从牛尾蒿中分离槲皮素鼠李糖苷的方法技术

本发明专利技术提供了一种从牛尾蒿中分离槲皮素3‑O‑α‑L‑鼠李糖苷的方法，该方法包括：取正己烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑水＝3:10:3:10v/v充分混合，分层后，上层溶剂和下层溶剂备用；取下层溶剂，溶解牛尾蒿乙酸乙酯提取部位，所得样品溶液通过高速逆流色谱(High‑speed counter‑current chromatography，HSCCC)进行分离。本发明专利技术采用HSCCC可以较为方便、快捷地从牛尾蒿中提取分离出纯度在90％以上的槲皮素3‑O‑α‑L‑鼠李糖苷，为该化合物的制备提供了新的途径。

Isolation of quercetin rhamnolipid from Artemisia annua

The invention provides a method for separating quercetin 3 O alpha L rhamnoside from Artemisia taurus. The method includes: taking n-hexane, ethyl acetate, methanol and water = 3:10:3:10v/v, mixing sufficiently, layering, reserving upper and lower solvents, dissolving the extracting part of ethyl acetate of Artemisia taurus, and obtaining The sample solution was separated by high speed counter current chromatography (HSCCC). The invention adopts HSCCC to extract and separate quercetin 3_O_alpha_L_rhamnoside with purity over 90% from Artemisia taurus, which provides a new way for the preparation of the compound.

【技术实现步骤摘要】
从牛尾蒿中分离槲皮素鼠李糖苷的方法
本专利技术属于天然植物有效成分提取分离的

技术介绍
槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷，为黄酮苷类成分，多存在于天然植物中，具有较强的抗氧化作用。其结构式如下：高速逆流色谱是20世纪80年代年由美国国立卫生院Ito博士研发的一种新型的液-液分配色谱技术，利用组分在逆向移动的互不相溶的两相溶剂中分配系数的不同进行分离，是不需要固态吸附剂的全液态色谱分离方法。目前还未见使用HSCCC从牛尾蒿中分离槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从牛尾蒿中分离槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷的方法。具体地，它包括如下操作：取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水＝3:10:3:10v/v充分混合，分层后，上层溶剂和下层溶剂备用；取下层溶剂，溶解牛尾蒿乙酸乙酯提取部位，所得样品溶液通过高速逆流色谱进行分离；高速逆流色谱的操作如下：设备温度30～40℃，将上层溶剂以15～25mL/min的流速泵入高速逆流色谱仪，打开主机，待主机正转转速稳定在800～1000rpm后，再以1～3mL/min流速泵入下层溶剂，待两相平衡后，由进样阀注入样品溶液，在254±3nm或280±3nm下检测流出物，并收集出峰时间在30min后的第二段色谱峰。本专利技术中所述“溶解牛尾蒿乙酸乙酯提取部位”，是指尽可能充分地溶解，不排除有无法溶解的成分。进一步地，高速逆流色谱中，温度为35℃。进一步地，高速逆流色谱中，上层溶剂泵入流速为20mL/min。进一步地，主机正转转速850rpm。进一步地，下层溶剂泵入的流速为2mL/min。进一步地，收集出峰时间在40min后的第二段色谱峰。进一步地，所述第二段色谱峰收集时间为出峰时间75～95min，更进一步选自80～91min。进一步地，所述牛尾蒿乙酸乙酯提取部位，是通过如下方法制备得到：取牛尾蒿，以水、C1-C2的醇类溶剂中的一种或两种以上的混合溶液作为溶剂进行提取，提取物再采用乙酸乙酯提取，收集乙酸乙酯提取物，即得乙酸乙酯提取部位。C1-C2的醇类溶剂，目前为甲醇、乙醇。更进一步地，提取牛尾蒿所用溶剂为水和C1-C2的醇类溶剂的混合溶液。其中，混合溶液中，醇类溶剂的浓度为10～30％v/v；进一步选自20％；优选地，所述醇类溶剂选自乙醇。更进一步地，提取物采用乙酸乙酯提取前，依次用石油醚、二氯甲烷提取。本专利技术一个具体实施方式中，采用乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷进行提取，是指萃取。本专利技术采用HSCCC可以较为方便、快捷地从牛尾蒿中提取分离出纯度在90％以上的槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷，为该化合物的制备提供了新的途径。后续使用时，如果还需要提高该化合物的纯度，可以采用已知方法进行纯化，例如柱层析、制备色谱、重结晶等方法。附图说明图1乙酸乙酯部位UPLC色谱图(1为目标化合物)图2正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(3：10：3：10，v/v)体系高速逆流色谱图具体实施方式以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例1仪器TBE-300B型HSCCC(上海市同田生物技术股份有限公司)；DC-0506型低温恒温槽(上海市同田生物技术股份有限公司)；primePlus层析仪(配有PrimeView工作站，通用电气医疗系统有限公司)；WatersAcquityH-Class超高效液相色谱仪(美国Waters公司)；WatersQuattroPremierXE质谱仪(美国Waters公司)；Agilent-400MHz核磁共振仪(美国安捷伦科技公司)；IR200傅立叶变换红外光谱仪(美国ThermoNecolet公司)；TU-1950系列紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；KQ5200E型超声波清洗器(40kHz、250W，昆山超声仪器有限公司)；德国RV10型旋转蒸发仪(德国IKA公司)；FD-1-50真空冷冻干燥机(北京博医康试验仪器有限公司)。材料与试剂牛尾蒿药材于2013年7月3日自采于四川省阿坝藏族羌族自治州松潘县水晶乡川盘村(川主寺药泉山庄，海拔3300米)，经阿坝藏族羌族自治州藏医院华尔江主任医师、西南民族大学刘圆教授鉴定为菊科蒿属植物牛尾蒿ArtemisiasubdigitataMattf.的地上部分，粉碎，过3号筛，备用；水为纯净水；试剂为分析纯。1、方法与结果1.1样品的制备取牛尾蒿药材粉末20g，加入20％乙醇1000mL，回流提取1h，过滤，减压浓缩至无醇味，加适量水混悬，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压浓缩后经冷冻干燥得各极性部位。取乙酸乙酯部位进行HSCCC的分离。1.2UPLC分析条件色谱柱：ACQUITYBEHC18(2.1×50mm，1.7μm)；流动相：乙腈(A)-0.2％甲酸水(B)；梯度洗脱，洗脱条件见表1；流速：0.1mL·min-1，柱温：35℃；样品室温度：25℃；进样体积2μL；检测波长范围200～400nm。表1梯度洗脱程序1.3乙酸乙酯部位的UPLC检测取乙酸乙酯部位样品，加入适量50％甲醇，超声充分溶解后，0.25μm滤膜过滤得样品溶液，按1.2液相条件进样检测，检测波长254nm。色谱图如图1所示。1.4HSCCC分配系数的测定利用UPLC测定样品在不同溶剂体系中的分配系数。于10mL试管中加入适量乙酸乙酯萃取物，加入预先分配平衡的两相溶剂系统的上相和下相各5mL，振荡使充分混合溶解，待静置分层后，分别取上相和下相各2mL，旋蒸挥去溶剂后用等量50％甲醇溶解，经UPLC检测后得到上相中目标化合物的峰面积AU，下相中目标化合物的峰面积AL，分配系数则为K＝AU/AL。选取不同溶剂体系，用上述方法测定目标化合物分配系数，结果见表2。表2目标化合物在个溶剂体系下的分配系数1.5两相溶剂体系及样品溶液的制备选取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(3:10:3:10，v/v)作为HSCCC的溶剂体系，将各溶剂组分按体积比例加入2L分液漏斗中，剧烈摇晃使其充分混合，待静置过夜，分别取上相、下相于广口瓶中，加盖超声脱气20min后备用。取牛尾蒿提取物乙酸乙酯部位200mg，加入20mL下相超声使其充分溶解，过滤备用。1.6HSCCC的分离制备过程开启低温恒温循环装置，设置温度35℃，待温度恒定以后，将已超声脱气的上相(固定相)以20mL/min的流速泵入HSCCC仪的螺旋管(上相流出约80mL后停泵)，打开HSCCC主机，缓慢调节转速至850rpm，待主机正转稳定后，再以2mL/min泵入下相(流动相)，待两相平衡后，由进样阀注入已经准备好的20mL样品溶液，通过检测器(254nm)检测流出物，按照色谱图手动收集各色谱峰组分。色谱图见图2。1.7纯度分析与结构鉴定利用UPLC分析所接样品组份，判断其纯度，利用UV、IR、UPLC-MS、1H-NMR、13C-NMR对所得产物进行结构分析。1.7.1纯度分析取适量分离得到的化合物，50％甲醇溶解进样，按色谱条件检测，纯度达到93.20％。1.7.2化合物结构鉴定根据IR、UV、ESI-MS、1H-N本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.从牛尾蒿中分离槲皮素3‑O‑α‑L‑鼠李糖苷的方法，其特征在于：它包括如下操作：取正己烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑水＝3:10:3:10v/v充分混合，分层后，上层溶剂和下层溶剂备用；取下层溶剂，溶解牛尾蒿乙酸乙酯提取部位，所得样品溶液通过高速逆流色谱进行分离；高速逆流色谱的操作如下：设备温度30～40℃，将上层溶剂以15～25mL/min的流速泵入高速逆流色谱仪，打开主机，待主机正转转速稳定在800～1000rpm后，再以1～3mL/min流速泵入下层溶剂，待两相平衡后，由进样阀注入样品溶液，在254±3nm或280±3nm下检测流出物，并收集出峰时间在30min后的第二段色谱峰。

【技术特征摘要】
1.从牛尾蒿中分离槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷的方法，其特征在于：它包括如下操作：取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水＝3:10:3:10v/v充分混合，分层后，上层溶剂和下层溶剂备用；取下层溶剂，溶解牛尾蒿乙酸乙酯提取部位，所得样品溶液通过高速逆流色谱进行分离；高速逆流色谱的操作如下：设备温度30～40℃，将上层溶剂以15～25mL/min的流速泵入高速逆流色谱仪，打开主机，待主机正转转速稳定在800～1000rpm后，再以1～3mL/min流速泵入下层溶剂，待两相平衡后，由进样阀注入样品溶液，在254±3nm或280±3nm下检测流出物，并收集出峰时间在30min后的第二段色谱峰。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：高速逆流色谱中，温度为35℃。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：高速逆流色谱中，上层溶剂泵入流速为20mL/min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：主机正转转速850rpm。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘圆，杨正明，李莹，黄艳菲，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：四川,51