一种VEGF-B单克隆抗体及试剂盒制造技术

技术编号:19383806 阅读:2 留言:0更新日期:2018-11-10 00:13
本发明专利技术公开了一种VEGF‑B单克隆抗体,其重链的氨基酸序列如VH:2VWE_B所示,其轻链的氨基酸序列如VL:AF099134_1所示。所述VEGF‑B单克隆抗体具有较高的亲和力,特异性强,在体外具有良好的生物学活性。将本发明专利技术VEGF‑B单抗与VEGF‑B多抗建立的VEGF‑B蛋白检测试剂盒可作为肝癌的辅助诊断及动态监测工具。

A VEGF-B monoclonal antibody and kit

The present invention discloses a monoclonal antibody against vascular endothelial growth factor B. Its heavy chain amino acid sequence is shown as VH:2VWE_B and its light chain amino acid sequence is shown as VL:AF099134_1. The monoclonal antibody against VEGF_B has high affinity, strong specificity and good biological activity in vitro. The detection kit of VEGF B protein established by the present invention can be used as an auxiliary diagnostic and dynamic monitoring tool for hepatocellular carcinoma.

【技术实现步骤摘要】
一种VEGF-B单克隆抗体及试剂盒
本专利技术属于生物
,具体涉及一种VEGF-B单克隆抗体及VEGF-B蛋白检测试剂盒。
技术介绍
血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是一种具有高度生物活性的一种二聚体阳离子糖蛋白。VEGF家族包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F和胎盘生长因子(Placentalgrowthfactor,PlGF)。人VEGF-B基因位于染色体11q13上,全长4kb,有7个外显子,被6个内含子间隔。其启动子区与VEGF-A的启动子区存在一些重要的差别,这可能导致其对生理性刺激的不同反应。两者的启动子区都包含一个CpG岛,及转录因子Sp1、Ap-2的结合位点。VEGF-B启动子区包含Egr-1位点,但缺少VEGF-A具有的HIF-1a和Ap-1位点。因此诸如缺氧、寒冷等能诱导VEGF-A表达的环境刺激阴虚及能诱导VEGF-A表达的分子如:生长因子、前列腺素E2及类固醇激素并不能诱导VEGF-B表达。目前已发现了由于编码VEGF-BmRNA的两种不同剪接方式而产生的两个不同的转录子,即VEGF-B167和VEGF-B186,分别含167,186个氨基酸残基。VEGF-B167蛋白的分子量分别为21kD,可以与VEGF的单体形成二硫键连接的异源二聚体VEGF-B167·VEGF165的异二聚体在缺少肝素时不能分泌到细胞外,而VEGF165的同源二聚体可自由分泌到细胞外,由此看来,VEGF-B167对异二聚体的分泌起着决定性作用,而VEGF·VEGF-B167异二聚体的形成可能控制着VEGF的生物利用度。VEGF-B能刺激胸苷掺入人脐静脉内皮细胞或牛毛细血管内皮细胞DNA内,提示VEGF-B167从癌旁到肝癌的表达量有递增趋势,说明VEGF-B167在此过程中的作用较VEGF-B186更重要;VEGF-B167高表达促进门静脉瘤栓形成和肿瘤转移;VEGF-B167低表达患者预后较好,术后总生存率和无瘤生存率较高。成人肝脏的血管非常丰富,血管的侧面是内皮细胞相连的肝窦与间隙相隔开来而在肝癌组织中的肝窦与正常肝组织不同,不再是由不连续的扁平内皮细胞覆盖,而是由连续的内皮细胞围绕而成的常规毛细血管结构。因此,血管生成作用在肝癌中较为典型。VEGF-B对血管生成存在正性上调作用,其对于肝癌的血管生成也应存在一定的作用。VEGF-B在内的VEGF家族及其受体分子生物学功能研究的不断深入,VEGF-B检测在肝癌等疾病的临床治疗监测中发挥积极作用。VEGF-B又有与VEGF-A同样促血管生成的作用,因此联合检测VEGF-A、VEGF-B,能降低VEGF-A检测阳性中的非肿瘤特异性干扰,在肿瘤临床检测和辅助诊断中有临床意义。近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速,已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。用于检测血清学指标的方法主要包括放射性同位素免疫分析、酶联免疫吸附法、和化学发光免疫分析。这些方法既可以作为初筛试验也可以作为确认试验,其中化学发光法具有检测线性范围宽、检测仪器简单、操作方便等优点。肝癌临床监测的同类产品其特异性和亲和力等方面还存在进一步的提升可能,基于此,我们开发了VEGF-B测定试剂盒(化学发光法)及其制备方法。
技术实现思路
为了克服现有中的上述问题,本专利技术提供了一种VEGF-B单克隆抗体,具有较高的亲和力,在体外具有良好的生物学活性;开发前景广阔。一种VEGF-B单克隆抗体,其特征在于,所述抗体的重链可变区氨基酸序列为:ProValSerGlnProAspAlaProGlyHisGlnArgLysValValSerTrpIleAspValTyrThrArgAlaThrCysGlnProArgGluValValValProLeuThrValGluLeuMetGlyThrValAlaLysGlnLeuValProSerCysValThrValGlnArgCysGlyGlyCysCysProAspAspGlyLeuGluCysValProThrGlyGlnHisGlnValArgMetGlnIleLeuMetIleArgTyrProSerSerGlnLeuGlyGluMetSerLeuGluGluHisSerGlnCysGluCysArgProLysLysLysAspSerAlaValLysProAspSerProArgProLeuCysProArgCysThrGlnHisHisGlnArgProAspProArgThrCysArgCysArgCysArgArgArgSerPheLeuArgCysGlnGlyArgGlyLeuGluLeuAsnProAspThrCysArgCysArgLysLeuArgArg;轻链可变区氨基酸序列为:TrpIleAspValTyrAlaArgAlaThrCysGlnProArgGluValValValProLeuAsnMetGluLeuMetGlyThrValAlaLysGlnLeuValProSerCysValThrValGlnArgCysGlyGlyCysCysProAspAspGlyLeuGluCysValProThrGlyGlnHisGlnValArgMetGlnIleLeuMetIle。进一步地,本专利技术还提供了编码上述轻链可变区和重链可变区氨基酸序列的多核苷酸。进一步地,本专利技术还提供了包含上述多核苷酸的重组DNA表达载体,所述重组DNA表达载体中包含编码VEGF-B单克隆抗体重链可变区、轻链可变区和和抗体恒定区的DNA序列。进一步地,本专利技术提供了包含上述VEGF-B单克隆抗体的检测试剂盒。该试剂盒制备方法是:以Nunc化学发光反应板为反应支持物,将VEGF-B单克隆抗体用0.5mPBS稀释至2.5ug/ml,以100ul/孔包被至化学发光空白板中,4℃下24小时后,用0.9%Nacl洗板3次,加入含有1%BSA的0.5molPBS封闭,4℃下12小时后甩干。本专利技术具有以下优点:(1)本专利技术的VEGF-B单克隆抗体,具有较高的亲和力,特异性强,在体外具有良好的生物学活性。(2)包含有VEGF-B单克隆抗体的检测试剂盒检测方法简便、准确性强、成本低。(3)将VEGFb167与VEGF-B多抗建立VEGF-B蛋白检测试剂盒可作为肝癌辅助诊断及临床监测工具。附图说明图1是VEGFa167抗体剂量-反应体系示意图。图2是VEGFa167抗体质控血清检测散点图。具体实施方式借助于下述具体实施方式可更好地理解本专利技术,然而,这些具体实施方式仅用于举例说明本专利技术,不应被解释为对本专利技术的限制。实施例1一、VEGF-B抗原的制备:(1)根据GenBank数据库中人VEGF-B(U52819.1)的序列设计一对引物,上游引物为vP:5’-CATGAGCCCTCTGCTCCGCCGCCTGCT-3’,引入XhoI酶切位点;下游引物为vP:5’-CCCAGTGGGGGAACAAAGAGGAG-3’,引入EcoRI酶切位点,通过RT-PCR方法从人肝细胞中提取总RNA,然后反转录成cDNA,以cDNA为模板,用PyrobestDNA聚合本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种VEGF‑B单克隆抗体,其特征在于,所述抗体的重链可变区氨基酸序列为:Pro Val Ser Gln Pro Asp Ala Pro Gly His Gln Arg Lys Val Val Ser Trp Ile Asp Val Tyr Thr Arg Ala Thr Cys Gln Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Thr Val Glu Leu Met Gly Thr Val Ala Lys Gln Leu Val Pro Ser Cys Val Thr Val Gln Arg Cys Gly Gly Cys Cys Pro Asp Asp Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Gly Gln His Gln Val Arg Met Gln Ile Leu Met Ile Arg Tyr Pro Ser Ser Gln Leu Gly Glu Met Ser Leu Glu Glu His Ser Gln Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Ser Pro Arg Pro Leu Cys Pro Arg Cys Thr Gln His His Gln Arg Pro Asp Pro Arg Thr Cys Arg Cys Arg Cys Arg Arg Arg Ser Phe Leu Arg Cys Gln Gly Arg Gly Leu Glu Leu Asn Pro Asp Thr Cys Arg Cys Arg Lys Leu Arg Arg;轻链可变区氨基酸序列为:Trp Ile Asp Val Tyr Ala Arg Ala Thr Cys Gln Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Asn Met Glu Leu Met Gly Thr Val Ala Lys Gln Leu Val Pro Ser Cys Val Thr Val Gln Arg Cys Gly Gly Cys Cys Pro Asp Asp Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Gly Gln His Gln Val Arg Met Gln Ile Leu Met Ile。...

【技术特征摘要】
1.一种VEGF-B单克隆抗体,其特征在于,所述抗体的重链可变区氨基酸序列为:ProValSerGlnProAspAlaProGlyHisGlnArgLysValValSerTrpIleAspValTyrThrArgAlaThrCysGlnProArgGluValValValProLeuThrValGluLeuMetGlyThrValAlaLysGlnLeuValProSerCysValThrValGlnArgCysGlyGlyCysCysProAspAspGlyLeuGluCysValProThrGlyGlnHisGlnValArgMetGlnIleLeuMetIleArgTyrProSerSerGlnLeuGlyGluMetSerLeuGluGluHisSerGlnCysGluCysArgProLysLysLysAspSerAlaValLysProAspSerProArgProLeuCysProArgCysThrGlnHisHisGlnArgProAspProArgThrCysArgCysArgCysArgArgArgSerPheLeuArgCysGlnGlyArgGlyLeuGluLeuAsnProAspThrCysArgCysArg...

【专利技术属性】
技术研发人员:吕鹏辉
申请(专利权)人:浙江众意生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:浙江,33

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