一种黄酮-皂苷混源萜类化合物及其制备方法技术

技术编号:19256424 阅读:35 留言:0更新日期:2018-10-26 22:32
本发明专利技术公开了风轮菜中的两种新成分及其提取分离方法。该发明专利技术具体公开了从风轮菜干燥地上部分提取,萃取,柱层析分离以及HPLC纯化得到两种结构新颖的黄酮皂苷混源萜类化合物的制备方法,并利用现代波谱技术鉴定分离得到的两个化合物,确定这两个化合物的化学结构,分别命名为clinoposides G和clinoposides H。该两个化合物结构特征为结构新颖的黄酮皂苷混源萜类化合物。

A flavonoid saponin mixed source terpenoid and its preparation method

The invention discloses two new ingredients in the wind vegetables and their extraction and separation methods. The invention discloses in detail the preparation methods of two novel flavonoid saponin mixed terpenoids extracted from the dry aerial parts of Brassica campestris, extracted, separated by column chromatography and purified by HPLC, and identifies and separates the two compounds by modern spectroscopic techniques, determines the chemical structures of the two compounds, respectively. It is called clinoposides G and clinoposides H. The two compounds are characterized by a novel flavonoid glycoside terpenoid compound.

【技术实现步骤摘要】
一种黄酮-皂苷混源萜类化合物及其制备方法
本专利技术涉及对植物中提取分离纯化从而得到具有生物活性的化合物。具体是对唇形科植物风轮菜Clinopodiumchinense(Benth.)O.Kuntze的地上部分提取分离纯化得到的2个新化合物。
技术介绍
心血管疾病已成为全世界第一位致死致残原因,心血管疾病具有发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高、并发症多的特点。发病形式多样,给人类社会带来了极大的痛苦和死亡威胁。近年来,国内外许多专家学者都在致力于发现预防和治疗心血管疾病的有效方法,而寻找高效低毒的防治心血管疾病的天然药物是科学工作者研究的热点课题之一。风轮菜(Clinopodiumchinense(Benth.)O.Kuntze)为唇形科风轮菜属植物,味微苦涩,性凉,归肝经,具有收敛止血的功效,常用于治疗各种出血症。现代研究表明,风轮菜主要含有黄酮、三萜皂苷、萜类、挥发油、甾体等,风轮菜提取物既有治疗糖尿病、冠心病以及心肌缺氧保护等作用。本课题组一直致力于从天然产物中寻找具有良好疗效的治疗和/或预防心血管疾病的药物。我们前期研究发现,风轮菜具有止血和活血的双向调节作用,在止血的同时又可以祛除已瘀之血,从而达到止血而不留淤的效果,治疗和/或预防心血管疾病方面具有独特的优势,有着良好的研究开发前景。由于风轮菜中含有众多化合物,其所含有的活性化合物的结构还不明确,目前还不知道是哪一种物质为活性物质,是其难以进行进一步的应用,因此,确定风轮菜中具体活性物质的结构和药理活性具有重要的意义。
技术实现思路
为解决上述问题,本专利技术人进行了大量研究,从风轮菜正丁醇部位中得到2个黄酮皂苷混源萜类成分,均为新化合物。这2个新型混源萜类化合物分别命名为clinoposidesG和clinoposidesH。本专利技术的另一个目的是提供clinoposidesG和clinoposidesH在心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用。一种黄酮-皂苷混源萜类化合物,名称为clinoposidesG(1)或clinoposidesH(2),结构如下式所示:本专利技术还提供了一种所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物的制备方法,包括以下步骤:(1)将风轮菜地上部分粉碎后,用乙醇回流提取,减压回收乙醇,得到浸膏;(2)用水溶解此浸膏后,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取,对正丁醇提取液减压回收溶剂,得到正丁醇萃取物;(3)将正丁醇萃取物以D101大孔吸附树脂处理,依次以水-乙醇洗脱剂进行梯度洗脱,合并50-85%乙醇洗脱物,得到总皂苷;(4)将总皂苷部位经硅胶柱层析以氯仿:甲醇进行梯度洗脱,用薄层色谱进行检识合并相似组分得到FZ(A-H)8个部分,FZ-G经C18反相柱层析,以甲醇:水梯度洗脱,得到23个流分,经薄层示踪并合并相同组分,得到FZ-G(Fr.1-9)9个部分;(5)将FZ-G(Fr.6)进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析,以甲醇为洗脱剂进行洗脱,得到4个流分FZ-G(Fr.6.1-6.4),将其中的FZ-G(Fr.6.4)经过制备液相分离纯化得到化合物2clinoposidesH,保留时间为29min;(6)将FZ-G(Fr.8)进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析,以甲醇为洗脱剂进行洗脱,得到5个流分FZ-G(Fr.8.1-8.5),将其中的FZ-G(Fr.8.5)经过制备液相分离纯化得到化合物1clinoposidesG,保留时间为38min。作为优选,具体步骤如下:(1)风轮菜地上部分15kg粉碎后,以100L70%乙醇回流提取2次,每次两小时,减压回收乙醇,得到浸膏约3kg;(2)用水溶解此浸膏后,依次用石油醚萃取三次,每次2L,减压回收溶剂,得石油醚萃取物(FS,120g);用乙酸乙酯萃取三次,每次6L,减压回收溶剂,得乙酸乙酯萃取物(FY,760g),用正丁醇萃取三次,每次6L,减压回收溶剂,得正丁醇萃取物(FZ,350g);(3)正丁醇萃取物以D101大孔吸附树脂处理,依次以水、20%乙醇、85%乙醇、95%乙醇洗脱,减压回收溶剂,合并50-85%乙醇洗脱物,得到总皂苷180g;(4)将总皂苷部位(180g)经硅胶柱层析以氯仿:甲醇(100:0~0:100)进行梯度洗脱,用薄层色谱进行检识合并相似组分得到FZ(A-H)8个部分;FZ-G(30g)经C18反相柱层析,以甲醇:水(30:70→90:10,v/v)梯度洗脱,得到23个流分,经薄层示踪并合并相同组分,得到FZ-G(Fr.1-9)9个部分;(5)将FZ-G(Fr.6,250mg)进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析,以甲醇为洗脱剂进行洗脱,得到4个流分FZ-G(Fr.6.1-6.4),FZ-G(Fr.6.4,30mg)经过制备液相分离纯化(流动相条件:甲醇-水72:28)得到化合物2(4.3mg),保留时间为29min;(6)将FZ-G(Fr.8,320mg)进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析,以甲醇为洗脱剂进行洗脱,得到5个流分FZ-G(Fr.8.1-8.5),FZ-G(Fr.8.5,80mg)经过制备液相分离纯化(流动相条件:甲醇-水67:33)得到化合物1(8.2mg),保留时间为38min。本专利技术提供的clinoposidesG和clinoposidesH在心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用是通过以下方案获得的:先进行心肌细胞缺氧复氧损伤模型的建立,通过MTT法检测细胞的存活率,2,4二硝基苯肼显色法检测LDH水平,双染荧光法检测细胞凋亡,试剂盒检测IFN-γ,MCP-1,TNF-α,IL-6的水平变化以及SOD,CAT的活性,结果表明clinoposidesG和clinoposidesH对心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,可以显著提高细胞存活率,降低LDH释放,提高线粒体膜电位,减少细胞凋亡,降低炎性因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、MCP-1活性。Westernblot分析发现其可以提高Nrf2核转位,降低NF-кB的核转位。以上结果提示黄酮皂苷混源萜类化合物可能通过双重调节NF-κB和Nrf2而显示出显著的心肌保护活性。附图说明图1风轮菜中2个黄酮皂苷混源萜类化合物的化学结构;图2化合物1的HR-ESI-MS谱;图3化合物1的1HNMR谱;图4化合物1的13CNMR谱;图5化合物1的HSQC谱;图6化合物1的HSQC-TOCSY谱;图7化合物1的HMBC的谱;图8化合物1的COSY的谱;图9化合物1的TOCSY谱;图10化合物1的NOESY谱;图11化合物1的UV谱;图12化合物1的ECD谱;图13化合物1的IR谱;图14化合物2的HR-ESI-MS谱;图15化合物2的1HNMR谱;图16化合物2的13CNMR谱;图17化合物2的HSQC谱;图18化合物2的HSQC-TOCSY谱;图19化合物2的HMBC的谱;图20化合物2的COSY的谱;图21化合物2的TOCSY谱;图22化合物2的NOESY谱;图23化合物2的UV谱;图24化合物2的ECD谱;图25化合物2的IR谱;图26MTT法测定细胞存活率和LDH释放量数据处理图;图26中,*P<0.05**P&lt本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄酮‑皂苷混源萜类化合物,其特征在于,名称为clinoposides G(1)或clinoposides H(2),结构如下式所示:

【技术特征摘要】
1.一种黄酮-皂苷混源萜类化合物,其特征在于,名称为clinoposidesG(1)或clinoposidesH(2),结构如下式所示:2.一种如权利要求1所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将风轮菜地上部分粉碎后,用乙醇回流提取,减压回收乙醇,得到浸膏;(2)用水溶解此浸膏后,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取,对正丁醇提取液减压回收溶剂,得到正丁醇萃取物;(3)将正丁醇萃取物以D101大孔吸附树脂处理,依次以水-乙醇洗脱剂进行梯度洗脱,合并50-85%乙醇洗脱物,得到总皂苷;(4)将总皂苷部位经硅胶柱层析以氯仿:甲醇进行梯度洗脱,用薄层色谱进行检识合并相似组分得到FZ(A-H)8个部分,FZ-G经C18反相柱层析,以甲醇:水梯度洗脱,得到23个流分,经薄层示踪并合并相同组分,得到FZ-G(Fr.1-9)9个部分;(5)将FZ-G(Fr.6)进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析,以甲醇为洗脱剂进行洗脱,得到4个流分FZ-G(Fr.6.1-6.4),将其中的FZ-G(Fr.6.4)经过制备液相分离纯化得到化合物2clinoposidesH,保留时间为29min;(6)将FZ-G(Fr.8)进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析,以甲醇为洗脱剂进行洗脱,得到5个流分FZ-G(Fr.8.1-8.5),将其中的FZ-G(Fr.8.5)经过制备液相分离纯化得到化合物1clinoposidesG,保留时间为38min。3.根据权利要求2所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所用的乙醇的体积百分比浓度为60%~80%。4.根据权利要求2所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物的制备方法,...

【专利技术属性】
技术研发人员:朱寅荻许旭东余世春王朝杰
申请(专利权)人:温州医科大学
类型:发明
国别省市:浙江,33

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