一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法技术

技术编号:19383563 阅读:2 留言:0更新日期:2018-11-10 00:08
本发明专利技术涉及一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法,它包括以下步骤:(a)将邻苯二甲醇、二氯甲烷、咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷混合后进行反应;过层析柱纯化得化合物II;(b)加入甲苯磺酰氨基甲酸甲酯、三苯基膦和偶氮二甲酸二乙酯进行反应,浓缩后过柱纯化得到化合物III;(c)将所述化合物III溶于甲醇,降温至≤0℃,加入碳酸钾进行反应,加水淬灭;(d)用乙酸乙酯提取多次后合并有机相纯化得化合物V;(e)浓缩过层析柱纯化得化合物VI;(f)浓缩过层析柱纯化得化合物VII;(g)浓缩过层析柱纯化得化合物化合物I。实现了芳香八元环标记物的合成路线的重新设计。

A synthetic method of aromatic eight membered ring marker in biological orthogonal experiment

The invention relates to a synthetic method of aromatic octacyclic markers for bio-orthogonal experiments, which comprises the following steps: (a) mixing phthalic alcohol, dichloromethane, imidazole and tert-butyl dimethyl chlorosilane to react; purifying compound II through chromatography column; (b) adding methyl Toluenesulfonyl carbamate and triphenyl Phosphine reacts with diethyl azodicarbonate and is concentrated and purified by column to obtain compound III; (c) the compound III is dissolved in methanol, cooled to less than 0 (?) C, reacted with potassium carbonate and quenched by water; (d) compound V is extracted by ethyl acetate several times and purified by organic phase; (e) the compound III is concentrated and purified by column. Compound VI was obtained; (f) Compound VII was purified by concentrated chromatography column; (g) Compound I was purified by concentrated chromatography column. The synthetic route of aromatic eight membered ring marker was redesigned.

【技术实现步骤摘要】
一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法
本专利技术属于生物检测标记领域,涉及一种芳香八元环,具体涉及一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法。
技术介绍
对活体生物大分子进行特异性标记是一项具有挑战性的工作,它要求这类化学反应能够在生理条件下高效特异地进行,不会与生物体系中存在的各种活性物质发生副反应。最近十几年开发的生物正交反应能够比较好地满足这些要求。它们在生物分子标记方面的应用拓展了科研工作者对细胞内生物体系的理解,即通过位点特异性引入生物正交官能团来进行选择性标记细胞内目标蛋白质以用于实现对细胞内生物体系的研究。芳香八元环是上述选择性标记细胞内目标蛋白质的常用物质,因此有必要设计能够缩短芳香八元环的反应路线以获得高产率的芳香八元环。
技术实现思路
本专利技术目的是为了克服现有技术的不足而提供一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法。为达到上述目的,本专利技术采用的技术方案是:一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法,它包括以下步骤:(a)将邻苯二甲醇、二氯甲烷、咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷混合后进行反应;加入饱和碳酸氢钠淬灭反应,分层,浓缩有机相,过层析柱纯化得化合物II;(b)将所述化合物II溶于四氢呋喃,降温至≤0℃,加入甲苯磺酰氨基甲酸甲酯、三苯基膦和偶氮二甲酸二乙酯进行反应,浓缩后过柱纯化得到化合物III;(c)将所述化合物III溶于甲醇,降温至≤0℃,加入碳酸钾进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物IV;(d)将所述化合物IV溶于四氢呋喃,加入化合物VIII和四丁基溴化铵进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物V;(e)将所述化合物V溶于四氢呋喃,加入四丁基氟化铵溶液进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物VI;(f)向反应容器中加入草酰氯和二氯甲烷,降温至-80~-50℃,加入DMSO,随后滴入所述化合物VI的二氯甲烷溶液以进行反应,加入三乙胺淬灭;升温至-5~0℃,加入饱和氯化铵分层,水相用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物VII;(g)将所述化合物VII溶于四氢呋喃,降温至-80~-50℃,加入LiHMDS和ClPO(OEt)2进行反应,随后加入二异丙基氨基锂继续反应;加入饱和氯化铵分层,水相用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物化合物I。优化地,步骤(d)中,所述化合物VIII通过以下步骤制得:将化合物A溶于二氯甲烷,降温至≤0℃,加入四溴化炭和三苯基膦进行反应;加入饱和碳酸氢钠淬灭,分层,水相用二氯甲烷提取多次后合并有机相,浓缩过层析柱纯化即可。优化地,步骤(b)中,分层获得的水相用二氯甲烷提取多次,合并有机相,浓缩后过层析柱纯化。由于上述技术方案运用,本专利技术与现有技术相比具有下列优点:本专利技术生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法,通过采用特定的合成步骤依次实现了化合物II、化合物III、化合物IV等化合物的合成而实现了芳香八元环标记物的合成路线的重新设计,有利于工业化批量生产,具有较高的产率的纯度。附图说明附图1为本专利技术生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法的部分流程图。具体实施方式如图1所示的生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法,它包括以下步骤:(a)将邻苯二甲醇、二氯甲烷、咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷混合后进行反应;加入饱和碳酸氢钠淬灭反应,分层,浓缩有机相,过层析柱纯化得化合物II;(b)将所述化合物II溶于四氢呋喃,降温至≤0℃,加入甲苯磺酰氨基甲酸甲酯、三苯基膦和偶氮二甲酸二乙酯进行反应,浓缩后过柱纯化得到化合物III;(c)将所述化合物III溶于甲醇,降温至≤0℃,加入碳酸钾进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物IV;(d)将所述化合物IV溶于四氢呋喃,加入化合物VIII和四丁基溴化铵进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物V;(e)将所述化合物V溶于四氢呋喃,加入四丁基氟化铵溶液进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物VI;(f)向反应容器中加入草酰氯和二氯甲烷,降温至-80~-50℃,加入DMSO,随后滴入所述化合物VI的二氯甲烷溶液以进行反应,加入三乙胺淬灭;升温至-5~0℃,加入饱和氯化铵分层,水相用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物VII;(g)将所述化合物VII溶于四氢呋喃,降温至-80~-50℃,加入LiHMDS和ClPO(OEt)2进行反应,随后加入二异丙基氨基锂继续反应;加入饱和氯化铵分层,水相用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物化合物I。步骤(d)中,所述化合物VIII优选通过以下步骤制得:将化合物A溶于二氯甲烷,降温至≤0℃,加入四溴化炭和三苯基膦进行反应;加入饱和碳酸氢钠淬灭,分层,水相用二氯甲烷提取多次后合并有机相,浓缩过层析柱纯化即可;化合物A的合成参考文献“Fluorine-18RadiolabelingandRadiopharmacologicalCharacterizationofaBenzodioxolylpyrimidine-basedRadiotracerTargetingtheReceptorTyrosineKinaseEphB4”ChemMedChem,7(11),1991-2003,S1991/1-S1991/14;2012。步骤(b)中,分层获得的水相用二氯甲烷提取多次,合并有机相,浓缩后过层析柱纯化。下面将结合对本专利技术优选实施方案进行详细说明:实施例1本实施例提供一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法,它包括以下步骤:(a)在250mL的三口瓶中加入邻苯二甲醇(5g,41.2mmo)、二氯甲烷(100mL)、咪唑(3.1g,45.4mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(6.0g,41.2mmol)混合形成反应液,在常温下搅拌3小时,反应完全;加入50mL饱和碳酸氢钠淬灭,分层,水相用二氯甲烷提取2次,合并有机相,浓缩,过层析柱纯化得到3.78g(36.4%,纯度为99.0%)化合物II;核磁和质谱数据如下:1HNMR(300MHz,CDCl3):δ7.39-7.28(m,4H),4.81(s,2H),4.68(s,2H),0.93(s,9H),0.14(s,6H);13CNMR(75MHz,CDCl3):δ139.7,138.6,129.4,128.6,128.3,127.9,64.8,64.0,26.0,18.4,-5.0.IR(neat,cm-1):3390,2929,2857,1471,1255,1185,1079,939,836,776.HRMS(FAB,matrix:3-nitrobenzylalcohol,positive):m/zcalcdforC14H15O2Si[M+H]+:253.1624,found:253.1622.;(b)在250mL的三口本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法,其特征在于,它包括以下步骤:(a)将邻苯二甲醇、二氯甲烷、咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷混合后进行反应;加入饱和碳酸氢钠淬灭反应,分层,浓缩有机相,过层析柱纯化得化合物II;(b)将所述化合物II溶于四氢呋喃,降温至≤0℃,加入甲苯磺酰氨基甲酸甲酯、三苯基膦和偶氮二甲酸二乙酯进行反应,浓缩后过柱纯化得到化合物III;(c)将所述化合物III溶于甲醇,降温至≤0℃,加入碳酸钾进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物IV;(d)将所述化合物IV溶于四氢呋喃,加入化合物VIII和四丁基溴化铵进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物V;(e)将所述化合物V溶于四氢呋喃,加入四丁基氟化铵溶液进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物VI;(f)向反应容器中加入草酰氯和二氯甲烷,降温至‑80~‑50℃,加入DMSO,随后滴入所述化合物VI的二氯甲烷溶液以进行反应,加入三乙胺淬灭;升温至‑5~0℃,加入饱和氯化铵分层,水相用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物VII;(g)将所述化合物VII溶于四氢呋喃,降温至‑80~‑50℃,加入LiHMDS和ClPO(OEt)2进行反应,随后加入二异丙基氨基锂继续反应;加入饱和氯化铵分层,水相用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物化合物I。...

【技术特征摘要】
1.一种生物正交实验芳香八元环标记物的合成方法,其特征在于,它包括以下步骤:(a)将邻苯二甲醇、二氯甲烷、咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷混合后进行反应;加入饱和碳酸氢钠淬灭反应,分层,浓缩有机相,过层析柱纯化得化合物II;(b)将所述化合物II溶于四氢呋喃,降温至≤0℃,加入甲苯磺酰氨基甲酸甲酯、三苯基膦和偶氮二甲酸二乙酯进行反应,浓缩后过柱纯化得到化合物III;(c)将所述化合物III溶于甲醇,降温至≤0℃,加入碳酸钾进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物IV;(d)将所述化合物IV溶于四氢呋喃,加入化合物VIII和四丁基溴化铵进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物V;(e)将所述化合物V溶于四氢呋喃,加入四丁基氟化铵溶液进行反应,加水淬灭;用乙酸乙酯提取多次后合并有机相,用无水硫酸钠干燥,浓缩过层析柱纯化得化合物VI;(f)向反应容器中加入草酰氯和二氯甲烷,降温至-80~-50℃...

【专利技术属性】
技术研发人员:倪润炎
申请(专利权)人:苏州金点生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏,32

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