一种基于柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法的水中草铵膦的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种基于柱前衍生结合高效液相色谱‑荧光法的水中草铵膦的测定方法，包括以下步骤：移取草铵膦溶液于棕色玻璃样品瓶中，依次加入四硼酸钠水溶液和氯甲酸‑9‑芴基甲酯丙酮溶液，盖紧瓶盖，涡旋30s，在水浴下反应；反应完成后，将全部液体转移至刻度管中，加入分析纯二氯甲烷，振荡，室温下静置后取上层水样过0.22μm滤膜；进高效液相色谱检测。本发明专利技术可避免高浓度的衍生化试剂水解产物对离子源的污染，为水中草铵膦的检测提供了一个简便、快速、准确的方法。

A method for determination of ammonium phosphatide in water based on pre column derivatization and high performance liquid chromatography fluorescence spectrometry

The invention discloses a method for determination of glyphosate in water based on pre-column derivatization and high performance liquid chromatography fluorescence method. The method comprises the following steps: removing glyphosate solution in brown glass sample bottle, adding sodium tetraborate solution and chloroformate 9 fluorenyl methyl ester acetone solution in turn, tightening the cap, scrolling for 30s, and in water. After the reaction is completed, all the liquids are transferred to the calibration tube, and pure dichloromethane is added to the calibration tube. After the reaction is completed, the upper water sample is taken and passed through the 0.22 micron filter membrane at room temperature, and then detected by high performance liquid chromatography. The invention can avoid the pollution of ion source caused by hydrolysate of high concentration derivative reagent, and provides a simple, fast and accurate method for the detection of glyphosate in water.

【技术实现步骤摘要】
一种基于柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法的水中草铵膦的测定方法
本专利技术属于草铵膦的检测
，具体地说，涉及一种基于柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法的水中草铵膦的测定方法。
技术介绍
草铵膦是一种膦酸类、广谱、非选择性、触杀性和非残留性除草剂。与草甘膦相比，草铵膦更能有效去除多年生恶性杂草。尽管草铵膦属于非持久性农药，但其大量使用仍造成了严重的环境污染。大量研究表明，低剂量草铵膦会影响初生动物脑部发育，动物食用过量草铵膦会导致发抖、抽搐、呼吸困难等中毒症状。同时，草铵膦的不合理使用还会对水体造成污染，尤其对饮用水以及饮用水源的污染将会对人体健康产生重大威胁。因此，很有必要建立一种简便、快速的草铵膦检测方法。草铵膦在结构中含有膦酸基、氨基、羟基，是极强的两性化合物。使用气相色谱和气相色谱-质谱联用技术进行草铵膦检测时，需要将其转化成可气化的物质，该操作会引入过多的其他试剂，且操作过程繁琐，检测效率和灵敏度都相对较低。草铵膦紫外吸收弱，且很难在常规的C18柱子长保留，所以使用液相色谱-紫外测定时灵敏度较低。使用液相色谱-质谱直接测定草铵膦时，仪器响应较低，且需要离子交换柱等特殊柱子进行分离。所以，目前文献报道中常采用氯甲酸-9-芴基甲酯对草铵膦进行柱前衍生，再结合液相色谱质谱法和液相色谱-荧光法进行草铵膦检测。虽然固相萃取小柱可以去除反应体系中的硼酸钠盐和部分杂质，但仍不能完全去除衍生化试剂水解产物和一些影响草铵膦定量的干扰杂质。另外，衍生化试剂水解产物浓度高，进入质谱会造成离子源的污染，影响质谱的稳定性，干扰草铵膦的准确定量。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种基于柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法的水中草铵膦的测定方法，本专利技术在WatersT3色谱柱上对草铵膦衍生化产物进行分离，在不使用固相萃取小柱的前提条件下，排除了杂质对草铵膦定量的干扰，为水中草铵膦的检测提供了一个简便、快速、准确的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种基于柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法的水中草铵膦的测定方法，包括以下步骤：步骤1、衍生化反应：移取草铵膦溶液于棕色玻璃样品瓶中，依次加入四硼酸钠水溶液和氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液，盖紧瓶盖，涡旋30s，在水浴下反应；步骤2、预处理：反应完成后，将全部液体转移至刻度管中，加入分析纯二氯甲烷，振荡，室温下静置后取上层水样过0.22μm滤膜；步骤3、进高效液相色谱检测。可选地，所述的四硼酸钠缓冲溶液通过以下方法制备得到：称取3.80g四硼酸酸钠，用饮用纯净水定容至100.0mL，得到浓度为0.100mol/L的四硼酸钠水溶液。可选地，所述的氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液通过以下方法制备得到：称取0.10g氯甲酸-9-芴基甲酯，用分析纯丙酮定容至100.0mL，得到浓度为1.0mg/mL的氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液。可选地，所述的待测水样、四硼酸钠水溶液和氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液的体积比为：0.5-2:0.5-2：0.5-1.5。可选地，水浴温度为35-45℃，水浴时间为30-120min。可选地，分析纯二氯甲烷与草铵膦溶液的体积比为4:0.5-4:2；振荡时间为0.5-1.5min；静置时间为8-12min。可选地，高效液相色谱检测的色谱条件如下：色谱柱：WatersT3液相色谱柱；色谱柱温度：40℃；进样量20.0μL；流速：0.8mL/min；流动相A：5mmol/L乙酸铵水溶液；流动相B：色谱纯乙腈；梯度洗脱程序：0min～1min，90％A；1min～12min，90％A～50％A；12min～13min，50％A；13min～14min，50％A～10％A；14min～17min，10％A；17min～17.1min，10％A～90％A；17.1min～25min，90％A。可选地，所述的WatersT3液相色谱柱尺寸为：250mm×4.6mm×5μm。可选地，流动相A通过以下方法制备得到：称取0.3854g乙酸铵，用饮用纯净水定容至1L，0.22μm滤膜过滤后，制备得到流动相A。与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：1)本专利技术的方法不需要固相萃取小柱即可排除杂质对草铵膦定量的干扰。2)由于排除了杂质的干扰，使得该方法的检出限(LOD)为0.000370mg/kg，定量限(LOQ)为0.00123mg/kg可与液相色谱-质谱相媲美。3)本专利技术可避免高浓度的衍生化试剂水解产物对离子源的污染，为水中草铵膦的检测提供了一个简便、快速、准确的方法。当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是本专利技术草铵膦衍生化产物(0.00500mg/L)的PhenomenexGEMINIC18柱色谱图；图2是本专利技术草铵膦衍生化产物(0.00500mg/L)的WatersT3柱色谱图；图3是本专利技术草铵膦标准曲线。具体实施方式以下将配合实施例来详细说明本专利技术的实施方式，藉此对本专利技术如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。本专利技术公开了一种基于柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法的水中草铵膦的测定方法，包括以下步骤：步骤1、衍生化反应：将待测水样于10mL棕色玻璃样品瓶中，分别依次加入四硼酸钠水溶液和氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液，其中，待测水样、四硼酸钠水溶液和氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液的体积比为：0.5-2:0.5-2：0.5-1.5，盖紧瓶盖，涡旋约30s，在35-45℃的水浴下反应30-120min；四硼酸钠缓冲溶液通过以下方法制备得到：称取3.80g四硼酸酸钠，用饮用纯净水定容至100.0mL，得到浓度为0.100mol/L的四硼酸钠水溶液。氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液通过以下方法制备得到：称取0.10g氯甲酸-9-芴基甲酯，用分析纯丙酮定容至100.0mL，得到浓度为1.0mg/mL的氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液。步骤2、预处理：反应完成后，将全部液体转移至10mL的刻度管中，加入分析纯二氯甲烷，分析纯二氯甲烷与草铵膦溶液的体积比为4:0.5-4:2；振荡0.5-1.5min，室温下静置8-12min后取上层水样过0.22μm滤膜；步骤3、进高效液相色谱检测；其中，色谱条件如下：色谱柱：WatersT3液相色谱柱(250mm×4.6mm×5μm)；色谱柱温度：40℃；进样量20.0μL；流速：0.8mL/min；流动相A：5mmol/L乙酸铵水溶液(称取0.3854g乙酸铵，用饮用纯净水定容至1L，0.22μm滤膜过滤后使用)；流动相B：色谱纯乙腈；梯度洗脱程序：0min～1min，90％A；1min～12min，90％A～50％A；12min～13min，50％A；13min～14min，50％A～10％A；14min～17min，10％A；17min～17.1min，10％A～90％A；17.1min～25min，90％A。实施例1移取1mL水样于10mL棕色玻璃样品瓶中，分别依次加入0.5mL0.1mol/L的四硼酸钠水溶液和1mL1mg本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于柱前衍生结合高效液相色谱‑荧光法的水中草铵膦的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、衍生化反应：移取草铵膦溶液于棕色玻璃样品瓶中，依次加入四硼酸钠水溶液和氯甲酸‑9‑芴基甲酯丙酮溶液，盖紧瓶盖，涡旋30s，在水浴下反应；步骤2、预处理：反应完成后，将全部液体转移至刻度管中，加入分析纯二氯甲烷，振荡，室温下静置后取上层水样过0.22μm滤膜；步骤3、进高效液相色谱检测。

【技术特征摘要】
1.一种基于柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法的水中草铵膦的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、衍生化反应：移取草铵膦溶液于棕色玻璃样品瓶中，依次加入四硼酸钠水溶液和氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液，盖紧瓶盖，涡旋30s，在水浴下反应；步骤2、预处理：反应完成后，将全部液体转移至刻度管中，加入分析纯二氯甲烷，振荡，室温下静置后取上层水样过0.22μm滤膜；步骤3、进高效液相色谱检测。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的四硼酸钠缓冲溶液通过以下方法制备得到：称取3.80g四硼酸酸钠，用饮用纯净水定容至100.0mL，得到浓度为0.100mol/L的四硼酸钠水溶液。3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液通过以下方法制备得到：称取0.10g氯甲酸-9-芴基甲酯，用分析纯丙酮定容至100.0mL，得到浓度为1.0mg/mL的氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液。4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的待测水样、四硼酸钠水溶液和氯甲酸-9-芴基甲酯丙酮溶液的体积比为：0.5-2:0.5-2：0.5-1.5。5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，水...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴声敢，王姗姗，王菲迪，范艳，赵学平，王强，柳新菊，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33