3,3′-(3,5二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素及其应用制造技术

技术编号:19383626 阅读:3 留言:0更新日期:2018-11-10 00:10
本发明专利技术公开了3,3′‑(3,5二氟苯亚甲基)‑双‑4‑羟基香豆素及其应用。本发明专利技术制备了3,3′‑(3,4‑二氯苯亚甲基)‑双‑4‑羟基香豆素并发现其具有良好的体外和体内活性,对于白血病肿瘤细胞具有较强的抑制作用,且该化合物毒性较小,安全性好。

3,3 '- (3,5 two fluoromethylene) - double -4- hydroxycoumarin and its application

The invention discloses 3,3 '- (3,5 two fluoromethylene) - bi - 4 - hydroxyhydroxycoumarin and its application. The present invention has prepared 3,3'(3,4'-dichlorobenzomethylene), bis_4'-hydroxycoumarin and found that it has good activity in vitro and in vivo, has strong inhibitory effect on leukemia cancer cells, and the compound has less toxicity and good safety.

【技术实现步骤摘要】
3,3′-(3,5二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素及其应用
本专利技术涉及3,3′-(3,5二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素用于制备抗白血病药物的应用。
技术介绍
白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞增殖失控、分化障碍和凋亡受阻,停滞在细胞发育的不同阶段,抑制了正常造血功能。近年来,我国白血病的患病率为2.76/10万,在恶性肿瘤死亡率中,白血病在男性和女性中分别居第6位和第8位,在儿童及35岁以下成人中居第l位。临床上治疗白血病的首选药物为伊马替尼和尼洛替尼,是酪氨酸激酶抑制剂。然而该类药物只针对15-20%的费城染色体阳性Bcr-Abl融合基因的白血病患者疗效较好,其耐药问题也给临床治疗带来了严峻挑战。
技术实现思路
本专利技术的3,3′-(3,5二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素化学结构如式Ⅰ所示。专利技术人研究意外发现3,3′-(3,5二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素具有抗白血病的活性,基于该发现,本专利技术提供了3,3′-(3,5二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素用于制备抗白血病药物的应用。相对于现有技术,本专利技术属于意外发现,所发现的3,3′-(3,4-二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素具有良好的体外和体内抗白血病活性,且该化合物毒性较小,安全性好。附图说明图1为50μg/ml3,3′-(3,5二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素(化合物2)处理K562细胞12和24小时后杀死肿瘤细胞的形态图;图2化合物2对K562细胞增殖的抑制作用分析结果;图3为不同浓度化合物2处理K562细胞24小时后的流式细胞图;图4为不同浓度化合物2处理K562细胞24小时后对细胞凋亡影响的分析结果;图5为50μg/ml化合物2处理K562细胞24小时后诱导细胞凋亡的透射电镜图;图6不同浓度化合物2诱导慢性粒细胞白血病动物骨髓细胞凋亡的结果;A为慢性粒细胞白血病模型小鼠的骨髓细胞收集示意图;B为化合物2对细胞凋亡影响的流式细胞检测图;C为化合物2诱导白血病模型小鼠和正常对照小鼠骨髓细胞凋亡的结果分析;图7化合物2与伊马替尼联合给药诱导白血病模型动物骨髓细胞凋亡的流式细胞图;图8化合物2与伊马替尼联合给药诱导白血病模型动物骨髓细胞凋亡的分析结果;图9化合物2与伊马替尼单独或联合给药后白血病模型动物生存曲线图。具体实施方式以下是专利技术人提供的具体实施例,以对本专利技术的技术方案做进一步解释说明。实施例1:本专利技术的化合物的合成路线及方法R=H、3,5-2F、3,5-2Cl、3,5-2Br、3,5-2OCH3或3,4-2CF3。合成方法:将20mmol4-羟基香豆素和100mL无水乙醇混合后加热至4-羟基香豆素溶解后,加入10mmol系列含有不同取代基芳香醛类(化合物R=H的合成方法没有该步骤),加热回流,有白色固体颗粒析出,继续加热,待反应结束,冷却、抽滤,再用乙醇重结晶,最终得纯白色颗粒状结晶。实施例2:结构鉴定利用核磁共振波谱(NMR)对上述合成的系列4-羟基香豆素化合物进行分子量、结构和纯度等鉴定。化合物1:3,3′-苯亚甲基-双-4-羟基香豆素3,3′-Benzylidene-bis-(4-hydroxycoumarin)1HNMR(CDCl3,δ,ppm):11.528(s,1H),11.299(s,1H),7.994-8.080(q,2H),7.606-7.649(m,2H),7.215-7.421(m,9H),6.104(s,1H).化合物2:3,3′-(3,5-二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素3,3′-(3,5-Difluorobenzylidene)-bis-(4-hydroxycoumarin)1HNMR(CDCl3,δ,ppm):11.666(s,1H),11.323(s,1H),8.033-8.109(q,2H),7.660-7.701(m,2H),7.427-7.462(t,4H),6.731-6.790(m,3H),6.051(s,1H).化合物3:3,3′-(3,5-二氯苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素3,3′-(3,5-Dichlorobenzylidene)-bis-(4-hydroxycoumarin)1HNMR(CDCl3,δ,ppm):11.630(s,1H),11.314(s,1H),8.042-8.114(m,2H),7.666-7.705(q,2H),7.432-7.468(t,4H),7.307-7.309(d,1H),7.106-7.113(t,2H),6.036(s,1H).化合物4:3,3′-(3,5-二溴苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素3,3′-(3,5-Dibromobenzylidene)-bis-(4-hydroxycoumarin)1HNMR(CDCl3,δ,ppm):11.616(s,1H),11.306(s,1H),8.042-8.111(q,2H),7.666-7.705(t,2H),7.608(s,1H),7.411-7.467(q,4H),7.294(s,2H),6.049(s,1H).化合物5:3,3′-(3,5-二甲氧基苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素3,3′-(3,5-Dimethoxybenzylidene)-bis-(4-hydroxycoumarin)1HNMR(CDCl3,δ,ppm):11.645(s,1H),11.269(s,1H),8.027-8.090(m,2H),7.628-7.671(m,2H),7.417-7.438(d,4H),6.393(s,3H),6.060(s,1H),3.743(s,6H).化合物6:3,3′-(3,5-二氟甲基苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素3,3′-(3,5-Dimethoxybenzylidene)-bis-(4-hydroxycoumarin)1HNMR(CDCl3,δ,ppm):11.645(s,1H),11.269(s,1H),8.027-8.090(m,2H),7.628-7.671(m,2H),7.417-7.438(d,4H),6.393(s,3H),6.060(s,1H),3.743(s,6H).本专利技术以下实施例用细胞株、实验动物、试剂与耗材说明:用于本实验的人慢性粒细胞白血病K562细胞株和人脐静脉内皮细胞HUVECs细胞株由空军军医大学西京医院输血科和空军军医大学药学系药理学教研室保存。Tall-tTA以及Tet0-BCR/ABL1转基因小鼠由空军军医大学基础医学部遗传发育教研室保存。细胞培养相关试剂:RPMI-1640培养基、MEM培养基,1×磷酸盐缓冲液(1×PBS)购自美国Corning公司;胎牛血清和0.25%胰蛋白酶购自美国Gibco公司。细胞增殖和凋亡检测主要试剂:MTT、磺酰罗丹明B(SulforhodamineB,SRB)、三氯乙酸(TCA)、Tris-Base购自美国Sigma公司;冰乙酸购自北京化工厂。AnnexinV-FITC/PI检测试剂盒购自南京凯基公司。4-羟基香豆素化合物溶液配制:称量上述6种化合物10mg,加入1mlDMSO,涡旋震荡使其溶解,即为10mg/ml浓度溶液。过滤除菌后,置于-80°保存,使用时根据实验设计进行稀释。实施例3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.3,3′‑(3,5二氟苯亚甲基)‑双‑4‑羟基香豆素化合物,该化合物的结构式如式Ⅰ所示:

【技术特征摘要】
1.3,3′-(3,5二氟苯亚甲基)-双-4-羟基香豆素化合物,该化合物的结构式如式Ⅰ所...

【专利技术属性】
技术研发人员:辛佳佳胡兴斌李明凯尹文
申请(专利权)人:中国人民解放军第四军医大学
类型:发明
国别省市:陕西,61

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