主岭霉素抑菌活性检测方法，包括如下步骤：(a)提供公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液；(b)将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，分别调查供试菌的生长情况，得到公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，根据公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，确定公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性。在本专利技术中，在步骤(b)中，随着公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液体积比的增加，供试菌的生长总量减少，当公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液体积比增加到一定程度，观察到无目标真菌生长时，此时公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液体积比即为临界抑菌体积比。在本专利技术中，通过公主岭霉素水提液的临界抑菌体积来判断公主岭霉素水提液抑菌活性的高低，该临界抑菌体积越小，则说明公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性越好。本专利技术提供的公主岭霉素抑菌活性检测方法具有如下有益效果：(1)通过检测不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合后供试菌生长情况，得到公主岭霉素水提液对供试菌的的临界抑菌体积，从而得到公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性，更直观，更灵敏，更稳定；(2)操作过程中无有毒有害试剂引入，更安全，更可靠，也更节约检测费用；(3)操作步骤少，耗时短，受供试菌菌量影响小，更易于检测人员掌握；(4)适用范围广，能够用于检测其它抗生素的抑菌活性。在本专利技术的一种优选实施方式中，在步骤(b)中，将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，培养2-6天后，再分别检测供试菌的生长情况。在本专利技术的典型但非限制性的实施方式中，在步骤(b)中，培养的时间如为2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5或7天。在本专利技术的一种优选实施方式中，供试菌为真菌。在本专利技术中，真菌包括植物真菌、其它植物病原菌或非病原真菌。在本专利技术的进一步优选实施方式中，供试菌选用玉米大斑病菌、烟草赤星病菌或球孢白僵菌中的一种，尤其是当供试菌为玉米斑病菌或烟草赤星病菌时，该测定方法更准确，更稳定，更直观。在本专利技术的一种优选实施方式中，在步骤(b)中，供试菌菌悬液的OD值为0.3-0.35。在本专利技术的典型但非限制性的实施方式中，供试菌菌悬液的OD值如为0.3、0.31、0.32、0.33、0.34或0.35。在本专利技术的一种优选实施方式中，供试菌菌悬液的制备方法包括如下步骤：将供试菌加入到1:1000的吐温80溶液中，配置成OD值为0.3-0.35的菌悬液备用。在本专利技术的一种优选实施方式中，供试菌采用PDA培养基进行培养。PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称。在本专利技术的一种优选实施方式中，公主岭霉素水提液按照如下步骤制备而成：(m)将农抗“769”菌种接种到培养基质中，完全培养，得到公主岭霉素和培养基质的混合物；(n)将公主岭霉素和培养基质的混合物进行干燥，得到公主岭霉素固体物，将公主岭霉素固体物粉碎，用水浸提，得到公主岭霉素浸提液；(s)将公主岭霉素浸提液离心，取上清液，即得到公主岭霉素水提液。在本专利技术中，农抗“769”由吉林省农科院专家1967年从公主岭土壤中分离筛选得到，经中国科学院微生物所阮继生研究员对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种公主岭霉素抑菌活性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)提供公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液；(b)将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，分别调查供试菌的生长情况，得到公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，根据公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，确定公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性。

【技术特征摘要】
1.一种公主岭霉素抑菌活性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)提供公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液；(b)将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，分别调查供试菌的生长情况，得到公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，根据公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，确定公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性。2.根据权利要求1所述的公主岭霉素抑菌活性检测方法，其特征在于，在步骤(b)中，将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，培养2-6天后，再分别调查不同体积比供试菌的生长情况。3.根据权利要求1所述的公主岭霉素抑菌活性检测方法，其特征在于，所述供试菌为真菌；所述供试菌选自玉米大斑病菌、烟草赤星病菌或球孢白僵菌中的一种。4.根据权利要求1-3任一项所述的公主岭霉素抑菌活性检测方法，其特征在于，在步骤(b)中，供试菌菌悬液的OD值为0.3-0.35。5.根据权利要求1所述的公主岭霉素抑菌活性检测方法，其特征在于，所述公主岭霉素水提液按照如下步骤制备而成：(m)将农抗“769”菌种接种到培养基质中，完全培养，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜茜，李启云，张正坤，汪洋洲，赵宇，安俊霞，路杨，隋丽，徐文静，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：吉林,22