本发明专利技术涉及甲壳动物生长发育领域，具体涉及一种CARP‑1基因及其在促进日本沼虾生长中的应用。日本沼虾CARP‑1基因具有SEQ ID NO:1所示的碱基序列。本发明专利技术提供的引物从日本沼虾的肌肉中克隆了一种CARP‑1基因；根据CARP‑1基因的开放阅读框设计RNA干扰引物，将双链RNA注射到日本沼虾体内沉默CARP‑1基因，可使日本沼虾的蜕皮次周期缩短、生长速度加快，该结果为提升日本沼虾的生产性能提供了理论参考。本发明专利技术首次阐明了CARP‑1基因具有调控甲壳动物生长发育的功能。
【技术实现步骤摘要】
一种CARP-1基因及其应用
本专利技术涉及甲壳动物生长发育领域，具体涉及一种CARP-1基因及其在促进日本沼虾生长中的应用。
技术介绍
生长发育是动物体最基本的生物学过程，甲壳动物亦不例外。由于几丁质外骨骼的存在，有关甲壳动物生长发育的研究多集中于蜕皮机制的调控方面，并取得了众多的研究成果。不可否认的是，蜕皮机制的确在甲壳动物的生长发育过程中发挥重要作用。但是也应清醒地认识到，甲壳动物躯体的生长才是造成蜕皮的原因。从这个角度来讲，蜕皮仅仅是甲壳动物生长的外在表现形式而已。因此，鉴定甲壳动物自身躯体生长的重要基因，不仅有助于了解甲壳动物生长发育这一基本的生物学过程，同时也对利用分子手段改良甲壳动物的产量和品质具有重要的生产意义。日本沼虾(Macrobrachiumnipponense)，俗称青虾、河虾，隶属于十足目、长臂虾科、沼虾属。具有适应性强、生长速度快、繁殖力强、个体大、营养丰富等特点，是我国重要的淡水经济虾类。根据《2017年中国渔业统计年鉴》，我国养殖青虾年产量为272,592吨。日本沼虾养殖已经成为渔民增产创收的重要手段之一，在我国的水产养殖中发挥着重要作用。近来随着养殖规模的不断扩大，日本沼虾出现了生产性能下降和种质资源退化的现象，其中个体小型化尤为突出，最终导致商品虾的规格降低，严重影响了日本沼虾的品质，成为日本沼虾养殖业发展的瓶颈之一。为选育大规格日本沼虾的优良品种，鉴定调控日本沼虾生长发育的重要基因就成为当前亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种CARP-1基因及其在促进日本沼虾生长中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：一种CARP-1基因，日本沼虾CARP-1基因具有SEQIDNO:1所示的碱基序列。所述日本沼虾CARP-1基因为与SEQIDNO:1所示的碱基序列同源性90％所示的序列。所述日本沼虾CARP-1基因的双链RNA为SEQINO:5所示的碱基序列。一种CARP-1基因的应用，所述日本沼虾CARP-1基因的双链RNA在促进日本沼虾生长中的应用。一种促进日本沼虾生长的制剂，含根据日本沼虾CARP-1基因，进行体外合成获得的双链RNA(dsRNA)的溶液；溶液指DEPC水或无菌水中。利用RNA干扰(RNAi)技术，根据SEQIDNO:1所示的碱基序列CARP-1基因的开放阅读框设计干扰引物，以日本沼虾的肌肉总RNA为模板进行PCR反应，再以PCR反应液为模板进行体外合成如SEQINO:5所示的双链RNA(dsRNA)，将获得的双链RNA(dsRNA)溶解于水中即得到促进日本沼虾生长的制剂(dsRNA-CARP-1)。水为DEPC水或无菌水中。进一步的说：根据CARP-1基因的开放阅读框设计干扰引物，以日本沼虾的肌肉总RNA为模板进行PCR反应(所得序列如SEQIDNO:4所示)，以PCR反应液为模板进行体外合成dsRNA-CARP-1，而后溶于水中，溶解后将其注射到日本沼虾的围心腔内，剂量是5μg/g，进而促进日本沼虾的生长。所述引物为正向上游引物序列如SEQIDNO:2所示，反向下游引物序列如SEQIDNO:3所示。一种制剂的应用，所述制剂在干扰CARP-1基因促进日本沼虾生长中的应用；其中使用剂量是5μg/g。本专利技术所具有的优点：本专利技术首次鉴定了与日本沼虾生长发育相关的CARP-1基因，CARP-1基因在表达水平下降的条件下会使日本沼虾的生长加快，证明CARP-1基因是日本沼虾生长发育的负调控因子。本专利技术将dsRNA-CARP-1提供至到日本沼虾体内，其在dsRNA刺激下的表达变化及其对日本沼虾蜕皮周期、体重的变化，阐明CARP-1基因的功能，推动CARP-1在其它甲壳动物中的研究。附图说明图1为本专利技术实施例提供的雄性日本沼虾注射dsRNA-CARP-1后的干扰效率图，其中：7d、14d、21d和28d分别是指注射后第7天、第14天、第21天和第28天。**代表P<0.01，干扰组为注射dsRNA-CARP-1，对照组为注射相同剂量的DEPC水。图2为本专利技术实施例提供的雌性日本沼虾注射dsRNA-CARP-1后的干扰效率图，其中：7d、14d、21d和28d分别是指注射后第7天、第14天、第21天和第28天。**代表P<0.01，干扰组为注射dsRNA-CARP-1，对照组为注射相同剂量的DEPC水。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本文使用的近似语在整个说明书和权利要求书中可用于修饰任何数量表述，其可在不导致其相关的基本功能发生变化的条件下准许进行改变。因此，由诸如“约”的术语修饰的值并不局限于所指定的精确值。在至少一些情况下，近似语可与用于测量该值的仪器的精度相对应。除非上下文或语句中另有指出，否则范围界限可以进行组合和/或互换，并且这种范围被确定为且包括本文中所包括的所有子范围。除了在操作实施例中或其他地方中指明之外，说明书和权利要求书中所使用的所有表示成分的量、反应条件等等的数字或表达在所有情况下都应被理解为受到词语“约”的修饰。本专利技术提供的引物从日本沼虾的肌肉中克隆了一种CARP-1基因；根据CARP-1基因的开放阅读框设计RNA干扰引物，将双链RNA注射到日本沼虾体内沉默CARP-1基因，可使日本沼虾的蜕皮次周期缩短、生长速度加快，该结果为提升日本沼虾的生产性能提供了理论参考。本专利技术首次阐明了CARP-1基因具有调控甲壳动物生长发育的功能。实施例1：日本沼虾CARP-1基因全长cDNA的获得总RNA提取：选取3g左右的日本沼虾，取其肌肉，放入盛有液氮的预冷研钵中，迅速研磨。使用Takara公司的RNAisoPlus提取试剂结合传统的酚仿抽提法进行提取肌肉的总RNA。经1.2％琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量，分光光度计分析该样品OD260/280比值在1.8～2.0之间，并测定RNA的浓度。cDNA第一链合成：以上述RNA为模板，按照TakaraM-MLV反转录试剂盒说明书进行第一链cDNA的合成。日本沼虾CARP-1全长cDNA序列的克隆：根据日本沼虾肌肉转录组的中间片段设计正向引物MF1(SEQIDNO:6)、正向引物MR1(SEQIDNO:7)和MF2(SEQIDNO:8)、正向引物MR2(SEQIDNO:9)，进行中间片段的验证。PCR扩增反应体系如下：PCR反应程序为：94℃预变性3min，然后进入下列循环：94℃30s，55℃30s，72℃90s，30个循环，最后72℃延伸5min，4℃保存。1.5％琼脂糖凝胶电泳检测。利用上海生工生物工程有限公司(Sangon)的柱式DNA胶回收试剂盒进行目的片段的回收，将产物连接到pMD18-T载体(Takara)，并转化入大肠杆菌DH5α，进行蓝白斑筛选，挑取单克隆白斑扩增培养后，将插入目的片段的阳性克隆送至上本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种CARP‑1基因，其特性在于，日本沼虾CARP‑1基因具有SEQ ID NO:1所示的碱基序列。
【技术特征摘要】
1.一种CARP-1基因，其特性在于，日本沼虾CARP-1基因具有SEQIDNO:1所示的碱基序列。2.按权利要求1所述的CARP-1基因，其特性在于，所述日本沼虾CARP-1基因为与SEQIDNO:1所示的碱基序列同源性90％所示的序列。3.按权利要求1或2所述的CARP-1基因，其特性在于，所述日本沼虾CARP-1基因的双链RNA为SEQINO:5所示的碱基序列。4.一种权利要求1所述的CARP-1基因的应用，其特性在于，所述日本沼虾CARP-1基因的双链RNA在促进日本沼虾生长中的应用。5.一种促进日本沼虾生长的制剂，其特征在于：含根据日本沼虾CARP-1基因进行体外合成获得的双链RNA(dsRNA)的溶液。6.按权利要求5所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：李法君，付春鹏，
申请(专利权)人：潍坊科技学院，
类型：发明
国别省市：山东,37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。