狭山野豌豆中多糖的制备方法技术

本发明专利技术涉及狭山野豌豆中多糖的制备方法。采用的技术方案是：取狭山野豌豆，以水为溶剂，料液比为1g:25mL，按狭山野豌豆的重量，加入5.0％的纤维素酶和2.5％的木瓜蛋白酶，调节pH值为6.0～6.5，提取温度为50℃，提取3次，每次提取时间为60min，得提取液。本发明专利技术，具有提取条件温和，提取时间短，提取效率高，便于分离纯化，安全无污染的优点，适于狭山野豌豆多糖的制备。

Preparation of Polysaccharides from Vicia Vicia

The invention relates to a method for preparing polysaccharides from Vicia Vicia. The technological scheme adopted was as follows: taking wild pea in narrow mountain with water as solvent, the ratio of material to liquid was 1 g:25 mL, adding 5.0% cellulase and 2.5% papain according to the weight of wild pea in narrow mountain, adjusting pH value to 6.0-6.5, extracting temperature to 50 C, extracting three times, and extracting time to 60 minutes each time. The invention has the advantages of mild extraction conditions, short extraction time, high extraction efficiency, easy separation and purification, safety and pollution-free, and is suitable for the preparation of wild pea polysaccharide.

【技术实现步骤摘要】
狭山野豌豆中多糖的制备方法
本专利技术属于中药提取领域，具体地涉及一种狭山野豌豆中药中多糖的制备方法。
技术介绍
狭山野豌豆(V.amoenaFisch.var.angustaFreyn.)为豆科(Leguminosae)野豌豆属(ViciaL.)植物，主要分布在我国东北、华北、西北等地，其地上部分作为中药透骨草入药。2015年版《中国药典》一部中收载的中成药“坎离砂”、“养血荣筋丸”、“疏痛安涂膜剂”处方中均有透骨草，且四部附录(成方制剂中本版药典未收载的药材和饮片)中收录了狭山野豌豆V.amoenaFisch.var.angustaFreyn.作为透骨草使用。狭山野豌豆“味甘、性平”，“能补、能和、能缓”，属于补肝肾型祛风湿药，其祛风湿作用是通过调节免疫，进而补益肝肾，达到祛风湿的目的。狭山野豌豆中多糖成分是其免疫调节的活性部位之一，多糖通过调节免疫，发挥补益肝肾、祛风湿的功效。现有技术中，多糖的提取方法主要有水提法、酸碱提取法、酶提取法、超声波提取法和微波提取法，存在的问题是提取率低。所以，优化狭山野豌豆中多糖成分的提取和分离工艺，可以为狭山野豌豆这一东北丰富植物资源的开发与利用提供科学依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立狭山野豌豆多糖的制备方法。本专利技术采用的技术方案是：狭山野豌豆中多糖的制备方法，包括如下步骤：取狭山野豌豆，以水为溶剂，加入酶，提取温度为50-100℃，提取1-3次，每次提取时间为30-90min，得提取液。进一步的，上述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，狭山野豌豆与水的料液比为1g:20-30mL。进一步的，上述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，所述的酶的加入量为狭山野豌豆重量的1-10％。进一步的，上述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，所述的酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶酶和木聚糖酶的一种二种以上的混合。进一步的，上述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，所述的酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶的组合。进一步的，上述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，所述的纤维素酶的加入量为狭山野豌豆重量的4-6％，木瓜蛋白酶的加入量为狭山野豌豆重量的1-3％。进一步的，上述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，取狭山野豌豆，以水为溶剂，料液比为1g:25mL，按狭山野豌豆的重量，加入5.0％的纤维素酶和2.5％的木瓜蛋白酶，调节pH值为6.0～6.5，提取温度为50℃，提取3次，每次提取时间为60min，得提取液。上述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，包括纯化步骤：将提取液旋转蒸发得浓缩液，向其中加入无水乙醇，使体系中乙醇的体积百分浓度为90％，搅拌均匀，静置12-36h，3000r/min离心，收集沉淀。更进一步的，静置24h。本专利技术的有益效果是：本专利技术的复合酶提取法提取狭山野豌豆多糖相比于其他方法，具有提取条件温和，提取时间短，提取效率高，便于分离纯化，安全无污染的优点，且酶具有高度的专一性和选择性，在实际应用过程中较少的加入量即可达到要求，适于狭山野豌豆多糖的制备。附图说明图1是水提法各因素水平效应曲面图。具体实施方式实施例1(一)水提法正交设计试验取狭山野豌豆干燥地上部分5g，共9份，以提取次数、提取时间、料液比三个因素进行正交设计试验，测定多糖含量，计算多糖提取率，对结果进行方差分析，确定最优提取条件。因素水平表见表1，L9(34)正交设计试验方案及结果分析见表2、表3、图1。表1正交试验设计因素水平表表2正交设计试验结果表3方差分析表影响水提法提取狭山野豌豆多糖的提取因素：提取次数(A)、提取时间(B)、料液比(C)中，提取次数(A)为显著影响因素。各因素各水平的趋势为：A3>A2>A1；B3>B2>B1；C3>C2>C1。通过以上结果及节约时间和能源等因素的角度综合考虑，将提取条件定为A3B2C2，即狭山野豌豆多糖最佳提取工艺条件为：提取次数：3次；提取时间：60min；料液比，1g:25mL。(二)酶提取法对多糖提取率的影响(1)果胶酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶对多糖的影响为避免多糖含量测定结果出现假阳性现象，考察提取酶与多糖共存时，对多糖是否存在水解效应，本实验在多糖提取液中加入提取酶，并在提取酶各自最适条件下进行试验，测定多糖的含量变化。方法如下：取狭山野豌豆干燥地上部分5g，按1g:25mL的料液比加入蒸馏水，100℃水浴回流提取3次，每次60min，收集提取液，浓缩，转移至100mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，得待测样品。编号1：取25mL待测样品，向其中加入无水乙醇，使体系中的乙醇浓度达到90％，搅拌均匀，静置24h，离心(3000r/min)，沉淀部分挥干乙醇，加蒸馏水溶解，转移至50mL量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，测定多糖含量。编号2：取25mL待测样品，加入狭山野豌豆干燥地上部分重量0.02％的果胶酶，调节pH值至4.0，50℃水浴加热60min，冷却至室温，向其中加入无水乙醇，使体系中的乙醇浓度达到90％，搅拌均匀，静置24h，离心(3000r/min)，沉淀部分挥干乙醇，加蒸馏水溶解，转移至50mL量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，测定多糖含量。编号3：取25mL待测样品，加入狭山野豌豆干燥地上部分重量3.0％的木瓜蛋白酶，调节pH值至6.5，50℃水浴加热60min，冷却至室温，向其中加入无水乙醇，使体系中的乙醇浓度达到90％，搅拌均匀，静置24h，离心(3000r/min)，沉淀部分挥干乙醇，加蒸馏水溶解，转移至50mL量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，测定多糖含量。编号4：取25mL待测样品，加入狭山野豌豆干燥地上部分重量5.0％的纤维素酶，调节pH值至5.0，50℃水浴加热60min，冷却至室温，向其中加入无水乙醇，使体系中的乙醇浓度达到90％，搅拌均匀，静置24h，离心(3000r/min)，沉淀部分挥干乙醇，加蒸馏水溶解，转移至50mL量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，测定多糖含量。编号5：取25mL待测样品，加入狭山野豌豆干燥地上部分重量5.0％的木聚糖酶，调节pH值至5.0，50℃水浴加热60min，冷却至室温，向其中加入无水乙醇，使体系中的乙醇浓度达到90％，搅拌均匀，静置24h，离心(3000r/min)，沉淀部分挥干乙醇，加蒸馏水溶解，转移至50mL量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，测定多糖含量。结果如表4。表4果胶酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶对多糖的影响试验结果由表4可见，果胶酶在一定程度上对多糖有水解作用，而木瓜蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶对狭山野豌豆多糖几乎无水解作用。因此，选择木瓜蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶进一步考察提取酶用量等条件对多糖提取率的影响。(2)酶提取条件单因素试验取狭山野豌豆干燥地上部分5g，共5份，在pH值为6.5的条件下，以1g:25mL的料液比加入蒸馏水，按狭山野豌豆干燥地上部分的重量，分别加入1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％的木瓜蛋白酶，50℃水浴加热60min，提取3次，计算多糖提取率。取狭山野豌豆干燥地上部分5g，共5份，在pH值为5.0的条件下，以1g:25mL的料液比加入蒸馏水，按狭山野豌豆干燥地上部分的重量，分别加入3.0％、3.5％、4.0％、4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.狭山野豌豆中多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取狭山野豌豆，以水为溶剂，加入酶，提取温度为50‑100℃，提取1‑3次，每次提取时间为30‑90min，得提取液。

【技术特征摘要】
1.狭山野豌豆中多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取狭山野豌豆，以水为溶剂，加入酶，提取温度为50-100℃，提取1-3次，每次提取时间为30-90min，得提取液。2.根据权利要求1所述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，其特征在于，狭山野豌豆与水的料液比为1g:20-30mL。3.根据权利要求1所述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，其特征在于，所述的酶的加入量为狭山野豌豆重量的1-10％。4.根据权利要求1所述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，其特征在于，所述的酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶酶和木聚糖酶的一种二种以上的混合。5.根据权利要求4所述的狭山野豌豆中多糖的制备方法，其特征在于，所述的酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶的组合。6.根据权利要求5所述的狭山野豌豆中多糖的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：桑育黎，郝健行，郝延军，李文杰，王宇，焦美玲，白丽，刘玉峰，徐亮，刘举，刘洋，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21