一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法及蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽和应用技术

本发明专利技术提供了一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法，属于功能型食品技术领域，包括蜂王幼虫粉依次经酶解、离心分离、过滤和超滤步骤。本发明专利技术提供的制备方法能够制备分子量为[3～5)kDa的活性肽，能够抑制葡萄糖苷酶。

Preparation of a Glucosidase Inhibitory Active Peptide from Queen Bee Larvae and Application of Glucosidase Inhibitory Active Peptide from Queen Bee Larvae

The invention provides a preparation method of queen bee larva glucosidase inhibitory active peptide, which belongs to the technical field of functional food, including enzymatic hydrolysis, centrifugal separation, filtration and ultrafiltration steps of queen bee larva powder in turn. The preparation method provided by the invention can prepare an active peptide with molecular weight of [3-5] kDa, and can inhibit glucosidase.

【技术实现步骤摘要】
一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法及蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽和应用
本专利技术属于功能型食品
，具体涉及一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法及蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽和应用。
技术介绍
蜂王幼虫是蜜蜂受精卵在未封盖的王台上，经工蜂喂饲蜂王浆从孵化后至蛹化前的幼虫体，是蜂王浆生产过程中的副产品。蜂王幼虫营养非常丰富，蛋白质含量高，具有很高的食用和药用价值，但目前国内的蜂王幼虫资源只进行简单的加工，或将直接作为原料出口，产品的技术含量和附加值低，绝大多数蜂王幼虫的资源仍未得到有效的开发利用。相关研究表明，蛋白质在人体消化系统中蛋白酶作用下的水解终产物大多为2～4个氨基酸残基组成的小肽。因小肽结构简单，分子量小，不饱和，所以能够通过细胞膜的渗透以原形直接进入细胞内，而不需要再次消化，也不需要耗费能量。因此小分子肽的吸收、转化和利用，都是高效、完全、彻底的。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法，能够得到蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽，该活性肽能够抑制葡萄糖苷酶活性。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法，包括以下步骤：1)将蜂王幼虫粉与水混合匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与蛋白酶混合，在50～60℃下酶解2～4h，得到酶解液；所述蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶或木瓜蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行灭酶处理，将得到的灭酶处理液离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm；3)将所述步骤2)得到的滤液使用截留分子量为10kDa的超滤膜进行第一次超滤，将得到的第一次超滤液以截留分子量为5kDa的超滤膜进行第二次超滤，得到第二次超滤液；4)将所述步骤3)得到的第二次超滤液以截留分子量为3kDa的超滤膜进行第三次超滤，得到肽段分子量[3～5)KDa的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽。优选的，所述第二次超滤液进行第三次超滤后，将得到的第三次超滤液以截留分子量为1kDa的超滤膜进行第四次超滤，得到肽段分子量为[1～3)KDa的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽。优选的，所述第三次超滤液进行第四次超滤后，将得到的第四次超滤液以截留分子量为0.3～0.5kDa的超滤膜进行第五次超滤，得到肽段分子量＜1kDa的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽。优选的，所述步骤1)蛋白酶的酶活与蜂王幼虫粉的质量比为(1500～2500)U:1g；所述蛋白酶酶解的时间为2.5～3.5h。优选的，所述步骤1)蜂王幼虫粉的质量与水的体积比为1g:(2～6)mL。优选的，所述第一次超滤、第二次超滤、第三次超滤、第四次超滤和第五次超滤的条件独立的包括：滤液流速为0.5～10L/H，膜元件压力为0～0.8MPa，超滤结束前加入纯水进行洗涤，直至流出的透过液为无色。本专利技术还提供了一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽，所述蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的分子量为[3～5)KDa。本专利技术还提供了上述技术方案所述的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽在制备降低血糖药物中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽在制备食品中的应用。本专利技术提供一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法，将蜂王幼虫粉经酶酶解后，得到不同分子量肽段、脂质类物质、盐类、不溶性残渣等混合物，经过离心分离后，留下可溶性肽段、盐类、不溶性脂质类等物质，舍去不溶性残渣，经过过滤后，除去不溶性脂质类及粒径大于5μm的杂质，经过超滤后，除去盐，留下可溶性肽段，得到蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽。本专利技术实施例的结果显示：本专利技术提供的制备方法能够制备分子量为[3～5)kDa的活性肽，再进一步使用不同分子量超滤膜超滤后，得到不同分子量的肽段，其中分子量为[3～5)kDa的活性肽具有的抑制葡萄糖苷酶性能最高。具体实施方式本专利技术提供了一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法，包括以下步骤：1)将蜂王幼虫粉与水混合匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与蛋白酶混合，在50～60℃下酶解2～4h，得到酶解液；所述蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶或木瓜蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行灭酶处理，将得到的灭酶处理液离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm；3)将所述步骤2)得到的滤液使用截留分子量为10kDa的超滤膜进行第一次超滤，将得到的第一次超滤液以截留分子量为5kDa的超滤膜进行第二次超滤，得到第二次超滤液；4)将所述步骤3)得到的第二次超滤液以截留分子量为3kDa的超滤膜进行第三次超滤，得到肽段分子量[3～5)KDa的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽。本专利技术将蜂王幼虫粉与水混合匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与蛋白酶混合，在50～60℃下酶解2～4h，得到酶解液；所述蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶或木瓜蛋白酶。在本专利技术中，所述蜂王幼虫优选为蜜蜂受精卵在未封盖的王台上，经工蜂喂饲蜂王浆从孵化后至蛹化前的幼虫体。本专利技术优选将蜂王幼虫冻干后再磨成粉，得到蜂王幼虫粉，本专利技术对所述冻干的蜂王幼虫磨成粉的条件没有特殊限定，采用常规技术手段即可。在本专利技术中，所述蜂王幼虫粉的粒径优选为10～100μm，更优选为15～25μm，最优选为20μm。在本专利技术中，所述蜂王幼虫粉的质量与水的体积比优选为1g:(2～6)mL，更优选为1g:(3～5)mL，最优选为1g:4mL。本专利技术对所述匀浆的条件没有特殊限定，采用本领域技术人员常规使用的匀浆蜂王幼虫的条件即可。本专利技术调节匀浆液的pH值为6～7，优选为6.2～6.8，更优选为6.5。本专利技术优选用稀盐酸和氢氧化钠溶液调节匀浆液的pH值。在本专利技术中，所述蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶或木瓜蛋白酶。本专利技术所述蛋白酶酶的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本专利技术中，所述蛋白酶的酶活与蜂王幼虫粉的质量比优选为(1500～2500)U:1g，更优选为1700～2300U:1g，最优选为1900～2100U:1g。本专利技术调节匀浆液的pH值后与酶混合，在50～60℃下酶解2～4h，得到酶解液，优选在52～58℃下酶解2.5～3.5h，更优选在53～55℃下酶解3h。在本专利技术中，所述蜂王幼虫粉经酶解后，得到不同分子量肽、脂肪类物质、盐类、不溶性残渣等混合物。本专利技术将得到的酶解液进行灭酶处理，将得到的灭酶处理液离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm。在本专利技术中，所述灭酶处理的条件优选包括：所述灭酶处理的时间优选为5～15min，更优选为8～12min，最优选为10min；所述灭酶处理的温度优选为90～110℃，更优选为95～105℃，最优选为100℃。在本专利技术中，所述离心分离的速度为4000～5000rpm，优选为4200～4800rpm，更优选为4500rpm；所述离心分离的时间优选为5～10min，更优选为6～9min，最优选为7～8min。在本专利技术中，所述离心分离留下可溶性肽类、盐类、不溶性脂肪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法，包括以下步骤：1)将蜂王幼虫粉与水混合匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与蛋白酶混合，在50～60℃下酶解2～4h，得到酶解液；所述蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶或木瓜蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行灭酶处理，将得到的灭酶处理液离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm；3)将所述步骤2)得到的滤液使用截留分子量为10kDa的超滤膜进行第一次超滤，将得到的第一次超滤液以截留分子量为5kDa的超滤膜进行第二次超滤，得到第二次超滤液；4)将所述步骤3)得到的第二次超滤液以截留分子量为3kDa的超滤膜进行第三次超滤，得到肽段分子量[3～5)KDa的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽。

【技术特征摘要】
1.一种蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备方法，包括以下步骤：1)将蜂王幼虫粉与水混合匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与蛋白酶混合，在50～60℃下酶解2～4h，得到酶解液；所述蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶或木瓜蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行灭酶处理，将得到的灭酶处理液离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm；3)将所述步骤2)得到的滤液使用截留分子量为10kDa的超滤膜进行第一次超滤，将得到的第一次超滤液以截留分子量为5kDa的超滤膜进行第二次超滤，得到第二次超滤液；4)将所述步骤3)得到的第二次超滤液以截留分子量为3kDa的超滤膜进行第三次超滤，得到肽段分子量[3～5)KDa的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二次超滤液进行第三次超滤后，将得到的第三次超滤液以截留分子量为1kDa的超滤膜进行第四次超滤，得到肽段分子量为[1～3)KDa的蜂王幼虫葡萄糖苷酶抑制活性肽。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第三次超滤液进行第四次超滤后，将得到的第四次超滤液以截留分子量...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁群，刘睿，林晨昕，骆欣莹，蔡昭龙，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42