一种制备6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备6’‑丙二酰甲酰基人参皂苷F1的方法，包括：步骤1、取人参花蕾，粉碎，用95％乙醇热回流提取，浓缩成膏状即为总提物；步骤2、将总提物用25％乙醇溶解调整浓度为0.2g生药/mL，过滤，上样量为0.8BV，LX‑68大孔吸附树脂柱的柱床径高比为1:9，先用3BV的40％乙醇除杂，再用9BV的75％乙醇洗脱，收集8‑9BV的75％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味后冷冻干燥得到粗品冻干粉；步骤3、高速逆流分离，溶剂体系为体积比1:18:1:18:0.5的正丁醇/乙酸乙酯/甲醇/水/氯仿，根据色谱图收集6’‑丙二酰甲酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’‑丙二酰甲酰基人参皂苷F1。

【技术实现步骤摘要】
一种制备6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1的方法
本专利技术属于化学领域，具体涉及一种制备人参皂苷F1衍生物的方法，人参皂苷F1衍生物包括3-乙酰基人参皂苷F1、6’-乙酰基人参皂苷F1和6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1。
技术介绍
前期研究发现，3-乙酰基人参皂苷F1、6’-乙酰基人参皂苷F1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1具有优异的酪氨酸酶抑制活性，可以用于制备美白化妆品。从化学结构上看，3-乙酰基人参皂苷F1、6’-乙酰基人参皂苷F1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1为人参皂苷F1的衍生物，但是人参皂苷F1对酪氨酸酶的抑制活性极弱，远不如其衍生物。目前，分离制备3-乙酰基人参皂苷F1、6’-乙酰基人参皂苷F1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1必须依赖于反复硅胶柱层析，但是，反复硅胶柱层析死吸附强，损失大，根本不适用于规模化制备。而大孔树脂和高速逆流不仅样品损失少，而且易于规模化使用。若能够通过大孔树脂和高速逆流色谱的组合使用就分离得到3-乙酰基人参皂苷F1、6’-乙酰基人参皂苷F1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1，必然具有广阔应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种制备人参皂苷F1衍生物的方法，人参皂苷F1衍生物包括3-乙酰基人参皂苷F1、6’-乙酰基人参皂苷F1和6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1。本专利技术目的是通过如下技术方案实现的：一种制备3-乙酰基人参皂苷F1的方法，包括如下步骤：步骤1、总提物的制备取干燥的人参花蕾，用粉碎机粉碎，过筛，得人参花蕾粉末。随后用95％乙醇热回流提取，浓缩成膏状即为总提物。步骤2、大孔树脂富集将总提物用25％乙醇溶解调整浓度为0.2g生药/mL，过滤，上样量为0.8BV，LX-68大孔吸附树脂柱的柱床径高比为1:9，先用3BV的40％乙醇除杂，再用9BV的75％乙醇洗脱，收集8-9BV的75％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味后冷冻干燥得到粗品冻干粉。步骤3、高速逆流分离(1)两相溶剂系统配制两相溶剂系统为体积比1:18:1:18:0.5的正丁醇/乙酸乙酯/甲醇/水/氯仿，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层。将上相和下相分别放置不同容器，超声脱气待用。(2)样品溶液配制取粗品冻干粉用溶剂系统下相超声溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液，即为样品溶液。(3)HSCCC分离将配制好的溶剂系统上相泵入HSCCC螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.5mL/min、检测波长210nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡。进样阀注入10mL样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。(4)目标化合物流份收集根据色谱图收集6’-乙酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-乙酰基人参皂苷F1。根据色谱图收集3-乙酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得3-乙酰基人参皂苷F1。根据色谱图收集6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1。优选地，步骤1中，粉碎后过80目筛。优选地，步骤1中，提取时的料液比为1:10。优选地，步骤1中，用95％乙醇热回流提取3次，每次2h，合并提取液，浓缩成膏状。优选地，步骤2中，用脱脂棉过滤。优选地，步骤3中，超声脱气20min待用。有益效果：本专利技术提供的制备方法不需要使用反复硅胶柱层析，仅通过大孔树脂和高速逆流配合使用即可分离得到高纯度的6’-乙酰基人参皂苷F1、3-乙酰基人参皂苷F1和6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1，易于规模化应用。附图说明图1为高速逆流色谱图。根据色谱图收集6’-乙酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-乙酰基人参皂苷F1。根据色谱图收集3-乙酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得3-乙酰基人参皂苷F1。根据色谱图收集6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。一、实验材料和仪器人参花蕾干品购于亳州中药材市场。LX-68大孔吸附树脂购于郑州勤实科技有限公司。高速逆流色谱仪TEB300B购于上海同田生物技术股份有限公司。二、实验方法和结果1、总提物的制备取5kg干燥的人参花蕾，用粉碎机粉碎，过80目筛，得人参花蕾粉末。随后用95％乙醇以料液比1:10热回流提取3次，每次2h，合并提取液，浓缩成膏状即为总提物。2、大孔树脂富集将总提物用25％乙醇溶解调整浓度为0.2g生药/mL，脱脂棉过滤，上样量为0.8BV，LX-68大孔吸附树脂柱的柱床径高比为1:9，先用3BV的40％乙醇除杂，再用9BV的75％乙醇洗脱，收集8-9BV的75％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味后冷冻干燥得到粗品冻干粉。3、高速逆流分离(1)两相溶剂系统配制两相溶剂系统为正丁醇:乙酸乙酯:甲醇:水:氯仿(体积比1:18:1:18:0.5)，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层。将上相和下相分别放置不同容器，超声脱气20min待用。(2)样品溶液配制取粗品冻干粉用溶剂系统下相超声溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液，即为样品溶液。(3)HSCCC分离将配制好的溶剂系统上相泵入HSCCC螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.5mL/min、检测波长210nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡。进样阀注入10mL样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。(4)目标化合物流份收集色谱图如图1所示。根据色谱图收集6’-乙酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-乙酰基人参皂苷F1。根据色谱图收集3-乙酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得3-乙酰基人参皂苷F1。根据色谱图收集6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1。4、纯度检测使用HPLC-DAD分别测定得到的6’-乙酰基人参皂苷F1、3-乙酰基人参皂苷F1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1的纯度，分别为98.6％、98.1％、99.5％。本专利技术提供的制备方法不需要使用反复硅胶柱层析，仅通过大孔树脂和高速逆流配合使用即可分离得到高纯度的6’-乙酰基人参皂苷F1、3-乙酰基人参皂苷F1和6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1，易于规模化应用。上述实施例的作用在于具体介绍本专利技术的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本专利技术的保护范围局限于该具体实施例。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备6’‑丙二酰甲酰基人参皂苷F1的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、总提物的制备取干燥的人参花蕾，用粉碎机粉碎，过筛，得人参花蕾粉末。随后用95％乙醇热回流提取，浓缩成膏状即为总提物。步骤2、大孔树脂富集将总提物用25％乙醇溶解调整浓度为0.2g生药/mL，过滤，上样量为0.8BV，LX‑68大孔吸附树脂柱的柱床径高比为1:9，先用3BV的40％乙醇除杂，再用9BV的75％乙醇洗脱，收集8‑9BV的75％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味后冷冻干燥得到粗品冻干粉。步骤3、高速逆流分离(1)两相溶剂系统配制两相溶剂系统为体积比1:18:1:18:0.5的正丁醇/乙酸乙酯/甲醇/水/氯仿，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层。将上相和下相分别放置不同容器，超声脱气待用。(2)样品溶液配制取粗品冻干粉用溶剂系统下相超声溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液，即为样品溶液。(3)HSCCC分离将配制好的溶剂系统上相泵入HSCCC螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.5mL/min、检测波长210nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡。进样阀注入10mL样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。(4)目标化合物流份收集根据色谱图收集6’‑丙二酰甲酰基人参皂苷F1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’‑丙二酰甲酰基人参皂苷F1。...

【技术特征摘要】
1.一种制备6’-丙二酰甲酰基人参皂苷F1的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、总提物的制备取干燥的人参花蕾，用粉碎机粉碎，过筛，得人参花蕾粉末。随后用95％乙醇热回流提取，浓缩成膏状即为总提物。步骤2、大孔树脂富集将总提物用25％乙醇溶解调整浓度为0.2g生药/mL，过滤，上样量为0.8BV，LX-68大孔吸附树脂柱的柱床径高比为1:9，先用3BV的40％乙醇除杂，再用9BV的75％乙醇洗脱，收集8-9BV的75％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味后冷冻干燥得到粗品冻干粉。步骤3、高速逆流分离(1)两相溶剂系统配制两相溶剂系统为体积比1:18:1:18:0.5的正丁醇/乙酸乙酯/甲醇/水/氯仿，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层。将上相和下相分别放置不同容器，超声脱气待用。(2)样品溶液配制取粗品冻干粉用溶剂系统下相超声溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液，即为样品溶液。(3)HSCCC分离将配制好的溶剂系统上相泵...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢裳幸，
申请(专利权)人：卢裳幸，
类型：发明
国别省市：江苏,32