大黄甘草汤的质量控制方法技术

本发明专利技术公开了一种大黄甘草汤的质量控制方法，本发明专利技术通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，洗脱程序、流速，色谱柱和检测器检测参数等分析条件，采用UHPLC‑TQ‑MS/MS法检测，该检测方法可以同时检测大黄甘草汤及其提取物中的蒽醌、皂苷类成分，共17种活性化合物。实验结果表明，该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价大黄甘草汤的质量，对控制质量和保证临床疗效具有重要意义。

Quality control of rhubarb and licorice soup

The invention discloses a quality control method for Rhubarb and licorice decoction. The best mobile phase composition, elution procedure, flow rate, chromatographic column and detector detection parameters are selected through a large number of experiments. The method is detected by UHPLC TQ MS/MS. The detection method can simultaneously detect rhubarb and Licorice Decoction and its extraction. Anthraquinones and saponins in the products contain 17 active compounds. The experimental results show that the method has high sensitivity and good stability. It can objectively, comprehensively and accurately evaluate the quality of Rhubarb and Glycyrrhiza Decoction. It is of great significance to control the quality and ensure the clinical efficacy.

【技术实现步骤摘要】
大黄甘草汤的质量控制方法
本专利技术涉及一种中药材的质量控制方法，具体涉及大黄甘草汤的质量控制方法。
技术介绍
大黄和甘草药对是医家常用泻下药对。大黄苦寒，清泄胃中结热，力猛善行，甘草甘平，与大黄相伍，可缓大黄之泻下，留大黄于胃以洁府，免大黄苦寒伤中，使其调中有补以愈疾。两药配伍，相须为用，甘草缓和大黄苦寒攻下之性，使其降逆止呕而不伤胃气，又可清泄胃热，大黄甘草汤也是由这两味中药组成。大黄含有多种蒽醌类成分，甘草中含有多个皂苷类成分，目前的检测方法，检测的有效成分比较有限，不能全面检测大黄和甘草药对中的有效成分。因此，为了充分控制好大黄和甘草药对及其制剂的临床安全性，维护患者的利益，很有必要在现有技术的基础之上研究设计出能准确全面检测大黄甘草汤及其制剂有效成分的检测方法。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，采用超高效液相色谱检测，该检测方法可以同时检测大黄甘草汤中的蒽醌类、甾体类共17种活性化合物。该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价大黄甘草汤及其制剂的质量，对控制质量和保证疗效具有重要意义。技术方案：为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：一种大黄甘草汤的质量控制方法，包括以下步骤：(1)样品溶液的制备先取甘草药材，加8至16倍量的水回流提取，然后加入大黄药材，并加入药材总重量8～16倍的水，回流提取，过滤得到大黄甘草水提液，离心，吸取上清液，过0.22μm滤膜，得样品溶液；(2)对照品溶液的制备精密称定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、番泻苷A、番泻苷B、甘草酸、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查耳酮A和光甘草定17种对照品各，分别用甲醇溶解得到对照品储备液，然后定量吸取各对照品储备液获得混合对照品储备液，过0.22μm滤膜，得混合对照品溶液；(4)定量分析将步骤(1)制备得到的样品溶液和步骤(2)制备得到的混合对照品溶液，分别进行超高效液相色谱检测，分别获得样品和对照品的UHPLC-TQ-MS/MS色谱图，然后进行定性定量分析。作为优选方案，以上所述的大黄甘草汤的质量控制方法，步骤(3)所用超高效液相色谱参数设置如下：仪器：WatersACQUITYUPLC系统；Tetons质谱检测器；色谱柱：ThermoScientificHypersilGoldC18色谱柱，100mm×2.1mm，1.9μm,；柱温：35℃；进样体积：2μL；流动相：A相为0.1％甲酸水、B相为乙腈；流速：0.4ml·min-1；梯度洗脱；质谱条件为：离子源：ESI离子源；离子源温度：150℃；扫描方式：多反应检测模式；毛细管电压：3.0kV；去溶剂气温度：150℃；去溶剂气流量：1000L·h-1；锥孔气流量：30L·h-1；碰撞气流量：0.15mL·min-1。作为优选方案，以上所述的大黄甘草汤的质量控制方法，梯度洗脱程序为：0～2min，A：95％～95％，B：5％～5％；2～4min，A：95％～65％，B：5％～35％；4～8min，A：65％～5％，B：35％～95％；8～13min，A：5％～5％，B：95％～95％；13～14min，A：5％～95％，B：95％～5％；14～15min，A：95％～95％，B：5％～5％。作为优选方案，以上所述的大黄甘草汤的质量控制方法，步骤(3)中用90％的甲醇按照逐级稀释法对混合对照品溶液进行逐级稀释，制成5个不同浓度级别的对照品溶液分别进行超高效液相色谱检测，测定各对照品溶液中17个成分的峰面积，以各成分浓度作为横坐标，峰面积为纵坐标绘制17个成分的标准曲线，采用回归法进行线性分析，计算各对照品的线性相关系数r2；并测定LOQ和LOD，如下表。作为优选方案，以上所述的大黄甘草汤的质量控制方法，步骤(2)对照品溶液的制备方法为：精密称定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、番泻苷A、番泻苷B、甘草酸、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查耳酮A和光甘草定对照品各5mg左右，用90％甲醇溶解为浓度分别为大黄酸108.6μg·mL-1、大黄素，106.0μg·mL-1、芦荟大黄素220.0μg·mL-1、大黄酚90.0μg·mL-1、大黄素甲醚130.0μg·mL-1、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷1347.0μg·mL-1、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷408.3μg·mL-1、番泻苷A126.0μg·mL-1、番泻苷B245.0μg·mL-1、甘草酸1353.0μg·mL-1、甘草次酸721.4μg·mL-1、甘草苷505.7μg·mL-1、异甘草苷3320.0μg·mL-1、甘草素3233.0μg·mL-1、异甘草素3553.0μg·mL-1、甘草查耳酮2127.0μg·mL-1、光甘草定2647.0μg·mL-1的对照品储备液；然后定量吸取各对照品储备液获得混合对照品储备液，其中大黄酸(1)、大黄素(2)、芦荟大黄素(3)、大黄酚(4)、大黄素甲醚(5)、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷(6)、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(7)、番泻苷A(8)、番泻苷B(9)、甘草酸(10)、甘草次酸(11)、甘草苷(12)、异甘草苷(13)、甘草素(14)、异甘草素(15)、甘草查耳酮A(16)、光甘草定(17)的含量分别为15.404μg·mL-1、15.035μg·mL-1、15.603μg·mL-1、12.766μg·mL-1、18.440μg·mL-1、19.106μg·mL-1、14.479μg·mL-1、17.872μg·mL-1、17.376μg·mL-1、19.191μg·mL-1、15.349μg·mL-1、14.346μg·mL-1、23.546μg·mL-1、22.929μg·mL-1、25.199μg·mL-1、15.085μg·mL-1、23.005μg·mL-1。作为优选方案，以上所述的大黄甘草汤的质量控制方法，步骤(1)所述的样品溶液的制备方法为：先取甘草药材，加8倍量的水回流提取1h后，然后加入大黄药材，并加入药材总重量8倍的水，回流提取2次，合并提取液，过滤得到大黄甘草水提液，离心，吸取上清液，过0.22μm滤膜，得样品溶液。大黄和甘草的重量比为4:1、4:2、4:3、4:4、3:4、2:4或1:4。条件优化实验本专利技术通过对流动相、梯度洗脱程序、流速等条件进行考察，以期所有成分能够在较短时间内即能分离又能获得较好的峰形。发现以0.1％的甲酸水-乙腈能够很好的分离大黄-甘草中的17种活性成分，加入甲酸能够减少芳香酸类成分的拖尾现象；通过优化梯度洗脱程序发现高比例有机相对大黄-甘草中活性成分分离较好，确定洗脱梯度；流动相流速为0.4ml·min-1各成分分离效果及峰形优于流速为0.2ml·min-1。采用全扫模式(正离子及负离子模式)优化17种化合物的质谱参数，仪器在分析各成分在正离子及负离子模式下的信号强度及灵敏度选择检测模式，锥孔电压及毛细管电压由软件自动优化。在色谱及质谱条件优化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大黄甘草汤的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品溶液的制备先取甘草药材，加8至16倍量的水回流提取，然后加入大黄药材，并加入药材总重量8～16倍的水，回流提取，过滤得到大黄甘草水提液，离心，吸取上清液，过0.22μm滤膜，得样品溶液；(2)对照品溶液的制备精密称定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸‑8‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、大黄素‑8‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、番泻苷A、番泻苷B、甘草酸、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查耳酮A和光甘草定17种对照品各，分别用甲醇溶解得到对照品储备液，然后定量吸取各对照品储备液获得混合对照品储备液，过0.22μm滤膜，得混合对照品溶液；(3)定量分析将步骤(1)制备得到的样品溶液和步骤(2)制备得到的混合对照品溶液，分别进行超高效液相色谱检测，分别获得样品和对照品的UHPLC‑TQ‑MS/MS色谱图，然后进行定性定量分析。

【技术特征摘要】
1.一种大黄甘草汤的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品溶液的制备先取甘草药材，加8至16倍量的水回流提取，然后加入大黄药材，并加入药材总重量8～16倍的水，回流提取，过滤得到大黄甘草水提液，离心，吸取上清液，过0.22μm滤膜，得样品溶液；(2)对照品溶液的制备精密称定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、番泻苷A、番泻苷B、甘草酸、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查耳酮A和光甘草定17种对照品各，分别用甲醇溶解得到对照品储备液，然后定量吸取各对照品储备液获得混合对照品储备液，过0.22μm滤膜，得混合对照品溶液；(3)定量分析将步骤(1)制备得到的样品溶液和步骤(2)制备得到的混合对照品溶液，分别进行超高效液相色谱检测，分别获得样品和对照品的UHPLC-TQ-MS/MS色谱图，然后进行定性定量分析。2.根据权利要求1所述的大黄甘草汤的质量控制方法，其特征在于，步骤(3)所用超高效液相色谱参数设置如下：仪器：WatersACQUITYUPLC系统；Tetons质谱检测器；色谱柱：ThermoScientificHypersilGoldC18色谱柱，100mm×2.1mm，1.9μm,；柱温：35℃；进样体积：2μL；流动相：A相为0.1％甲酸水、B相为乙腈；流速：0.4ml·min-1；梯度洗脱；质谱条件为：离子源：ESI离子源；离子源温度：150℃；扫描方式：多反应检测模式；毛细管电压：3.0kV；去溶剂气温度：150℃；去溶剂气流量：1000L·h-1；锥孔气流量：30L·h-1；碰撞气流量：0.15mL·min-1。3.根据权利要求2所述的大黄甘草汤的质量控制方法，其特征在于，梯度洗脱程序为：0～2min，A：95％～95％，B：5％～5％；2～4min，A：95％～65％，B：5％～35％；4～8min，A：65％～5％，B：35％～95％；8～13min，A：5％～5％，B：95％～95％；13～14min，A：5％～95％，B：95％～5％；14～15min，A：95％～95％，B：5％～5％。4.根据权利要求2所述的大黄甘草汤的质量控制方法，其特征在于，步骤(3)中用90％的甲醇按照逐级稀释法对混合对照品溶液进行逐级稀释，制成5个不同浓度级别的对照品溶液分别进行超高效液相色谱检测，测定各对照品溶液中17个成分的峰面积，以各成分浓度作为横坐标，峰面积为纵坐标绘制17个成分的标准曲线，采用回归法进行线性分析，计算各对照品的线性相关系数r2；并测定LOQ和LOD，如下表5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈艳琰，唐于平，曹玉洁，乐世俊，王晶，杨洁，
申请(专利权)人：陕西中医药大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61