本发明专利技术属于荧光分析技术领域，具体涉及一种金银纳米簇AuAgNCs@APAP的制备方法及其作为荧光探针测定酸性和碱性氨基酸的应用。AuAgNCs@APAP荧光探针的制备方法，包括以下步骤：取0.235mL 24.28mmol/L HAuCl4溶液和0.235mL 24.28mmol/L AgNO3溶液于100mL烧杯中，加入2.17mL 50mmol/L对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至10mL，10℃下反应2h，溶液由黄色变为灰色，用0.45μm的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用1 kDa透析袋透析，即得所述AuAgNCs@APAP荧光探针。本发明专利技术利用对乙酰氨基酚（Acetaminophen，简称APAP），制备了一种金、银双金属纳米簇（AuAgNCs@APAP），并以AuAgNCs@APAP为荧光探针，该荧光探针稳定性好、荧光量子产率高而且其制备过程简便、耗时短，可很好的用于Arg、Lys、His、Asp和Glu的测定。
A AuAgNCs@APAP fluorescent probe and its preparation method and its application in the determination of amino acids
The invention belongs to the field of fluorescence analysis technology, in particular to a preparation method of AuAgNCs@APAP gold-silver nanocluster and its application as a fluorescence probe to determine acidic and basic amino acids. The preparation method of AuAgNCs@APAP fluorescent probe includes the following steps: 0.235 ml 24.28 mmol/L HAuCl4 solution and 0.235 ml 24.28 mmol/L AgNO3 solution were added to 100 mL beaker, 2.17 mL 50 mmol/L acetaminophen was added, and the mixed solution was diluted to 10 mL with deionized water, reacted for 2 hours at 10 C, and the solution changed from yellow to grey. The AuAgNCs@APAP fluorescent probe was obtained by filtration with a hydrophilic PTFE needle filter of 0.45 um and dialysis with a 1 kDa dialysis bag. The invention uses acetaminophen (APAP) to prepare a gold-silver bimetallic nanocluster (AuAgNCs@APAP) and uses AuAgNCs@APAP as a fluorescent probe. The fluorescent probe has good stability, high fluorescence quantum yield, simple preparation process and short time-consuming, and can be well used for Arg, Lys, His, Asp. And the determination of Glu.
【技术实现步骤摘要】
一种AuAgNCs@APAP荧光探针及其制备方法和在测定氨基酸中应用
本专利技术属于荧光分析
，具体涉及一种金银纳米簇AuAgNCs@APAP的制备方法及其作为荧光探针测定酸性和碱性氨基酸的应用。
技术介绍
氨基酸可分为酸性氨基酸、中性氨基酸和碱性氨基酸。酸性氨基酸中的天门冬氨酸可作为K+、Mg2+离子的载体向心肌输送电解质，从而改善心肌收缩功能，同时降低氧消耗，在冠状动脉循环障碍缺氧时，对心肌有保护作用。谷氨酸大量存在于谷类蛋白质中，动物脑中含量也较多。谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应。碱性氨基酸在医药上具有重要的价值，如赖氨酸可以治疗营养缺乏症、发育不全及氮平衡失调症，是重要的食品及饲料强化剂。氨基酸的测定方法有化学法、光化学法、色谱法和电化学法等。相对而言，荧光分析法具有操作简单、灵敏度高、检出限低等优点，建立一种测定氨基酸的荧光分析法是一件十分有意义的事情。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种AuAgNCs@APAP荧光探针及其制备方法和在测定氨基酸中应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是，一种AuAgNCs@APAP荧光探针的制备方法，包括以下步骤：取0.235mL24.28mmol/LHAuCl4溶液和0.235mL24.28mmol/LAgNO3溶液于100mL烧杯中，加入2.17mL50mmol/L对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至10mL，10℃下反应2h，溶液由黄色变为灰色，用0.45μm的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用1kDa透析袋透析，即得所述AuAgNCs@APAP荧光探针。本专利技术制备的AuAgNCs@APAP荧光探针可在测定酸性和碱性氨基酸中应用。本专利技术产生的有益效果是：本专利技术利用对乙酰氨基酚(Acetaminophen，简称APAP)，制备了一种金、银双金属纳米簇(AuAgNCs@APAP)，并以AuAgNCs@APAP为荧光探针，该荧光探针稳定性好、荧光量子产率高而且其制备过程简便、耗时短，可很好的用于精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、天门冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)的测定。附图说明图1为APAP和AuAgNCs@APAP的红外谱图；图2为AuAgNCs@APAP的的激发光谱、发射光谱图；图3是在激发波长为308nm条件下测定的APAP，AgNCs@APAP，AuNCs@APAP，AuAgNCs@APAP的荧光发射光谱图；图4是不同激发下AuAgNCs@APAP的荧光发射光谱图；图5是溶液pH对AuAgNCs@APAP荧光强度的影响；图6对AuAgNCs@APAP对Arg的选择性(A)和测定的抗干扰性能(B)；图7为常见干扰物质对检测Asp的影响，(A)为不同物质对荧光强度恢复的影响，(B)为常见干扰物质对检测Asp的干扰影响。具体实施方式制备通过一步合成法合成了AuAgNCs@APAP，取HAuCl4(24.28mM，0.235mL)溶液和AgNO3(24.28mM，0.235mL)溶液于100mL夹套烧杯中，加入对乙酰氨基酚(50mM，2.17mL)稀释至10mL，10℃下反应2h，溶液由黄色变为灰色。用0.45μm的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用1kDa透析袋透析，放在4℃冰箱中暗处保存，备用。为了比较，在相同的实验条件(分别将HAuCl4替换为AgNO3、将AgNO3替换为HAuCl4)下同时合成了AgNCs@APAP和AuNCs@APAP。表征图1为APAP和AuAgNCs@APAP的红外谱图。对于APAP，1241.56cm-1对应C-N的伸缩振动，1561.06cm-1是仲酰胺N-H的弯曲振动，1015.02cm-1的属于-OH的面内弯曲振动峰，1326.25cm-1处属于芳香杂环化合物中C-N伸缩振动特征吸收峰。而在AuAgNCs@APAP谱图中，C-N的伸缩振动特征峰1241.56cm-1，仲酰胺N-H的弯曲振动特征峰1561.06cm-1，-OH的面内弯曲振动1015.02cm-1特征，芳香杂环化合物中C-N伸缩振动特征吸收峰1326.25cm-1，都没有观察到，而且仲酰胺N-H的伸缩振动特征峰3321.76cm-1，C＝O伸缩振动特征吸收峰1650.21cm-1也都有所偏移。这表明AuAgNCs@APAP成功制备。图2给出了AuAgNCs@APAP的最佳激发峰和发射峰，分别为308nm和428nm。图3是在激发波长为308nm条件下测定的APAP，AgNCs@APAP，AuNCs@APAP，AuAgNCs@APAP的荧光发射光谱图。由图可知，AuAgNCs@APAP的荧光强度与相同合成条件下制备的AgNCs@APAP和AuNCs@APAP荧光强度相比，显著提高。图4是不同激发下AuAgNCs@APAP的荧光发射光谱图。由图可知，改变激发波长，AuAgNCs@APAP的发射波长是不变的，表明观察到的荧光信号来自于自身的荧光信号而不是散射效应，进一步证明了成功合成AuAgNCs@APAP。以硫酸奎宁(0.1MH2SO4，Φref＝0.54)作为标准，在308nm激发波长处AuAgNCs@APAP的荧光量子产率为8.06％。AuAgNCs@APAP的稳定性。AuAgNCs@APAP在365nm的紫外灯照射90min，AuAgNCs@APAP的荧光强度基本上保持不变。AuAgNCs@APAP4℃保存3个月，荧光强度几乎没有发生变化。300mMNaCl介质对AuAgNCs@APAP的荧光强度也没有影响。图5是溶液pH对AuAgNCs@APAP荧光强度的影响。由图可知，溶液呈酸性，荧光强度降低，溶液呈碱性，荧光强度增加。基于此，建立了该荧光探针对酸性氨基酸和碱性氨基酸的测定方法。氨基酸的测定(1)碱性氨基酸(Arg，Lys，His)的测定取1.00mL稀释100倍的AuAgNCs@APAP分别与一定体积的Arg，Lys，His混合，定容至4.00mL。在35℃下反应30min后，在激发波长308nm处测定荧光强度。Arg线性范围5-95μM，回归方程为y＝6.4559x+102.47，相关系数R2＝0.9912。检出限LOD＝3.04μM，对加入Arg浓度为25μM，75μM分别平行测定11次，相对标准偏差分别为1.20％和3.71％。Lys线性范围5-100μM，回归方程为y＝6.2759x+119.15，相关系数R2＝0.9963。检出限LOD＝3.13μM，对加入Lys浓度为25μM，75μM分别平行测定11次，相对标准偏差分别为0.87％和3.33％。His线性范围60-950μM，回归方程为y＝0.5277x+397.2，相关系数R2＝0.9947。检出限LOD＝19.62μM，对加入His浓度为350μM分别平行测定11次，相对标准偏差为1.04％。(2)酸性氨基酸(Asp，Glu)的测定取1.00mL稀释100倍的AuAgNCs@APAP和0.38mL，1mM的Arg，然后分别加入不同浓度的Asp，Glu，定容至4.00mL，在35℃下反应50min后，在激发波长308nm处测定荧光强度。Asp线性范围2.5-90μM，回归方程为y＝本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种AuAgNCs@APAP荧光探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取0.235 mL 24.28 mmol/L HAuCl4溶液和0.235 mL 24.28 mmol/L AgNO3溶液于100 mL烧杯中，加入2.17 mL 50 mmol/L对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至10 mL，10 ℃下反应2 h，溶液由黄色变为灰色，用0.45 μm的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用1 kDa透析袋透析，即得所述AuAgNCs@APAP荧光探针。
【技术特征摘要】
1.一种AuAgNCs@APAP荧光探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取0.235mL24.28mmol/LHAuCl4溶液和0.235mL24.28mmol/LAgNO3溶液于100mL烧杯中，加入2.17mL50mmol/L对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至10mL，...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶存玲，王远飞，王丽凯，崔伟博，王全坤，刘建明，岳园园，王治科，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：河南,41
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