生产环状十一氨基酸肽的方法技术

技术编号:19275587 阅读:28 留言:0更新日期:2018-10-30 17:01
本发明专利技术涉及可用于生产环状十一氨基酸肽(例如阿拉泊韦(Alisporivir),一种非免疫抑制性环孢菌素A衍生物)的方法及中间体。将环孢菌素在丁烯基‑甲基‑苏氨酸侧链处酰基化,然后对其进行开环反应(在肌氨酸和N‑甲基‑亮氨酸残基之间开环)。对该线性肽中间体进行埃德曼降解(去除N‑末端残基)以生成第二线性十肽中间体,例如,当从CsA起始时,该第二线性十肽中间体序列为Val‑N(Me)Leu‑Ala‑Ala‑N(Me)Leu‑N(Me)Leu‑N(Me)Val‑N(Me)Bmt‑Abu‑Sar。

Method for producing cyclic eleven amino acid peptide

The present invention relates to a method and an intermediate for the production of cyclic eleven amino acid peptides, such as Alisporivir, a non-immunosuppressive cyclosporine A derivative. Cyclosporin was acylated at the side chain of butenyl methyl threonine, and then ring-opening reaction (ring-opening between sarcosine and N methyl leucine residues) was performed. The linear peptide intermediate was degraded (removing N_terminal residues) by Edman to produce a second linear decapeptide intermediate. For example, when starting from CsA, the second linear decapeptide intermediate sequence was Val_N (Me) Leu_Ala_Ala_N (Me) Leu_N (Me) Leu_N (Me) Val_N (Me) Bmt_Sar.

【技术实现步骤摘要】
生产环状十一氨基酸肽的方法本申请为2013年5月8日提交的、专利技术名称为“生产环状十一氨基酸肽的方法”的PCT申请PCT/EP2013/059672的分案申请,所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2014年11月5日,申请号为201380023760.8。
本专利技术涉及可用于环孢菌素衍生物的开环以及随后用于制备环状多肽(更具体地说,是环状十一氨基酸肽例如阿拉泊韦(也称为DEB025、Debio025或Debio))的新方法、新处理步骤和新中间体。
技术介绍
本专利技术涉及制备环状多肽例如环状十一氨基酸肽(例如阿拉泊韦)的方法。如WO2006/038088所述,阿拉泊韦是一种用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染或经HCV诱发的疾病的亲环素(Cyp)抑制剂。而且,WO2009/042892描述了阿拉泊韦用于治疗多发性硬化症的方法;WO2009/098577描述了阿拉泊韦用于治疗肌肉萎缩症的方法;WO2008/084368描述了阿拉泊韦用于治疗Ullrich型先天性肌肉萎缩症的方法。WO00/01715描述了阿拉泊韦及其合成法。阿拉泊韦已被分配CAS注册号254435-95-5。J.F.Guichoux在“DenouveauxanaloguesdeCycloposrineAcommeagentanti-HIV-1”PhDthesis,FacultedesSciencesdeL’UniversitedeLausanne,2002中,于WO2006/038088中以及于WO2008/084368中描述了实验室规模的阿拉泊韦制备方法。以下表示的环状十一氨基酸肽为式(Ia)的环状多肽,其中n=2。阿拉泊韦(式I)是一种式(Ib)的环状十一氨基酸肽,其中n=2,aa1为D-MeAla,aa2为EtVal。通式:环-(AXX1-AXX2-AXX3-AXX4-AXX5-AXX6-AXX-7-AXX8-AXX9-AXX10-AXX11)应当包含来自专利申请WO2010/052559A1中在关键的Sar片段处进行分段的实施例。AXX1=MeBmt、Bmt、MeLeu、脱氧-MeBmt、甲基氨基辛酸AXX2=Abu、Ala、Thr、Val、NvaAXX3=SarAXX4=MeLeu、ValAXX5=Val、NvaAXX6=MeLeu、LeuAXX7=Ala、AbuAXX8=D-AlaAXX9=MeLeu、LeuAXX10=MeLeu、LeuAXX11=MeVal、Val、D-MeVal,以及在WO2010/052559A1中包含的所有其他组合。在最近几年,环孢菌素A(CyA)已被用作各种可用于治疗发炎性或病毒性疾病的合成环状十一氨基酸肽的原料。环状十一氨基酸肽可以由菌株选育获得,然而获得大多数非天然衍生物需要化学转换,而其依赖于例如式(Ia)或式(Ib)的环状多肽的开环以及随后的氨基酸取代。传统上,例如式(Ia)的环状多肽以一种高度选择性的方法开环,氨基酸残基通过埃德曼降解反应移除,以获得作为重要中间体的开环的环状多肽(Wenger,R.M.InPeptides1996;Ramage,R.、Epton,R.编辑;TheEuropeanPeptidesSociety,1996,第173页;Wenger,R.M.等人,TetrahedronLetters2000,41,7193.)。许多科学家及公司已经利用该可靠的选择性策略,其中纯环孢菌素A及通过柱层析色谱的纯化已经用于获得环状十一氨基酸肽。而且,产物(例如开环的环孢菌素A)的纯化涉及一些通过硅胶进行液体层析法纯化的步骤。除了中等的获得总产率,该纯化方案的主要缺点在于层析法步骤的极高成本。文献中所述的衍生自环孢菌素A或其结构类似物的这类产物的大规模纯化方法通常涉及层析纯化或至少一次吸附层析的前期纯化。该前期纯化之后可进行例如萃取、逆流萃取和/或超临界流体萃取。然而,由于需要高品质的昂贵前驱物,没有任何一种技术在所需的品质要求、在可接受的总产率以及在工业规模制造可接受的成本下获得关键性的开环的中间体方面会完全令人满意。我们发现二甲氧基碳正离子(在诺华(Novartis)专利申请EP0908461A1中描述用于头孢菌素(Cephalosporine)衍生物的甲基化)在大环多肽的开环中进行与氧鎓离子(三甲基或三乙基氧鎓米尔文(Meerwein)盐)相同的化学过程。新的反应条件可有利地在原位制备,因此可避免处理有毒及吸湿物质,可在多种溶剂(例如甲苯、二甲苯、苯甲醚)中进行,不需使用非必要的含氯溶剂(例如二氯甲烷或二氯乙烷),也避免使用来自于有遗传毒性的表氯醇的氧鎓米尔文盐。专用的碳正离子四氟硼酸盐或经由三氟化硼与原酸酯衍生物(优选原甲酸三甲酯)的原位反应生成的活性物会获得所需的开环多肽(例如以下的化合物3)。我们发现了一种在保持高度选择性的埃德曼降解反应的优势同时,能充分利用新确定的结晶型中间体的优势的改良方法。以下公开内容提出了衍生自如下各物质的开环后新分离出的结晶型中间体:和一种用于生产和通过例如结晶法来进行纯化的方法。该方法快速、实际并且能更高效地获得开环的环孢菌素A、环孢菌素B、环孢菌素D或环孢菌素G,并可用于生产环状十一氨基酸肽(例如阿拉泊韦)。而且,根据本公开内容的方法也可以应用于可经过相同顺序开环的其他环孢菌素。据发现,开环的环孢菌素盐(例如盐酸(HCl)、氟硼酸(HBF4)或六氟磷酸(HPF6))可在若干步骤内制成。本专利技术提供了新颖的结晶型中间体,例如环孢菌素酯,例如乙酸酯、特戊酸酯,及开环的环孢菌素A、环孢菌素B、环孢菌素D或环孢菌素G的盐(例如HCl盐、HBF4盐或HPF6盐),及生产它们的方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种制备式3的化合物或其盐的方法,其中R是甲基、乙基、丙基或苯基以及R’是甲基或乙基。该方法包括以下步骤:使环孢菌素A酰基化以形成乙酰基环孢菌素A;使乙酰基环孢菌素A开环;及使已开环的乙酰基环孢菌素A结晶以获得式3的化合物。本专利技术提供了一种制备式4的化合物或其盐的方法,其中R是甲基、乙基、丙基或苯基以及R’是甲基或乙基。该方法包括以下步骤:使式3的化合物进行埃德曼(Edman)降解;及接着使该化合物结晶以获得式4的化合物。本专利技术提供一种制备式4的化合物或其盐的方法,其中R是甲基、乙基、丙基或苯基以及R’是甲基或乙基。该方法包括以下步骤:使环孢菌素A酰基化以形成乙酰基环孢菌素A;使乙酰基环孢菌素A开环;及使已开环的乙酰基环孢菌素A结晶以获得式3的化合物使式3的化合物进行埃德曼降解;及接着使该化合物结晶以获得式4的化合物或其盐。本专利技术提供一种式3的化合物或其盐,其中R是甲基、乙基、丙基或苯基以及R’是甲基或乙基。本专利技术提供一种式4的化合物或其盐,其中R是甲基、乙基、丙基或苯基以及R’是甲基或乙基。【附图说明】图1为化合物3的质子NMR谱图。图2为化合物4的质子NMR谱图。【具体实施方式】以下反应图显示了基于本专利技术的用于制备环状多肽,更具体而言是环状十一氨基酸肽(例如阿拉泊韦)的一般方法;然而,该一般反应图也可用于制备环状多肽,更具体而言是衍生自环孢菌素A、B、D或G的环状十一氨基酸肽。具体而言,可用如下方法制备阿拉泊韦:通过环孢菌素A(化本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种制备式3化合物或其盐的方法,

【技术特征摘要】
2012.05.09 US 61/644,6161.一种制备式3化合物或其盐的方法,其中R是甲基、乙基、丙基或苯基,R’是甲基或乙基,且R2为乙基;该方法包括以下步骤:使环孢菌素A酰基化以形成乙酰基环孢菌素A;用四氟硼酸二甲氧基碳使乙酰基环孢菌素A开环;及使已开环的乙酰基环孢菌素A结晶以获得式3化合物。2.制备式4的化合物或其盐的方法,其中R为甲基、乙基、丙基或苯基,R’为甲基或乙基,且R2为乙基;该方法包括以下步骤:使由权利要求1所述方法制得的式3化合物进行埃德曼降解;及接着使该化合物结晶以获得式4化合物。3.一种制备式4的化合物或其盐的方法,其中R为甲基、乙基、丙基或苯基,R’为甲基或乙基,且R2为乙基;该方法包括以下步骤:i)使环孢菌素A酰基化以形成乙酰基环孢菌素A;ii)用四氟硼酸二甲氧基碳使乙酰基环孢菌素A开环;及iii)使已开环的乙酰基环孢菌素A结晶以获得式3化合物或其盐iv)使式3化合物进行埃德曼降解;及接着v)使该化合物结晶以获得式4化合物或其盐。4.由权利要求1所述方法制得的式3化合物或其盐,其中R为甲基、乙基、丙基或苯基,R’为甲基或乙基且R2为乙基。5.由权利要求2或3所述方法制得的式4化合物或其盐,其中R为甲基、乙基、丙基或苯基,R’为甲基或乙基且R2为乙基。6.权利要求1或3所述的方法,其中起始物质的纯度以重量计是>80%的环孢菌素A。7.权利要求6所述的方法,其中该起始物质的纯度以重量计是>85%的环孢菌素A。8.权利要求1或3所述的方法,其中起始物质的纯度以重量百分比分析计是60-80%的环孢菌素A。9.一种由环孢菌素A、环孢菌素B、环孢菌素D或环孢菌素G制备式3化合物或其盐的方法,其中R为甲基...

【专利技术属性】
技术研发人员:F·高鲁B·李斯
申请(专利权)人:诺华股份有限公司
类型:发明
国别省市:瑞士,CH

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