The present invention relates to a method for fermentation of D tagatose by Saccharomyces cerevisiae. The steps are as follows: the codon of GalE gene optimized according to the codon preference of Saccharomyces cerevisiae is constructed on the Saccharomyces cerevisiae expression vector YCplac33, and the vector 1 is obtained. The expression vector YCplac33 contains ampicillin resistance gene of Escherichia coli and wine-making. The recombinant vector 1 was transformed into wild-type Saccharomyces cerevisiae W303. According to the screening marker URA3 of Saccharomyces cerevisiae, positive monoclones were screened, and then the yeast genome was extracted after positive monoclonal culture. The final fermentation strain was obtained by PCR verification under certain conditions. When the bacteria grow to a certain concentration, the D tag sugar is collected and purified by adding the corresponding substrate fructose at 35 36 C and 220 250rpm for 5 days. The process is separated and purified only in the last step of production, and the purification process is simple.
【技术实现步骤摘要】
一种酿酒酵母发酵生产D-塔格糖的方法
本专利技术涉及一种酿酒酵母发酵生产D-塔格糖的方法,属于合成生物学领域。
技术介绍
稀少糖(RareSugar)是自然界中存在但含量极少的一类单糖(糖的最小单位)和糖醇,和自然界大量存在的葡萄糖和果糖相比,非常稀少,约有50个种类。其味类似于蔗糖,但具有热量低、稳定性高、甜味协调、无吸湿性、无致龋齿性、耐受性高等优点,可以弥补传统甜味剂的不足,被广泛应用于保健食品、婴幼儿配方食品,乳制品,饮料等食品中,尤其对改善特殊人群的饮食起到重要作用。稀少糖的益处还有很多,例如可以减少有毒物质(如内毒素、氨类等)的形成,对肠粘膜细胞和肝具有保护作用,可以调节肠道菌群,让某些微生物定植于肠道,并为其提供适宜的栖息环境,促进肠黏膜免疫功能的完善和影响、参与人体的多种代谢功能,从而防止病变肠癌的发生,增强机体免疫力。D-塔格糖是稀少糖的一种,近年被发现的一种具有特殊保健功能的功能甜味剂,其甜度与蔗糖相似,而产生的热量只为蔗糖的1/3,所以被称之为低热量甜味剂,具有能量低,可改善肠道菌群,降低血糖,抗龋齿等功能。2001年被美国食品与药物管理局(U.S.FoodandDrugAdministration,FDA)确定为普遍公认安全食品(GRAS)。随后D-塔格糖在美国被通用于健康饮料及酸乳、果汁等产品,作为蔗糖的代用品。同时还被广泛应用于糖尿病专用食品、减肥食品、口香糖、谷物食品、饮料、肉制品、糖果等工业中,并在医药中被用于咳嗽糖浆、粉剂、起泡剂、固定假牙的豁合剂及口腔消毒剂中。目前D-塔格糖在国际市场上的市场份额正逐年增加,国内市场还正 ...
【技术保护点】
1.一种酿酒酵母发酵生产D‑塔格糖的方法,其特征在于:所述方法步骤如下:1)将根据酿酒酵母密码子偏好性优化基因GalE的密码子构建在酿酒酵母表达载体YCplac33上,得到载体1,所述表达载体YCplac33上带有大肠杆菌的氨苄霉素抗性基因和酿酒酵母的筛选标记URA3基因;2)将上述重组的载体1转入野生型酿酒酵母W303中,根据酿酒酵母的筛选标记URA3,筛选阳性单克隆,再将阳性单克隆培养后提取该酵母基因组,进一步通过PCR验证,得到最终的发酵菌株;3)将验证成功的单阳性单克隆菌株转接至液体培养基,在一定条件下培养;4)添加相应的底物果糖,35‑36℃,220‑250rpm反应5天,收集产生的D‑塔格糖,对产物塔格糖进行分离提纯。
【技术特征摘要】
1.一种酿酒酵母发酵生产D-塔格糖的方法,其特征在于:所述方法步骤如下:1)将根据酿酒酵母密码子偏好性优化基因GalE的密码子构建在酿酒酵母表达载体YCplac33上,得到载体1,所述表达载体YCplac33上带有大肠杆菌的氨苄霉素抗性基因和酿酒酵母的筛选标记URA3基因;2)将上述重组的载体1转入野生型酿酒酵母W303中,根据酿酒酵母的筛选标记URA3,筛选阳性单克隆,再将阳性单克隆培养后提取该酵母基因组,进一步通过PCR验证,得到最终的发酵菌株;3)将验证成功的单阳性单克隆菌株转接至液体培养基,在一定条件下培养;4)添...
【专利技术属性】
技术研发人员:夏文豪,陈贤情,蒿飞,杨月,王筱,王文,
申请(专利权)人:嘉兴欣贝莱生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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