生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法技术

本发明专利技术公开生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)植物生长调节剂乙烯利的检测。本发明专利技术中生物体液中乙烯利在1μg/mL的添加水平，方法的回收率可达70％，精密度小于8％。生物体液中乙烯利的GC‑FID方法的检出限为0.1μg/mL，仪器检出限为0.3μg/mL。建立染毒动物模型，通过测定乙烯利植物生长调节剂在染毒大鼠血液中浓度，验证方法的可靠性,为植物生长调节剂相关中毒案件的检验提供科学依据。

Detection of ethephon in plant growth regulators

The invention discloses a detection method for ethephon of plant growth regulator in biological fluid, which comprises the following steps: (1) pretreatment of biological fluid; (2) detection of ethephon of plant growth regulator. The addition level of ethephon in the biological liquid of the invention is 1 ug/mL. The recovery rate of the method can reach 70%, and the precision is less than 8%. The detection limit of ethephon in biological fluids was GC 0.1 FID and the detection limit was 0.3 g/mL g/mL. Establish an animal model of ethephon poisoning, and verify the reliability of the method by measuring the concentration of ethephon plant growth regulator in the blood of poisoned rats, so as to provide a scientific basis for the detection of plant growth regulator-related poisoning cases.

【技术实现步骤摘要】
生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法
本专利技术涉及法医药品分析领域。更具体地，涉及一种生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法。
技术介绍
植物生长调节剂是用于调节植物生长发育的一类农药，可在植物体内传导至作用部位，以促进或抑制其生命过程中的某些环节，使之向符合人类的需要发展。随着农业现代化进程的加速推进，运用植物生长调节剂调控植物的生长发育和产量形成(即作物化学控制技术)，已经逐渐成为农业生产中不可缺少的重要措施。与传统农药相比,植物生长调节剂具有许多优越性，它能够调控基因的表达，实现作物生长的“人为”调控。国内外已经把植物生长调节剂的应用作为21世纪农业实现超产的主要措施之一。乙烯利是近年来案件中常出现较多的植物生长调节剂。乙烯利的物化性质及药物性质总结如下：乙烯利又名乙烯磷，一试灵，英文名称ethephon，其化学名为2-氯乙基膦酸，分子式为C2H6ClO3P，分子量144.5，熔点74-75℃，易溶于水、甲醇。乙烯利纯品为无色针状晶体，是一种优质高效植物生长调节剂。其进入植物体内后的主要作用方式是作为外源乙烯的载体，释放出乙烯，对植物细胞分裂扩大、营养生长、休眠、萌发、开花、性别分化、果实成熟以及器官衰老脱落等方面都起着重要的调节作用，在水稻、玉米、甘蔗、茶叶、番茄、香蕉、菠萝、黄瓜等作物上被广泛应用。乙烯利属低毒类农药，LD50(口服)：大鼠3030mg/kg，LD50(经皮)：兔1560mg/kg。这种植物生长调节剂的特点：为化学合成类农药，在生产上被作为生长促进剂广泛应用,但目前乙烯利植物生长调节剂缺乏相应的系统性的检验方法，因此建立生物体液(血、尿)中植物生长调节剂乙烯利的快速灵敏的检验方法，并利用简单的动物模型，反应其在血液中的代谢情况以解决案件中的检验难题，是法庭科学的实际工作中的现实需要。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种简便快速、灵敏度高、重现性好、结果准确可靠的生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法。为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)植物生长调节剂乙烯利的检测。上述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，步骤(1)中，生物体液为血液或尿液。上述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，步骤(1)中，含乙烯利生物体液的预处理采用顶空反应法。上述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，步骤(1)中，所述顶空反应法包括如下步骤：取含乙烯利生物体液样品于顶空瓶中，加入饱和KOH溶液，加盖密封混合均匀后，放入自动顶空进样器，留待检测；每1mL含乙烯利生物体液、饱和KOH溶液加入量为0.5mL-2mL；顶空平衡温度为60℃-80℃；顶空平衡时间为10min-30min。上述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，步骤(2)中，将自动顶空进样器与顶空气相色谱连接，检测含乙烯利生物体液中乙烯利的含量：顶空气相色谱的色谱条件为：色谱柱：J&W123-9134毛细管柱，规格：30m×0.32mm×0.18mm；程序升温：40℃起始，保持4min，以20℃/min升至150℃，保持2min；进样口温度200℃；载气：高纯氮气；流速：1.5mL/min；分流比：20:1；压力:4.90Psi；补偿气:氮气，流速25mL/min，空气，流速400mL/min，氢气，流速60mL/min；顶空气相色谱质谱的质谱条件为：传输线温度200℃；离子源温度230℃；离子源：EI，电子轰击能量70eV；扫描方式：SCAN；扫描范围：40amu～450amu；溶剂延迟时间：3min；自动顶空进样器的自动顶空条件：载气压力：4Psi；顶空瓶加压时间：0.2min；顶空瓶加热平衡时间：15min；定量圈平衡时间：0.05min；定量圈充样气时间：0.2min；进样时间：1min；循环时间：15min；顶空瓶加热温度：70℃；定量圈温度：95℃；传输线温度：110℃。上述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，含乙烯利体液在-20℃条件下保存，保存时间小于或等于1月个月；经冷冻保存之后的含乙烯利体液，冻融后在72h内进行检测。本专利技术的有益效果如下：(1)生物体液中，乙烯利在1μg/mL的添加水平，方法的回收率可达70％，精密度小于8％。(2)生物体液中乙烯利的GC-FID方法的检出限为0.1μg/mL，仪器检出限为0.3μg/mL。(3)建立染毒动物模型，通过测定植物生长调节剂乙烯利在染毒大鼠血液中浓度，验证方法的可靠性,为植物生长调节剂相关中毒案件的检验提供科学依据。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明。图1乙烯利的化学结构图2乙烯利标准工作曲线；图3空白血样乙烯利的色谱图；图4添加血样中乙烯利的色谱图；图5空白尿样乙烯利的色谱图；图6添加尿样中乙烯利的色谱图；图7乙烯利峰面积随平衡温度和时间变化趋势的柱状图。具体实施方式为了更清楚地说明本专利技术，下面结合优选实施例和附图对本专利技术做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本专利技术的保护范围。第一部分乙烯利检测方法一、实验部分1实验材料1.1药品与试剂乙烯利购自Dr.Ehrenstorfer公司(德国)，纯度98.0％；KOH、HCl等酸碱试剂(分析纯，北京化学试剂公司)；去离子水经Milliporesimplicity纯水系统制备。1.2生物样品空白人全血购自北京市红十字血液中心；空白尿采自一周内未服用任何药物的健康志愿者。1.3标准溶液的配制1.3.1储备液的配制：乙烯利储备液的配制：精确称取乙烯利标准品10mg于10mL容量瓶中，加少量0.1MHCl溶解并定容至刻度，配制成含1mg/mL乙烯利储备液，4℃冰箱中保存，备用。1.3.2工作液的配制：乙烯利标准工作液的配置：移取各标准储备液一定量，稀释为100μg/mL、50μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL浓度乙烯利的标准工作溶液，4℃冰箱中避光保存。1.4仪器及参考条件气相色谱仪：美国安捷伦公司，型号Agilent7890A配氢火焰离子化检测器(FID)色谱柱：PEElite-wax(30m×0.32mm×0.25mm)J&W123-9134(30m×0.32mm×0.18mm)MilliporeSimLicity纯水净化系统(法国)ScientificIndustries漩涡振荡器(USA)SORVALL高速冷冻离心机(德国)EYELA高速振荡器(日本)EYELACUTEMIXERCM100振荡器(日本京东)；10～100μL，10～1000μL自动移液枪(德国Eppendorf)2样品的制备方法取标准工作样品或生物体液样品(血、尿)1mL于10mL顶空瓶中，加入饱和KOH溶液1mL，加盖密封混合均匀后放入自动顶空进样器进行测定。3仪器参考条件3.1气相色谱条件(GC)：a)色谱柱：J&W123-9134毛细管柱(30m×0.32mm×0.18mm)PEElite-wax毛细管柱(30m×0.32mm×0.25mm)；b本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)植物生长调节剂乙烯利的检测。

【技术特征摘要】
1.生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)植物生长调节剂乙烯利的检测。2.根据权利要求1所述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，生物体液为血液或尿液。3.根据权利要求2所述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，含乙烯利生物体液的预处理采用顶空反应法。4.根据权利要求3所述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述顶空反应法包括如下步骤：取含乙烯利生物体液样品于顶空瓶中，加入饱和KOH溶液，加盖密封混合均匀后，放入自动顶空进样器，留待检测；每1mL含乙烯利生物体液、饱和KOH溶液加入量为0.5mL-2mL；顶空平衡温度为60℃-80℃；顶空平衡时间为10min-30min。5.根据权利要求4所述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，将自动顶空进样器与气相色谱连接，检测含乙烯利生物体液中乙烯利的含量。6.根据权利要求5所述生物体液中植物生长调节剂乙烯利的检测方法，其特征在于，顶空气相色谱的色谱条件为：色谱柱：J&W123-9134毛细管柱，规格：30m×0.32mm×0.18mm；程序升...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔冠峰，任昕昕，宋歌，王瑞花，王爱华，董林沛，侯小平，常靖，董颖，黄健，张云峰，魏春明，杜鸿雁，王芳琳，于忠山，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京,11