一种从爬山虎中提取木犀草素和白藜芦醇的方法技术

本发明专利技术涉及一种从爬山虎中提取木犀草素和白藜芦醇的方法，具体步骤包括如下：对爬山虎鲜品进行微生物处理，采用乙醚回流提取，过滤，浓缩；滤渣加入复合菌发酵，乙醇回流提取，过滤，浓缩，加乙醚萃取，萃取液浓缩上大孔吸附树脂柱纯化，结晶，加乙醇溶解后脱色，再结晶得白藜芦醇纯品；下层液体加乙醇溶解，过滤，滤液上大孔吸附树脂柱，乙醇洗脱液浓缩，结晶得木犀草素纯品。

A method for extracting luteolin and resveratrol from Parthenocissus

The present invention relates to a method for extracting luteolin and resveratrol from Parthenocissus crassipes. The specific steps are as follows: microbial treatment of Parthenocissus crassipes fresh products, ether reflux extraction, filtration and concentration; fermentation of filter residue with compound bacteria, ethanol reflux extraction, filtration, concentration, ether extraction, extract concentration. Resveratrol was purified by macroporous resin column, crystallized, decolorized by adding ethanol, and recrystallized. The lower liquid was dissolved by adding ethanol, filtered, macroporous resin column on filtrate, concentrated by ethanol eluent, and purified luteolin was obtained.

【技术实现步骤摘要】
一种从爬山虎中提取木犀草素和白藜芦醇的方法所属
本专利技术涉及一种从爬山虎中提取分离木犀草素和白藜芦醇的方法，属于天然产物化学的

技术介绍
爬山虎，又叫捆石龙、枫藤、小虫儿卧草、红丝草、红葛、趴山虎、红葡萄藤、巴山虎，葡萄科植物。夏季开花，花小，呈黄绿色，浆果紫黑色。常见攀缘在墙壁岩石上。爬山虎的根茎可入药，破瘀血、消肿毒；果可酿酒，但它的根会分泌酸性物质腐蚀石灰岩,它的根会沿着墙的缝隙钻入其中,使缝隙过大,严重可至墙体碎裂倒塌。公开号为CN1948459的中国专利介绍了一种能产白藜芦醇的枝孢霉属内生真菌，从爬山虎内生真菌中克隆了芪合酶基因(sts)，它与爬山虎中sts基因的编码序列相似性为95.25％，经18SrDNA序列鉴定该真菌属枝孢霉菌。高效液相色谱和质谱分析表明，该菌在离体培养下也能合成白藜芦醇。公开号为CN101973975A的中国专利介绍了一种从灰毡毛忍冬提取木犀草素的方法，步骤包括：(1)粉碎干燥灰毡毛忍冬，并将灰毡毛忍冬、60％乙醇按重量(kg)/体积比(V)＝1∶1-3进行混合，加热回流提取；(2)提取液先纱布粗滤，然后离心取上清液，减压浓缩至无乙醇味；(3)将浓缩液用1.5-3倍体积的乙酸乙酯萃取三次，分离乙酸乙酯层并进行浓缩，直至获得干燥物；(4)加入60％乙醇进行加热溶解，然后加入活性碳进行脱色，再进行浓缩直至获得干燥物；(5)加入90％乙醇进行加热溶解，然后加入热水调节乙醇终浓度为30-40％，室温过夜结晶，得木犀草素纯品。公开号为CN104710391A的中国专利介绍了一种利用花生壳提取木犀草素和β-谷甾醇的方法，步骤包括：(1)花生壳的收集：将花生壳晒干或烘干粉碎原料至20～40目，加入70～85％乙醇水溶液，加热至35～55℃回流提取2～5h，陶瓷膜过滤一次得滤液，滤渣重复提取一次，合并滤液；(2)向滤液中加入颗粒活性碳进行脱色，陶瓷膜过滤得脱色滤液；(3)将脱色滤液在40～50℃下进行减压浓缩至干，得干燥物，再加入质量比为7～12％的氢氧化钠水溶液，混合均匀后静置20～30min；(4)向第(3)步所得混合溶液加入乙酸乙酯进行萃取，得含有乙酸乙酯的萃取液和不含有乙酸乙酯的水溶液；(5)将含有乙酸乙酯的萃取液减压浓缩至干得到β-谷甾醇产品；(6)将不含有乙酸乙酯的水溶液加入盐酸调节pH，使pH小于5.5以下，加入两倍至三倍体积的石油醚进行萃取得萃取液；(7)将萃取液40℃下减压浓缩至干得到木犀草素粗品用75％乙醇水溶液溶解，加入等体积的45～70℃热水，减压浓缩回收乙醇，余液放入冰箱冷却至4℃下静置48h，得到木犀草素结晶，重结晶一次得到高纯度的木犀草素。公开号为CN105566273A的中国专利介绍了一种玉米须中木犀草素的提取方法，具体步骤是：a)原料处理：将玉米须制备成玉米须粉末，置于干燥环境中备用；b)微波提取：将步骤a)中玉米须粉末按20mL/g～40mL/g液料比加入体积分数为60％-80％的乙醇溶液中，充分振荡并密封，后置于微波炉中进行微波提取；c)超声波提取：将步骤b)微波处理后的提取液放入超声波清洗器中，进行超声波提取；然后进行离心处理，得到玉米须木犀草素样品液；d)浓缩：将步骤c)得到的玉米须木犀草素样品液在45℃-55℃温度条件下减压浓缩，得到玉米须木犀草素浓缩液；e)储存：将步骤d)得到的玉米须木犀草素浓缩液于2℃-8℃温度条件下避光储存。综上所述，木犀草素和白藜芦醇均具有较强的药理作用，在医药学领域的应用前景广阔。目前爬山虎未得到综合开发利用，探索从爬山虎中同时提取木犀草素和白藜芦醇意义非凡。
技术实现思路
目前公开的文献资料仅研究从爬山虎中提取活性成份白藜芦醇，但未对其他活性成分进行综合利用。针对爬山虎的活性成分未综合开发利用问题，本专利技术提供一种操作简单、工艺合理、快速同时提取木犀草素和白藜芦醇的生产工艺。本专利技术采用的技术方案包括：对爬山虎鲜品进行微生物处理，采用乙醚回流提取，过滤，浓缩；滤渣加入复合菌发酵，乙醇回流提取，过滤，浓缩，加乙醚萃取，萃取液浓缩上大孔吸附树脂柱纯化，结晶，加乙醇溶解后脱色，再结晶得白藜芦醇纯品；下层液体加乙醇溶解，过滤，滤液上大孔吸附树脂柱，乙醇洗脱液浓缩，结晶得木犀草素纯品。因此，本专利技术提供一种从爬山虎中提取木犀草素和白藜芦醇的方法，具体步骤包括如下：(1)将新鲜爬山虎根茎喷洒A号营养液，室温暗培养10～20天，再喷洒1～10％酵母菌液，继续培养3～5天，在40～50℃下干燥，再粉碎至80目～120目，加入乙醚回流提取80～100min，过滤得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ，滤液Ⅰ进行浓缩至原有体积的1/20～1/40，得浓缩液Ⅰ，其中加入乙醚体积L与爬山虎重量kg比为1～5:1。(2)滤渣Ⅰ喷洒5～15％复合菌发酵液2～3天，加入70～90％乙醇溶液回流提取2～4h，过滤得滤液Ⅱ，进行浓缩至原有体积的1/15～1/30，得浓缩液Ⅱ，其中加入乙醇溶液体积L与爬山虎重量kg比为0.5～4:1。(3)将浓缩液Ⅰ和浓缩液Ⅱ合并后加两倍体积的乙醚萃取60～120min，得乙醚液Ⅰ和下层液体Ⅰ。(4)将乙醚液Ⅰ浓缩至原有体积的1/5～1/15，上大孔吸附树脂柱，吸附30～60min后，用四倍至六倍柱体积的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液Ⅰ，浓缩至原有体积的1/5～1/15，室温下放置至结晶析出，过滤得粗结晶。(5)粗结晶加乙醇溶液溶解，加适量活性炭脱色，静置30～60min，过滤，浓缩至结晶析出，放冷结晶，重结晶得白藜芦醇纯品。(6)将下层液体Ⅰ浓缩至原有体积的1/15～1/25，再与乙醇溶液进行混合30～60min，过滤得滤液Ⅲ，上大孔吸附树脂柱，吸附20～50min，先用两倍至四倍柱体积的水进行洗柱，弃去水洗脱液，再用四倍至六倍柱体积的乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ。(7)将洗脱液Ⅱ浓缩至原有体积的1/15～1/25，结晶，过滤，重结晶得木犀草素纯品。所述过滤优选陶瓷膜过滤1次，膜孔孔径大小为0.22μm，所述浓缩过程都是在减压条件下进行，温度在55℃～65℃之间。所述步骤(1)中所述A号营养液优选为含有0.5mg/LIAA的Ms无糖液体培养基，其中使用的量L与爬山虎重量kg比为0.5～5:10。所述步骤(1)中所述加入酵母菌液的量L与爬山虎重量kg比1～10：100。所述步骤(2)中所述加入复合菌发酵液的量L与爬山虎重量kg比5～15：100；复合菌为木霉与酵母菌，其混合比例为3：1或4：1。所述步骤(4)、(5)和(6)中所述乙醇溶液优选75～90％乙醇水溶液，即为乙醇与水的混合液，90％乙醇溶液是指90mL乙醇加入10ml水进行混合即可。所述步骤(4)和(6)中所述大孔吸附树脂柱优选NKA-9、D3520、D4020、H103、D1400、ADS-17、D941。所述步骤(5)中所述加入乙醇溶液的量L与粗结晶重量kg比为5～15:1；加入活性炭的量kg与乙醇溶液体积L比为0.2～5:100。所述步骤(6)中所述加入乙醇溶液的量L与下层液体Ⅰ的体积L比为2～6:1。技术效果1、通过爬山虎进行发芽和微生物刺激预处理，大大提高了爬山虎中白藜芦醇和木犀草素，大大提高了爬山虎的利用率和附加值，这有效降低了木犀草素和白藜芦醇的生产成本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从爬山虎中提取木犀草素和白藜芦醇的方法，其特征在于，具体步骤包括如下：(1)将新鲜爬山虎根茎喷洒A号营养液，室温暗培养10～20天，再喷洒1～10％酵母菌液，继续培养3～5天，在40～50℃下干燥，再粉碎至80目～120目，加入乙醚回流提取80～100min，过滤得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ，滤液Ⅰ进行浓缩至原有体积的1/20～1/40，得浓缩液Ⅰ，其中加入乙醚体积L与爬山虎重量kg比为1～5:1；(2)滤渣Ⅰ喷洒5～15％复合菌发酵液2～3天，加入70～90％乙醇溶液回流提取2～4h，过滤得滤液Ⅱ，进行浓缩至原有体积的1/15～1/30，得浓缩液Ⅱ，其中加入乙醇溶液体积L与爬山虎重量kg比为0.5～4:1；(3)将浓缩液Ⅰ和浓缩液Ⅱ合并后加两倍体积的乙醚萃取60～120min，得乙醚液Ⅰ和下层液体Ⅰ；(4)将乙醚液Ⅰ浓缩至原有体积的1/5～1/15，上大孔吸附树脂柱，吸附30～60min后，用四倍至六倍柱体积的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液Ⅰ，浓缩至原有体积的1/5～1/15，室温下放置至结晶析出，过滤得粗结晶；(5)粗结晶加乙醇溶液溶解，加适量活性炭脱色，静置30～60min，过滤，浓缩至结晶析出，放冷结晶，重结晶得白藜芦醇纯品；(6)将下层液体Ⅰ浓缩至原有体积的1/15～1/25，再与乙醇溶液进行混合30～60min，过滤得滤液Ⅲ，上大孔吸附树脂柱，吸附20～50min，先用两倍至四倍柱体积的水进行洗柱，弃去水洗脱液，再用四倍至六倍柱体积的乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；(7)将洗脱液Ⅱ浓缩至原有体积的1/15～1/25，结晶，过滤，重结晶得木犀草素纯品。...

【技术特征摘要】
1.一种从爬山虎中提取木犀草素和白藜芦醇的方法，其特征在于，具体步骤包括如下：(1)将新鲜爬山虎根茎喷洒A号营养液，室温暗培养10～20天，再喷洒1～10％酵母菌液，继续培养3～5天，在40～50℃下干燥，再粉碎至80目～120目，加入乙醚回流提取80～100min，过滤得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ，滤液Ⅰ进行浓缩至原有体积的1/20～1/40，得浓缩液Ⅰ，其中加入乙醚体积L与爬山虎重量kg比为1～5:1；(2)滤渣Ⅰ喷洒5～15％复合菌发酵液2～3天，加入70～90％乙醇溶液回流提取2～4h，过滤得滤液Ⅱ，进行浓缩至原有体积的1/15～1/30，得浓缩液Ⅱ，其中加入乙醇溶液体积L与爬山虎重量kg比为0.5～4:1；(3)将浓缩液Ⅰ和浓缩液Ⅱ合并后加两倍体积的乙醚萃取60～120min，得乙醚液Ⅰ和下层液体Ⅰ；(4)将乙醚液Ⅰ浓缩至原有体积的1/5～1/15，上大孔吸附树脂柱，吸附30～60min后，用四倍至六倍柱体积的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液Ⅰ，浓缩至原有体积的1/5～1/15，室温下放置至结晶析出，过滤得粗结晶；(5)粗结晶加乙醇溶液溶解，加适量活性炭脱色，静置30～60min，过滤，浓缩至结晶析出，放冷结晶，重结晶得白藜芦醇纯品；...

【专利技术属性】
技术研发人员：董爱文，卜晓英，于华忠，唐克华，
申请(专利权)人：吉首大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43