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一种生长抑素的制备方法及其药物组合物技术

技术编号:19383801 阅读:3 留言:0更新日期:2018-11-10 00:13
本发明专利技术属于生物医药技术领域,具体涉及一种生长抑素的制备方法及其药物组合物,该方法采用阳离子交换树脂柱、阴离子交换树脂柱洗脱的方法获得生长抑素;本发明专利技术提供的纯化生长抑素方法操作简单易行,获得的生长抑素纯度可达99.7%、收率可达60%以上。本发明专利技术所述组合物制得的冻干粉针剂溶解性好、稳定性好、复溶性好;由该组合物制得的冻干粉针剂使用方便,利于贮运,其制备方法简单,易于工业化生产,且生产成本低。

Preparation method of somatostatin and pharmaceutical composition thereof

The invention belongs to the field of biomedical technology, in particular to a preparation method of somatostatin and its pharmaceutical composition. The method uses cation exchange resin column and anion exchange resin column for elution to obtain somatostatin. The purification method of somatostatin provided by the invention is simple and easy to operate, and the obtained somatostatin is obtained. The purity can reach 99.7%, and the yield can reach more than 60%. The lyophilized powder injection prepared by the composition of the invention has good solubility, stability and re-solubility; the lyophilized powder injection prepared by the composition is convenient to use, convenient to store and transport, simple in preparation method, easy in industrial production and low in production cost.

【技术实现步骤摘要】
一种生长抑素的制备方法及其药物组合物
本专利技术属于生物医药
,具体涉及生长抑素的制备方法及含有生长抑素的药物组合物。
技术介绍
生长抑素(生长素释放抑制素,GHRIH,growthhormonerelease-inlease-inhibitinghormone,或somatostatin)是由116个氨基酸的大分子肽裂解而来的十四肽,其分了结构呈环状,在第3位和第14位半胱氨酸之间有一个二硫键,其化学结构如下,分子式为C76H104N18O19S2,相对分子质量为1637.89,为白色粉末。生长抑素是一种生长抑制激素,最初由Brazen等1973年从动物下丘脑中发现,主要有14和28个氨基酸两种活性形式。它广泛分布于中枢和外周神经系统以及胃肠道内,亦存在于大鼠和人的心脏中,在胃肠道粘膜内,生长抑素由D细胞所释放,其含量以胃窦和胃体部最高。生长抑素可抑制蛙皮素、α-脱氧葡萄糖等的分泌,降低肾素活性,产生降压效应;生长抑素对离体豚鼠心脏有负性肌力作用,在利尿磺胺存在时它可以进一步降低其心脏指数和动脉血压;它可以通过调节消化道激素分泌,稳定细胞膜,对其起到保护作用。此外,生长抑素对全部胃肠道的分泌均有抑制作用。目前制备获得的生长抑素的纯度和收率都较低,不能满足工业化生产的需求,特别是无法大规模纯化生长抑素,制约了生长抑素的应用。因此,提供一种纯化生长抑素的方法具有重要意义。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题,我们进行了大量的试验探索,发现一种新的生长抑素的纯化方法,本专利技术得到的生长抑素纯度更高。本专利技术的另一个目的在于提供一种生长抑素药物组合物及其制备方法。具体而言,本专利技术提供了:一种生长抑素的纯化方法,包括以下步骤:步骤1、用第一缓冲液洗涤阳离子交换树脂柱后,用第一缓冲液溶解生长抑素粗品,并按≤50g生长抑素粗品/L树脂/循环上样;用第二缓冲液洗脱,获得第一洗脱物;所述第一、二缓冲液为磷酸钠缓冲液;步骤2:用磷酸盐缓冲液将洗脱液的pH值到4.5~6.5,得到溶液;步骤3:用第三缓冲液洗涤阴离子交换树脂柱进行预平衡后,用第三缓冲液溶解步骤2所得产物,并按30g生长抑素粗品/L树脂/循环进行上样;用第四缓冲液进行洗脱,获得第二洗脱物,浓缩干燥即得生长抑素;所述第三、四缓冲液为醋酸钠缓冲液。所述阳离子交换树脂为羧甲基琼脂糖柱;所述阴离子交换树脂为琼脂糖凝胶柱。所述步骤2中的磷酸盐缓冲液的pH值为5.0~7.0。所述第一、第二、三、四缓冲液的pH值为4.0~6.0。所述第二、四缓冲液中含有氯化钠。一种含有生长抑素的药物组合物包含生长抑素、赋形剂,所述的赋形剂为海藻糖、半乳糖组成的混合物。所述组合物包含以下重量份的成分:0.8~1重量份生长抑素、30~50重量份赋形剂。所述赋形剂中海藻糖为α,α-双羧海藻糖、β,β-双羧异海藻糖或α,β-双羧海藻糖中的一种或几种。所述赋形剂中海藻糖:半乳糖的重量比为(0.5~0.9):1。所述的组合物的pH值为4.5~6.5。一种含有生长抑素的药物组合物制备冻干粉针的方法,包括以下步骤:1)按处方量称取赋形剂溶解于2/3处方量的注射用水中,搅匀;2)待上述配制液降至室温后,加入处方量生长抑素,测pH值,调节pH至4.5~6.0,加入注射用水至全量,用微孔滤膜精滤,冻干,得冻干粉针。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果:1、本专利技术提供的纯化生长抑素方法操作简单易行,获得的生长抑素纯度可达99.7%、收率可达60%以上。2、由该组合物制得的冻干粉针剂稳定性良好,复溶性好;由该组合物制得的冻干粉针剂使用方便,利于贮运,其制备方法简单,易于工业化生产,且生产成本低。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明,但这并非是对本专利技术的限制,本领域技术人员根据本专利技术的基本思想,可以做出各种修改或改进,但是只要不脱离本专利技术的基本思想,均在本专利技术的范围之内。生长抑素粗品购自杭州肽佳生物科技有限公司,经检测其HPLC纯度为93.02%。实施例1步骤1:用pH6.0的25mM磷酸钠缓冲液(第一缓冲液)洗涤羧甲基琼脂糖柱进行预平衡后,用第一缓冲液溶解生长抑素粗品,按40g生长抑素粗品/L树脂/循环进行上样;用10-60%梯度第二缓冲液(20mM磷酸钠、110mM氯化钠,pH6.5)经20倍柱体积;流速为7mL/分钟,并且洗脱液通过在215nm处检测来监控,收集特征峰洗脱液;步骤2:用pH值为7.0磷酸盐缓冲液将洗脱液的pH调节到5.0,得到溶液;步骤3:用pH4.0的20mM醋酸钠缓冲液(第三缓冲液)洗涤苯基琼脂糖凝胶HP柱进行预平衡后,用第三缓冲液溶解步骤2所得溶液,按照30g生长抑素粗品/L树脂/循环进行上样;用0-20%第四缓冲液(20mM醋酸钠、1M氯化钠,pH7.5)的梯度经25倍柱体积洗脱;流速为5mL/分钟并且洗脱液通过在215nm处UV检测来监控;收集特征峰洗脱液,浓缩干燥,得纯度为99.93%的生长抑素25.73g,纯化总收率为64.32%。实施例2步骤1:用pH6.0的25mM磷酸钠缓冲液(第一缓冲液)洗涤羧甲基琼脂糖柱进行预平衡后,用第一缓冲液溶解生长抑素粗品,按100g生长抑素粗品粗品/L树脂/循环进行上样;0-40%梯度第二缓冲液经20倍柱体积,然后40-80%第二缓冲液经3倍柱体积的梯度进行洗脱;流速为7mL/分钟,并且洗脱液通过在215nm处检测来监控;收集特征峰洗脱液;步骤2:用pH值为7.0磷酸盐缓冲液将洗脱液的pH值到6.0,得到溶液;步骤3:用pH4.0的20mM醋酸钠缓冲液(第三缓冲液)洗涤苯基琼脂糖凝胶HP柱进行预平衡后,用第三缓冲液溶解步骤2所得产物,按20g生长抑素粗品/L树脂/循环进行上样;用0-20%第四缓冲液(20mM醋酸钠、1M氯化钠,pH4.5)的梯度经25倍柱体积洗脱;流速为5mL/分钟并且洗脱液通过在215nm处UV检测来监控;收集特征峰纯洗脱液,浓缩干燥,得纯度为99.81%的生长抑素63.21g,纯化总收率为63.21%。实施例3步骤1:用pH6.0的25mM磷酸钠缓冲液(第一缓冲液)洗涤羧甲基琼脂糖柱进行预平衡后,用第一缓冲液溶解生长抑素,按50g生长抑素/L树脂/循环进行上样;用10-60%第二缓冲液(20mM磷酸钠、110mM氯化钠,pH6.5)的梯度经20倍柱体积;流速为7mL/分钟,并且洗脱液通过在215nm处检测来监控;收集特征峰洗脱液;步骤2:用pH值为6.0磷酸盐缓冲液将洗脱液的pH值到4.5,得到溶液;步骤3:用pH4.0的20mM醋酸钠缓冲液(第三缓冲液)洗涤苯基琼脂糖凝胶HP柱进行预平衡后,用第三缓冲液溶解步骤2所得产物,按30g生长抑素/L树脂/循环进行上样;用0-20%的第四缓冲液(20mM醋酸钠、1M氯化钠,pH4.5)的梯度经25倍柱体积洗脱;流速为5mL/分钟并且洗脱液通过在215nm处UV检测来监控;收集特征峰纯洗脱液,浓缩干燥,得纯度为99.81%的生长抑素31.89g,纯化总收率为63.78%。测试例1:有关物质取本品,加水溶解并制成每1ml中含0.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取2ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液,照高效液相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生长抑素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1、用第一缓冲液洗涤阳离子交换树脂柱后,用第一缓冲液溶解生长抑素粗品,并按≤50g生长抑素粗品/L树脂/循环上样;用第二缓冲液洗脱,获得第一洗脱液;所述第一、二缓冲液为磷酸钠缓冲液;步骤2:用磷酸盐缓冲液将洗脱液的pH值到4.5~6.5,得到溶液;步骤3:用第三缓冲液洗涤阴离子交换树脂柱进行预平衡后,用第三缓冲液溶解步骤2的溶液,并按30g生长抑素粗品/L树脂/循环进行上样;用第四缓冲液进行洗脱,获得第二洗脱物,浓缩干燥即得生长抑素;所述第三、四缓冲液为醋酸钠缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种生长抑素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1、用第一缓冲液洗涤阳离子交换树脂柱后,用第一缓冲液溶解生长抑素粗品,并按≤50g生长抑素粗品/L树脂/循环上样;用第二缓冲液洗脱,获得第一洗脱液;所述第一、二缓冲液为磷酸钠缓冲液;步骤2:用磷酸盐缓冲液将洗脱液的pH值到4.5~6.5,得到溶液;步骤3:用第三缓冲液洗涤阴离子交换树脂柱进行预平衡后,用第三缓冲液溶解步骤2的溶液,并按30g生长抑素粗品/L树脂/循环进行上样;用第四缓冲液进行洗脱,获得第二洗脱物,浓缩干燥即得生长抑素;所述第三、四缓冲液为醋酸钠缓冲液。2.根据权利要求1所述的一种生长抑素的制备方法,其特征在于,所述阳离子交换树脂为羧甲基琼脂糖柱;所述阴离子交换树脂为琼脂糖凝胶柱。3.根据权利要求1所述的一种生长抑素的纯化方法,其特征在于,所述步骤2中的磷酸盐缓冲液的pH值为5.0~7.0。4.根据权利要求1所述的一种生长抑素的制备方法,其特征在于,所述第一、第二、三、四缓冲液的pH值为4.0~6.0。5.根据权利要求1所述的一种生...

【专利技术属性】
技术研发人员:宋雪萍
申请(专利权)人:宋雪萍
类型:发明
国别省市:北京,11

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