肺癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC01124的应用、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种肺癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC01124的应用、试剂盒及检测方法，通过实时荧光定量PCR与生存曲线分析发现肺癌组织来源的非编码RNA LINC01124与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高，此法为预测肺癌患者的预后生存期分析提供了强有力的技术支持，有助于提高肺癌患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义。

New molecular marker for lung cancer prognosis: application of non coding RNA LINC01124, kit and detection method

The present invention relates to the application, kit and detection method of a novel molecular marker of lung cancer prognosis, non-coding RNA LINC01124. Through real-time fluorescent quantitative PCR and survival curve analysis, it is found that non-coding RNA LINC01124 from lung cancer tissue is related to survival rate of patients. The higher the content, the higher the survival rate. This method is to predict lung cancer. Prognostic survival analysis of patients with lung cancer provides strong technical support, which is helpful to improve the quality of life of patients with lung cancer after operation, formulate the treatment plan after operation, and improve the survival rate. It has far-reaching clinical significance.

【技术实现步骤摘要】
肺癌预后新型分子标志物非编码RNALINC01124的应用、试剂盒及检测方法
本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种肺癌预后新型分子标志物非编码RNALINC01124的应用、试剂盒及检测方法。
技术介绍
肺癌是严重危害人类健康的肿瘤，在世界范围内，男性中肺癌是引发癌症相关死亡的第一位的疾病，在女性肺癌是仅次于乳腺癌的引起癌症相关死亡的肿瘤，每年世界上约有170万新发病例，约有150万肺癌患者死亡。肺癌患者的生存时间短，生存率低，自从上世纪70年代中期以来，肺癌患者的生存只得到了很小的改善。在我国，肺癌的死亡率逐渐增高，已经占据癌症死因的第一位。肺癌按照病理类型主要分为两大类，小细胞肺癌和非小细胞肺癌。其中，后者占据肺癌的比例约85％。非小细胞肺癌患者的生存很大程度上取决于诊断时的分期，诊断时分期越早，预后相对越好。然而大部分患者确诊时已属于中晚期，预后差。目前，临床上还没有理想的分子指标来评估预后及发生转移的风险。因此，寻找新的预后生物标志物是目前急需解决的问题。非编码RNA最近研究发现，人类转录组中除了包含约两万余条可编码蛋白的mRNA，还包含3万条左右的非编码RNA。根据非编码RNA的碱基长度可将其分为两大类，第一类，小于200nt的短链非编码RNA，例如主要参与转录后RNA降解或翻译抑制的miRNA，以及参与mRNA翻译的转运RNA；第二类，大于200nt的长链非编码RNA即长链非编码RNA，其参与多种生物过程，例如参与染色质修饰、转录调控、miRNA功能调节、mRNA稳定性以及蛋白质功能调节等多种重要调控机制阻。研究表明，非编码RNA在正常细胞发育以及肿瘤发生发展的过程中发挥重大功能。因此，检测患者肿瘤组织中的非编码RNA的表达量是潜在预测肿瘤患者预后的手段。LINC01124是一种新发现的非编码RNA，其转录本长度大于200个核苷酸。目前，LINC01124在正常细胞发育或肿瘤发生发展的过程中发挥的重要作用还在进一步研究中。LINC01124是否可以作为一种新的肿瘤标志物用于预测肺癌患者预后尚未有报道。因此，我们首次阐明了以LINC01124为新的肺癌标志物来预测患者预后的可行性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种肺癌预后新型分子标志物非编码RNALINC01124的应用，其次，本专利技术提供一种标志物非编码RNALINC01124在肺癌组织中表达量的试剂盒及检测方法。本专利技术的目的是这样实现的：肺癌预后新型分子标志物非编码RNALINC01124在制备预测肺癌患者预后的制剂的应用，该非编码RNALINC01124的核酸序列如SEQNO:1所示。所述的用于预测肺癌患者预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒。试剂盒包括用于检测非编码RNALINC01124表达的特异性引物，所述特异性引物的核酸序列为SEQNO:2和SEQNO:3，以及内参基因TUBA1A表达的引物序列，所述引物的核酸序列为SEQNO:4和SEQNO:5。试剂盒还含有从组织中提取RNA并进行逆转录及实时荧光定量PCR的所有试剂，包括(1)从肺癌的肿瘤或正常对照组织中抽提总RNA所用试剂，包括Trizol液、氯仿、异丙醇、抑制RNA降解溶剂、75％乙醇，DEPC水；(2)以总RNA为模板将非编码RNALINC01124逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录反应缓冲液、含有含Mg2+的三磷酸碱基脱氧核苷酸dNTP、逆转录酶M-MLV以及随机引物和OligodT引物的混合物；(3)将cDNA实时荧光定量PCR所用试剂，包括LINC01124实时荧光定量PCR特异性引物、TUBA1A内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无RNA酶的水。肺癌预后新型分子标志物非编码RNALINC01124的检测方法，包括以下步骤：1）收集待测肺癌或正常对照组织；2)组织中RNA的抽提；3）LINC01124RNA的逆转录，以细胞总RNA为模板，逆转录得到cDNA；4）以cDNA为模板，利用非编码RNALINC01124的特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增，检测非编码RNALINC01124表达量。步骤3）中逆转录反应体系为5×RTBuffer（含Mg2+和dNTP）4μl，10×RTPrimerMix（OligodTPrimer和RandomHexamers混合物）2μl，BeyoRT™IIM-MLV逆转录酶(RNaseH-)（含RNaseInhibitor）2μl，DEPC-treatedwater2μl，去除gDNA后的TotalRNA10μl。步骤4）中检测标志物非编码RNALINC01124的表达量用相对定量方法。本专利技术的有益效果是：通过实时荧光定量PCR与生存曲线分析发现肺癌组织来源的非编码RNALINC01124与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高，此法为预测肺癌患者的预后生存期分析提供了强有力的技术支持，有助于提高肺癌患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义。附图说明图1为实时荧光定量PCR分析LINC01124在正常组织与肺癌中的表达差异；图2为生存曲线分析肺癌组织来源的非编码RNALINC01124表达高低对肺癌患者的预后影响。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作以下说明：实施例1：肺癌预后新型分子标志物非编码RNALINC01124在制备预测肺癌患者预后的制剂的应用，将标志物非编码RNALINC01124用于制备肺癌预后的制剂，预测肺癌患者的情况。实施例2：制备检测非编码RNALINC01124表达量的试剂用于制备肺癌患者预后的试剂盒(用于30次反应)1.Trizol20ml2.抑制RNA降解溶剂40ml；3.氯仿80ml；4.异丙醇80ml；5.DEPC水10ml；6.10×随机引物和OligodT引物的混合物100μl；7.5×逆转录反应缓冲液150μl；8.10mM含Mg2+的三磷酸碱基脱氧核苷酸dNTP100μl；9.200U/μlM-MLV逆转录酶50μl；10.SYBRGreenqPCRMix500μl；11.3μM目的基因LINC01124特异性引物（其序列如SEQNO:2和SEQNO:3所示）50μl；12.3μM内参基因TUBA1A特异性引物（其序列如SEQNO:4和SEQNO:5所示）50μl。实施例3：组织样本非编码RNALINC01124的检测1、收集待测肺癌或正常对照组织，生理盐水清洗干净后，放入盛有抑制RNA降解溶剂的冻存管中，放至-80℃冰箱备用。2、组织中RNA的抽提：（1）先在研钵中加入液氮，再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中。组织粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%，充分混合均匀；（2）室温放置5分钟，然后加入200μl的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡0.5分钟。12000转/分钟离心10分钟；（3）取上层水相于一新的EP管中（勿中间的沉淀层和下层液混入），加入500μl异丙醇，温和颠倒混匀，室温放置10分钟，12000转/分钟离心10分钟。（4）小心地弃去上清液，加入1ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12000转/分钟离心5分钟，重复操作一次；（5）弃去上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肺癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC01124在制备预测肺癌患者预后的制剂的应用，该非编码RNA LINC01124的核酸序列如SEQ NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.肺癌预后新型分子标志物非编码RNALINC01124在制备预测肺癌患者预后的制剂的应用，该非编码RNALINC01124的核酸序列如SEQNO:1所示。2.根据权利要求1所述的肺癌预后新型分子标志物非编码RNALINC01124的应用，其特征在于：所述的用于预测肺癌患者预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒。3.一种如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：包括用于检测非编码RNALINC01124表达的特异性引物，所述特异性引物的核酸序列为SEQNO:2和SEQNO:3，以及内参基因TUBA1A表达的引物序列，所述引物的核酸序列为SEQNO:4和SEQNO:5。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：还含有从组织中提取RNA并进行逆转录及实时荧光定量PCR的所有试剂，包括(1)从肺癌的肿瘤或正常对照组织中抽提总RNA所用试剂，包括Trizol液、氯仿、异丙醇、抑制RNA降解溶剂、75％乙醇，DEPC水；(2)以总RNA为模板将非编码RNALINC01124逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录反应缓冲液、含有含Mg2+的三磷酸碱基脱氧核苷酸dNTP、逆转录酶M-MLV以及随机引物和OligodT引物的混合物；(3)将cDNA实时荧光定量PCR所用试剂，包括LINC01124实时...

【专利技术属性】
技术研发人员：田田，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：河南,41