一种PDL-1抗体、其药物组合物及其用途制造技术

提供了一种针对程序性细胞死亡因子1配体(PDL‑1)的单克隆抗体或其抗原结合片段，该单克隆抗体能够特异性与PDL‑1结合，解除PDL‑1对机体免疫的抑制，从而激活T淋巴细胞。还提供了包含该单克隆抗体的药物组合物及用途。

PDL-1 antibody, its pharmaceutical composition and use thereof

A monoclonal antibody against programmed cell death factor 1 ligand (PDL_1) or its antigen binding fragment is provided. The monoclonal antibody can specifically bind to PDL_1 and relieve the suppression of immunity by PDL_1, thus activating T lymphocyte. Pharmaceutical compositions containing the monoclonal antibody and their uses are also provided.

【技术实现步骤摘要】
一种PDL-1抗体、其药物组合物及其用途本专利技术是申请号为201780002182.8的母案的分案申请，该母案的申请日为2017年03月02日，专利技术名称为“一种PDL-1抗体、其药物组合物及其用途”。
本专利技术属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，涉及一种抗PDL-1抗体、其药物组合物及其用途。具体地，本专利技术涉及一种抗PDL-1的单克隆抗体。
技术介绍
PD-1/PDL-1信号通路在调节免疫耐受、微生物感染及肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。PD-1(programmedcelldeath1，程序性细胞死亡因子1)的表达主要在T细胞等免疫细胞，而PD-1的配体PDL-1主要在许多人类肿瘤组织呈高表达。应用免疫组织化学方法，已先后在乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、神经胶质瘤、黑素瘤等多种人类肿瘤组织中检测到PDL-1蛋白的表达，且PDL-1的表达水平和患者的临床及预后紧密相关。阻断PD-1/PDL-1信号通路可使被抑制的T细胞激活，进而攻击癌细胞。阻断PD-1/PDL-1信号可以促进肿瘤抗原特异性T细胞的增殖，发挥杀伤肿瘤细胞的作用，进而抑制局部肿瘤生长(JulieRetal.,2012，NEnglJMed.366:2455–2465)；PDL-1单抗可上调浸润CD8+T细胞IFN-γ的分泌，表明PD-1/PDL-1信号通路的阻断在以诱导免疫应答为目的的肿瘤免疫应答中发挥作用(BlankCetal.,2006，Int.J.Cancer.119:317–327)。另外，PDL-1在体内还可以与B7-1结合。已有研究表明PDL-1/B7-1复合物也是T细胞活化的负信号，二者的结合可以导致T细胞表面活化标记物的表达下降，抑制T细胞增殖等。IL-2(Interlukin2，白细胞介素2)是由Th细胞分泌的一种淋巴因子，具有广泛的免疫活性：①刺激T细胞增殖分化；②刺激产生杀伤性T淋巴细胞；③刺激NK细胞增殖分化，增强NK活性；⑤刺激产生淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)细胞，即淋巴细胞在IL-2刺激下，经3-6天体外培养可成为一种对新瘤细胞具有强烈杀伤作用的细胞，称为LAK细胞。IFN-γ(Interferon-γ，干扰素-γ)由T细胞产生，具有直接抑制肿瘤细胞增殖，增加表面MHC抗原和肿瘤坏死因子表达，抗肿瘤血管生成等多种抗肿瘤作用。近年来研究发现，IFN-γ可以通过调控肿瘤细胞的Fas/FasL表达以及增强肿瘤细胞对Fas所介导凋亡途径的敏感性，使肿瘤细胞逃避免疫系统攻击的能力降低，从而抑制肿瘤细胞的恶性增殖。目前，业界普遍认为针对PDL-1通路的抗体将导致治疗多种肿瘤治疗的突破性的进展：用于治疗非小细胞性肺癌，肾细胞癌，卵巢癌，黑色素瘤(HometM.B.,ParisiG.,etal.,Anti-PD1TherapyinMelanoma.SeminOncol.2015Jun；42(3):466-473)，白血病以及贫血病(HeldSA,HeineA,etal.,AdvancesinimmunotherapyofchronicmyeloidleukemiaCML.CurrCancerDrugTargets.2013Sep；13(7):768-74)。目前，尚需要开发新的具有更好的结合效率的抗PDL-1抗体，以有效地阻断PD-1与PDL-1的结合，并且激活T淋巴细胞。
技术实现思路
本专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，利用哺乳动物细胞表达系统表达出重组的PDL-1作为抗原免疫小鼠，经小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞。专利技术人通过进行对大量样本的筛选，得到了如下的杂交瘤细胞株：杂交瘤细胞株LT005，其于2015年8月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCNO:C2015133。本专利技术人惊奇地发现，杂交瘤细胞株LT005能够分泌产生与PDL-1特异性结合的特异性单克隆抗体(命名为5C10)，并且该单克隆抗体能够十分有效地阻断PD-1与PDL-1的结合。另外，本专利技术人还发现了阻断PD-1与PDL-1的结合的单克隆抗体5F10和9F6。进一步地，本专利技术人创造性地制得了抗PDL-1的人源化抗体，分别命名为5C10H1L1、5C10H1L2、5C10H2L1和5C10H2L2。更进一步地，本专利技术人创造性地对5C10H2L2的恒定区进行了突变，得到5C10H2L2-IgG1mt抗体，有效地降低了ADCC(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity)和/或CDC(complement-dependentcytotoxicity)。本专利技术人还惊奇地发现，本专利技术的抗体特别是5C10、5C10H1L1、5C10H1L2、5C10H2L1、5C10H2L2、5F10、9F6和5C10H2L2-IgG1mt均能有效地结合人T细胞，并且激活T细胞，诱导人淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2；具有用于制备防治肺癌、黑色素瘤、肾肿瘤、卵巢癌、白血病等癌症以及贫血病的药物的潜力。由此提供了下述专利技术：本专利技术的一个方面涉及一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:15－17的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:18－20的CDR；或者所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:29－31的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:32－34的CDR；或者所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:35－37的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:38－40的CDR。5C10、5C10H1L1、5C10H1L2、5C10H2L1和5C10H2L2这5个单抗的CDR的氨基酸序列相同：HCDR1：GFSLSNYD(SEQIDNO:15)HCDR2：IWTGGAT(SEQIDNO:16)HCDR3：VRDSNYRYDEPFTY(SEQIDNO:17)LCDR1：QSIGTN(SEQIDNO:18)LCDR2：YAS(SEQIDNO:19)LCDR3：QQSNSWPYT(SEQIDNO:20)。5F10单抗的CDR的氨基酸序列如下：HCDR1:GFDIKDTY(SEQIDNO:29)HCDR2:IDPADGNT(SEQIDNO:30)HCDR3:ARGLGAWFAS(SEQIDNO:31)LCDR1:QDITNS(SEQIDNO:32)LCDR2:YTS(SEQIDNO:33)LCDR3:QQGHTLPPT(SEQIDNO:34)。9F6单抗的CDR的氨基酸序列如下：HCDR1:GFNIKDTY(SEQIDNO:35)HCDR2:IDPANGNT(SEQIDNO:36)HCDR3:SRGPPGGIGEYIYAMDY(SEQIDNO:37)LCDR1:SSVSSSY(SEQIDNO:38)LCDR2:STS(SEQIDNO:39)LCDR3:HQYHRSPPT(SEQIDNO:40)。上述CDR可以通过本领域技术人员所熟知的技术手段，例如通过VBASE2数据库根据IM本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQ ID NO:15－17的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQ ID NO:18－20的CDR；或者所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQ ID NO:29－31的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQ ID NO:32－34的CDR；或者所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQ ID NO:35－37的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQ ID NO:38－40的CDR。

【技术特征摘要】
2016.03.04 CN 20161012211761.单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:15－17的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:18－20的CDR；或者所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:29－31的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:32－34的CDR；或者所述单克隆抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:35－37的CDR，和/或所述单克隆抗体的轻链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:38－40的CDR。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:6和SEQIDNO:10,和/或所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:4、SEQIDNO:8和SEQIDNO:12；或者所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:21,和/或所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:23；或者所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:25,和/或所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:27。3.根据权利要求1至2中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如，scFv)、人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。4.根据权利要求1至2中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体以小于大约100nM，例如小于大约10nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM或更小的EC50结合PDL-1蛋白；优选地，所述EC50通过间接ELISA方法测得。5.根据权利要求1至2中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体包括非-CDR区，且所述非-CDR区来自不是鼠类的物种，例如来自人抗体；优选地，所述单克隆抗体的恒定区选自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定区；优选地，所述单克隆抗体的恒定区选自突变的人IgG1恒定区。6.根据权利要求5所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述突变的人IgG1恒定区中，按照EU编号系统重链恒定区包括N297A突变。7.根据权利要求5或6所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述突变的人IgG1恒定区中，按照EU编号系统重链恒定区在234、235、237位点至少一个发生突变，突变后抗体或其抗原结合片段与FcγRIIIa和/或C1q的动态亲和力下降。8.根据权利要求5或6所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述突变的人IgG1恒定区中，按照EU编号系统重链恒定区在234、235和237位点进行如下的1种、2种或3种突变：L234A、L235A或G237A。9.根据权利要求5-8任一所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述突变使抗体或抗原结合片段具有降低的ADCC和/或CDC活性。10.根据权利要求1至2中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体是有杂交瘤细胞株LT005产生的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株LT005保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCNO:C2015133。11.分离的核酸分子A，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，其中，所述抗体的重链可变区包含：氨基酸序列为SEQIDNO:15－17的CDR，优选地，所述抗体的重链具有SEQIDNO:2、SEQIDNO:6或SEQIDNO:10所示的氨基酸序列，更优选地，所述核酸分子具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:5或SEQIDNO:9所示的核苷酸序列；在另一个实施方案中，所述抗体的重链可变区包含：氨基酸序列为SEQIDNO:29－31的CDR，优选地，所述抗体的重链具有SEQIDNO:21所示的氨基酸序列，更优选地，所述核酸分子具有SEQIDNO:22所示的核苷酸序列；在另一个实施方案中，所述抗体的重链可变区包含：氨基酸序列为SEQIDNO:35－37的CDR，优选地，所述抗体的重链具有SEQIDNO:25所示的氨基酸序列，更优选地，所述核酸分子具有SEQIDNO:26所示的核苷酸序列。12.分离的核酸分子B，其包含能够编码抗体轻链可变区的核酸序列，其中，所述抗体轻链可变区包含氨基酸序列为SEQIDNO:18－20的CDR，优选地，所述抗体轻链可变区具有SEQIDNO:4、SEQIDNO:8或SEQIDNO:12所示的氨基酸序列，更优选地，所述核酸分子具有SEQIDNO:3、SEQIDNO:7或SEQIDNO:11所示的核苷酸序列；在另一个实施方案中，所述抗体的轻链可变区包含：氨基酸序列为SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：李百勇，薛彤彤，夏瑜，王忠民，肖亮，王利春，王晶翼，
申请(专利权)人：四川科伦博泰生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51