本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种禽白血病病毒抗体和鸡白痢沙门氏菌抗体同时检测的试剂盒。该试剂盒的抗原组合包括p27蛋白、gp85蛋白和GroEL‑Δ8‑1蛋白。用禽白血病病毒衣壳蛋白p27、囊膜蛋白gp85的原核表达蛋白和鸡白痢沙门氏菌优势抗原GroEL的截短体GroEL‑Δ8‑1的原核表达蛋白作为包被抗原开发出能够同时检测禽白血病病毒和鸡白痢沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒。与目前常用的单独检测禽白血病或鸡白痢的试剂盒相比，本发明专利技术的试剂盒取得了同时检测禽白血病和鸡白痢的效果，能极大减轻禽白血病和鸡白痢的检测净化工作。
A kit for simultaneous detection of antibodies against avian leukosis virus and Salmonella pullorum
The invention relates to the field of biotechnology, in particular to a kit for simultaneous detection of avian leukemia virus antibody and Salmonella pullorum antibody. The antigen combinations of the kit include p27 protein, gp85 protein and GroEL GroEL 8 protein. The prokaryotic expression proteins of avian leukemia virus capsid protein p27, envelope protein gp85 and truncated GroEL_8_1 of Salmonella pullorum dominant antigen GroEL were used as envelope antigens to develop an ELISA kit for simultaneous detection of avian leukemia virus and Salmonella pullorum antibodies. Compared with the commonly used kit for detecting avian leukemia or chicken dysentery alone, the kit has the effect of simultaneously detecting avian leukemia and chicken dysentery, and can greatly reduce the detection and purification of avian leukemia and chicken dysentery.
【技术实现步骤摘要】
一种禽白血病病毒抗体和鸡白痢沙门氏菌抗体同时检测的试剂盒
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种禽白血病病毒抗体和鸡白痢沙门氏菌抗体同时检测的试剂盒。
技术介绍
禽白血病(AvianLeukosis)是由禽白血病病毒(AvianLeukosisVirus,ALV)和禽肉瘤病病毒(AvianSarcomaVirus,ASV)群中的病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称。该病对鸡能引起许多种具有传染性的良性和恶性肿瘤。自1868年Roloff报道鸡淋巴肉瘤以来，禽白血病已分布于世界各地，我国也有自然病例发生。该病可引起鸡只增重缓慢、性成熟延迟、蛋小、蛋壳薄、产蛋量下降、受精率和孵化率低、胴体废弃率增加、死亡率增高等，造成直接经济损失。同时还可引起机体非特异性抵抗力下降和免疫抑制，造成间接经济损失。由于该病能垂直传播，因此对养禽业危害很大，是危害养鸡业的主要疾病之一。鸡白痢(PullorumDisease)是由鸡白痢沙门氏菌(Salmonellapullorum,SP)引起的，以雏鸡为主要感染对象，以排白色粪便和产蛋下降为主要特征，可致产前各日龄鸡败血性伤寒症的禽类急性传染病。鸡白痢沙门氏菌的传播方式呈多样性，不仅可通过饲料、空气、饮水、鼠类等进行水平传播，也可通过产带菌卵进行垂直传播，孵化出的病雏绒毛中携带的大量病原菌，可污染饮水、育雏器、饲料等，通过消化道、呼吸道等感染同鸡舍的幼雏，耐过鸡只成年后再排带菌卵，由此形成复杂的传播网络。鸡白痢沙门氏菌在国内感染率高，分布广，是种禽养殖净化的重点，也是商品蛋鸡养殖重点防治的疾病。禽白血病和鸡白痢都是可以垂直传播的传染病，对养鸡业造成严重的危害。目前控制禽白血病和鸡白痢最有效的措施是实施传染病的净化，主要通过定期对种鸡群进行检疫，淘汰阳性鸡，通过不断地净化从而选育出无禽白血病和鸡白痢的鸡群。各国在众多检测方法中，ELISA检测方法以其敏感、特异、操作方便而被广泛应用于临床检测。该法适合于基层兽医部门和鸡场对该病的诊断和血清学检测。目前，已有国外生产的商品化禽白血病抗原或抗体检测试剂盒，检测鸡白痢主要通过平板凝集试验，但是没有禽白血病和鸡白痢共检测的试剂盒或方法。因此，研制具有我国自主知识产权的禽白血病和鸡白痢抗体共检测试剂盒，并将其产业化生产，对于我国禽白血病和鸡白痢的净化具有重要的意义。禽白血病病毒的p27基因是禽白血病病毒不同亚群之间的一段高度保守的基因。其编码的p27蛋白是病毒核心外壳的主要成分，其含量高，占病毒总蛋白成分的30％以上，能够诱导机体产生特异性抗体。禽白血病病毒的gp85基因是禽白血病病毒的一个囊膜蛋白，其能够诱导机体产生特异性抗体。Heat-shockprotein60(GroEL)是鸡白痢沙门氏菌重要的蛋白抗原，在鸡白痢沙门氏菌入侵机体时可诱导产生大量抗体。因此，可以用p27、gp85和GroEL作为包被抗原，建立检测禽白血病和鸡白痢抗体的间接ELISA检测试剂盒。表1禽白血病和鸡白痢检测试剂盒统计目前对禽白血病的净化主要是用国外ELISA试剂盒检测鸡泄殖腔拭子的禽白血病病毒抗原p27和鸡血清的禽白血病病毒抗体，对鸡白痢的净化主要用平板凝集试验检测鸡血清的鸡白痢沙门氏菌抗体。这些试剂盒或方法都只是针对的单一传染病的检测，不能同时检测禽白血病和鸡白痢。禽白血病和鸡白痢都是养鸡场需要净化的传染病，目前对禽白血病的净化主要是用国外ELISA试剂盒检测鸡泄殖腔拭子的禽白血病病毒抗原p27和鸡血清的禽白血病抗体，对鸡白痢的净化主要用平板凝集试验检测鸡血清的鸡白痢沙门氏菌抗体，这些试剂盒或方法都是针对单一传染病的检测，还没有一种单一试剂盒能够检测禽白血病和鸡白痢这两种病。单独检测禽白血病的试剂盒和平板凝集试验单独检测鸡白痢的方法，使临床检测净化禽白血病和鸡白痢工作耗费大量的人力、物力和财力。因此迫切需要研制出方便好用的禽白血病和鸡白痢检测试剂盒，减轻禽白血病和鸡白痢的净化工作。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种禽白血病病毒抗体和鸡白痢沙门氏菌抗体同时检测的试剂盒。该试剂盒能够同时检测禽白血病和鸡白痢。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提拱了一种抗原组合，包括p27蛋白、gp85蛋白和GroEL-Δ8-1蛋白。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述的抗原组合中p27蛋白、gp85蛋白和GroEL-Δ8-1蛋白的总浓度为(1～8)μg/mL且质量比为(0.5～1):(0.5～1):1。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述的抗原组合中p27蛋白、gp85蛋白和GroEL-Δ8-1蛋白的总浓度为(1～4)μg/mL且质量比为1:1:(0.25～4)。在此基础上，本专利技术还提供了所述的抗原组合在制备检测禽白血病和/或鸡白痢的试剂盒中的应用。本专利技术还提供了试剂盒，包被所述的抗原组合。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述试剂盒还包括血清、一抗、酶标二抗、包被缓冲液、洗涤缓冲液、封闭液、样品或二抗的稀释液、显色液和终止液。本专利技术还提供了所述的试剂盒的使用方法，所述血清的稀释度为1:(100～400)，作为优选，所述血清的稀释度为1:200；所述酶标二抗稀释度为1：(4000～16000)，作为优选，所述酶标二抗稀释度为1：8000。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭液的封闭条件为5％脱脂乳37℃封闭2h。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述一抗的孵育条件为37℃孵育(45～90)min，作为优选，所述一抗的孵育条件为37℃孵育60min；所述酶标二抗的孵育条件为37℃孵育(45～90)min，作为优选，所述酶标二抗的孵育条件为37℃孵育45min。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述显色液的显色时间为(5～15)min，作为优选，所述显色液的显色时间为10min。本专利技术结合禽白血病和鸡白痢要同时净化的现状，利用ELISA的基本原理，用禽白血病病毒衣壳蛋白p27、囊膜蛋白gp85的原核表达蛋白和鸡白痢沙门氏菌优势抗原GroEL的截短体GroEL-Δ8-1的原核表达蛋白作为包被抗原开发出能够同时检测禽白血病和鸡白痢的ELISA试剂盒。通过摸索最佳的p27、gp85和GroEL-Δ8-1包被条件，优化ELISA的反应条件建立检测禽白血病和鸡白痢的间接ELISA方法。与目前常用的单独检测禽白血病或鸡白痢的试剂盒相比，本专利技术的试剂盒能够同时检测禽白血病和鸡白痢，只要检测为阳性的鸡即淘汰，达到同时净化的目的，极大地减轻临床检测净化的工作。具体实施方式本专利技术公开了一种一种禽白血病病毒抗体和鸡白痢沙门氏菌抗体同时检测的试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。1.研究方法：根据鸡场需要净化禽白血病和鸡白痢的现状，以及目前还没有能同时检测禽白血病和鸡白痢的试剂盒或方法。利用ELISA的基本原理，用禽白血病病毒衣壳蛋白p27、囊膜蛋白gp85和鸡白痢沙门氏菌优势抗原GroEL-Δ8-1为本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗原组合，其特征在于，包括p27蛋白、gp85蛋白和GroEL‑Δ8‑1蛋白。
【技术特征摘要】
1.一种抗原组合，其特征在于，包括p27蛋白、gp85蛋白和GroEL-Δ8-1蛋白。2.如权利要求1所述的抗原组合，其特征在于，p27蛋白、gp85蛋白和GroEL-Δ8-1蛋白的总浓度为(1～8)μg/mL且质量比为(0.5～1):(0.5～1):1。3.如权利要求1所述的抗原组合，其特征在于，p27蛋白、gp85蛋白和GroEL-Δ8-1蛋白的总浓度为(1～4)μg/mL且质量比为1:1:(0.25～4)。4.如权利要求1至3任一项所述的抗原组合在制备检测禽白血病和/或鸡白痢的试剂盒中的应用。5.试剂盒，其特征在于，包被如权利要求1至3任一项所述的抗原组合。6.如权利要求5所述的试剂盒...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑世军，王永强，游广炬，李晓齐，曹红，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11
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