本方案公开了化学领域分离提取技术中从老鹰茶中提取分离一种木脂素类成分的方法和该类化合物的应用。本发明专利技术的特点是采用传统提取方法结合现代色谱分离技术从老鹰茶中分离纯化木脂素类化合物：包括回流提取，溶剂萃取，柱色谱分离，半制备高效液相色谱分离。本发明专利技术提供的分离制备方法成功从老鹰茶中分离制备得到一种木脂素类成分，活性测试显示该木脂素类成分可用于制备抗癌药物。
Lignans and their extraction and separation methods from eagle tea
The scheme discloses a method for extracting and separating a lignan component from Eagle Tea in the chemical field and the application of such compounds. The invention is characterized in that lignans are separated and purified from Old Eagle Tea by traditional extraction method and modern chromatographic separation technology, including reflux extraction, solvent extraction, column chromatographic separation and semi-preparative high performance liquid chromatography separation. The separation and preparation method provided by the invention successfully isolates and prepares a lignan component from Eagle Tea, and the activity test shows that the lignan component can be used for preparing anticancer drugs.
【技术实现步骤摘要】
一种木脂素类化合物及其从老鹰茶中提取分离的方法与应用
本专利技术涉及化学领域分离提取技术，具体涉及一种木脂素类化合物及其从老鹰茶中提取分离的方法与应用。
技术介绍
老鹰茶原产大娄山，现仍处于野生和半野生状态，是我国南方各民族民间长期饮用的一种植物代用茶，尤以四川、重庆及贵州遵义地区少数民族饮用历史悠久。研究表明老鹰茶具有抗氧化、降糖、降脂、抗炎、抗菌、抗病毒等功效，有较大的开发和应用前景，符合国家倡导的大健康研究主题。现有的技术中，提取分离毛豹皮樟(LitseacoreanaLévl.var.lanuginosa(Migo)YangetP.H.Huang)来源的老鹰茶中化合物都是以黄酮类化合物居多，未曾有木脂素类活性成分报道。
技术实现思路
本专利技术意在提供一种木脂素类化合物及其从老鹰茶中提取分离的方法与应用，以填补老鹰茶中未曾有木脂素类活性成分研究的空白。本方案中的一种木脂素类化合物，所述木脂素类化合物的化学结构通式为：本专利技术还提供了从老鹰茶中提取分离上述木脂素类化合物的方法，包括以下：1)取老鹰茶地上部分，经干燥、粉碎后，用浓度70％～95％的甲醇回流提取1～4次，每次提取2～5h，合并每次提取后过滤得到的提取液，提取液通过MCI凝胶柱色谱去除叶绿素后再减压浓缩得到甲醇浸膏；2)将1)中所得甲醇浸膏分散于水后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取1～4次，每个萃取部分减压浓缩得到各部位浸膏；3)将2)中乙酸乙酯部位浸膏通过硅胶柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯以10:1～1:10体积比进行梯度洗脱，经TLC检测分析，分为7～8个组分；4)将3)中的第5～7组分通过Sephadex-LH20柱色谱分离，用体积分数70％～100％的甲醇等度洗脱，分为6～7个亚组分；5)将4)中得到的的第5～6亚组分通过制备HPLC分离，检测波长210nm～280nm，流速2.0mL/min～6.5mL/min，用浓度60％～100％的甲醇等度洗脱，得到木脂素类化合物。进一步，所述3)中用石油醚-乙酸乙酯以体积比10:1、5:1、2:1、1:2、1:10进行梯度洗脱，TLC检测分为7个组分。在本方案的基础下，可以更快、更充分的获取到目标组分。进一步，所述4)中，分为6个亚组分。在本方案的基础下，可以更快、更充分的获取到目标组分。进一步，5)中的洗脱剂甲醇可采用浓度为70％～85％的乙腈代替。本专利技术首次从老鹰茶中提取木脂素类成分，首先通过常规硅胶柱色谱分离，用TLC方法结合紫外迅速找到木脂素部位，再通过不损失样品的Sephadex-LH20凝胶柱色谱去除杂质成分，富集该木脂素部位，最后利用制备HPLC色谱分离得到单体，整个过程只使用一次硅胶柱色谱，减少样品损失，分离方法可控性和重现性好，成本较低，操作也较简单。进一步，所述木脂素类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。附图说明图1为本专利技术木脂素类化合物的结构图；图2为本专利技术木脂素类化合物的1H-NMR图；图3为本专利技术木脂素类化合物的13C-NMR图；图4为本专利技术木脂素类化合物的HSQC图；图5为本专利技术木脂素类化合物的HMBC图；图6为本专利技术木脂素类化合物的NOESY图。具体实施方式下面通过具体实施方式进一步详细的说明：本专利技术的木脂素类化合物的化学结构通式为：实施例1：从老鹰茶中提取分离上述木脂素类化合物的方法，包括以下：1)取毛豹皮樟来源的老鹰茶树叶15kg，经干燥、粉碎后，用浓度90％甲醇回流提取3次，每次提取2～5h，提取液合并后通过MCI柱色谱去除叶绿素，然后将去除了叶绿素的提取液进行减压浓缩得到甲醇浸膏843g；2)将1)中甲醇浸膏分散于水后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，每个萃取部分减压浓缩得到各部位浸膏；3)将2)中乙酸乙酯部位浸膏通过硅胶柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯以体积比10:1、10:1、5:1、2:1、1:2、1:10梯度洗脱，结合TLC检测方法，分为7个组分，Fr.1～Fr.7，以下每个组分都结合TLC分析；4)将3)中第5个组分Fr.5通过Sephadex-LH20柱色谱分离，用100％甲醇等度洗脱，分为6个亚组分Fr.5.1～Fr.5.6；5)4)中第4个亚组分Fr.5.4通过制备HPLC分离，用浓度60％甲醇，色谱柱用C18，10μm，10mm×250mm，流速5.0mL/min洗脱,收集9～11min之间色谱峰，检测波长230nm，得到该木脂素成分。实施例2上述1)中回流提取用的含水甲醇浓度95％，回流提取3次；2)中萃取3次；5)中用浓度65％的乙腈，检测波长254nm，其余步骤同实施例1，也可以取得本专利技术所述的有益效果。本专利技术进行TLC检识的条件：展开剂为石油醚-乙酸乙酯系统及二氯甲烷-甲醇系统，显色剂a：紫外灯(254nm)下观察荧光；显色剂b：5％硫酸乙醇喷洒，105℃烘烤至显色；显色剂c：碘缸显色。结构鉴定：利用的光谱技术，主要包括核磁共振谱(1H-NMR、13C-NMR、NOESY、HSQC、HMBC)和质谱分析(HR-ESI-MS)鉴定化合物的结构。该化合物为黄色油状物，HR-ESI-MS[M–H]–m/z373.1287(计算值373.1293)，结合NMR谱确定化合物的分子式为C20H22O7,通过2维核磁技术，确定该化合物为本专利技术的木脂素类化合物。其核磁数据见表1。表1化合物的核磁数据(400/100MHz，CDCl3)实施例3测定该木脂素成分对人肝癌细胞HepG2的抑制作用。采用常规MTT法，选取对数生长期的上述细胞，用含10％胎牛血清培养液调节细胞浓度为10×105个/mL，以每孔100μL，接种到96孔平底细胞培养板，置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h后加入样品样品的浓度分别为0、10、20、40、80、160μg/mL，设3个复孔。在37℃、5％CO2培养箱中继续培养48h后弃去带样品的培养液，再补充100μL培养液。然后每孔加入20μLMTT溶液(5mg/mL)继续培养4h，离心后弃去上清液，用PBS冲洗2～3次后，再加入含MTT的培养液。终止培养，吸去孔内的培养液。最后，每孔加入100μLDMSO，低速振荡15min使结晶物充分溶解，将细胞培养板置于酶标仪上，测定490nm波长处的吸光值(A)，即OD值，计算生长抑制率。记录实验结果，处理数据。顺铂为阳性对照。生长抑制率＝(1-实验组平均A/对照组平均A值)×100％以样品浓度为横坐标，抑制率为纵坐标绘制抑制率曲线图，求出抑制率为50％时样品的浓度。二聚体石斛素A对人肝癌细胞HepG2的IC50为33.24±0.41μM。尽管已经示出和描述了本专利技术的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本专利技术的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本专利技术的范围由所附权利要求及其等同物限定。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种木脂素类化合物，其特征在于，所述木脂素类化合物的化学结构通式为：
【技术特征摘要】
1.一种木脂素类化合物，其特征在于，所述木脂素类化合物的化学结构通式为：2.从老鹰茶中提取分离如权利要求1所述木脂素类化合物的方法，其特征在于，包括以下：1)取老鹰茶地上部分，经干燥、粉碎后，用浓度70％～95％的甲醇回流提取1～4次，每次提取2～5h，合并每次提取后过滤得到的提取液，提取液通过MCI凝胶柱色谱去除叶绿素后再减压浓缩得到甲醇浸膏；2)将1)中所得甲醇浸膏分散于水后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取1～4次，每个萃取部分减压浓缩得到各部位浸膏；3)将2)中乙酸乙酯部位浸膏通过硅胶柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯以10:1～1:10体积比进行梯度洗脱，经TLC检测分析，分为7～8个组分；4)将3)中的第5～7组分通过Sephadex-LH20柱色谱分离，用浓度70％～100％的甲醇等度洗脱，分为6～7个亚组分；5)将4)中得到的的第5...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖世基，成蕾，张茂生，何芋歧，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52
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