【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于免疫肿瘤学的组合物和方法相关申请本申请要求2015年12月4日提交的美国临时专利申请号62/263169、2016年4月1日提交的美国临时专利号62/316784和2016年9月14日提交的美国临时专利号62/394290的优先权。这些申请的完整内容通过引用方式并入本文。背景CRISPR(成簇规律间隔的短回文重复序列)在细菌中演化为防御对病毒攻击的适应性免疫系统。暴露于病毒时，病毒DNA短片段整合入细菌基因组的CRISPR基因座。RNA从包含病毒序列的CRISPR基因座的部分转录。含有与病毒基因组互补序列的这种RNA介导将Cas9蛋白导引至病毒基因组中的序列。Cas9蛋白切割病毒靶并因而使其沉默。最近，已经修改CRISPR/Cas系统用于真核细胞中的基因组编辑。位点特异性单链断口(SSB)或双链断口(DSB)的引入允许例如通过非同源末端接合(NHEJ)或同源性指导的修复(HDR)而改变靶序列。专利技术简述本文所述的专利技术涉及用于免疫肿瘤学的组合物和方法，例如，在其基因组中特定靶序列处受修饰的细胞，包括如通过引入包含导引所述靶序列的gRNA分子的CRISPR系统来修饰，和其产生方法及其用途。例如，本公开涉及可用于细胞(例如，T细胞，例如，进一步经工程化以表达嵌合抗原受体的T细胞)基因组编辑和可用于治疗疾病(如癌症)的gRNA分子、CRISPR系统、细胞和方法。在第一方面，本专利技术提供包含tracr和crRNA的gRNA分子，其中crRNA包含导引结构域，所述导引结构域与选自B2M、CD247、CD3D、CD3E、CD3G、TRAC、TRBC1、TRBC...
【技术保护点】
1.包含tracr和crRNA的gRNA分子，其中crRNA包含导引结构域，所述导引结构域与选自B2M、CD247、CD3D、CD3E、CD3G、TRAC、TRBC1、TRBC2、HLA‑A、HLA‑B、HLA‑C、DCK、CD52、FKBP1A、CIITA、NLRC5、RFXANK、RFX5、RFXAP或NR3C1的同种异体T细胞靶的靶序列互补。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.04 US 62/263,169;2016.04.01 US 62/316,784;1.包含tracr和crRNA的gRNA分子，其中crRNA包含导引结构域，所述导引结构域与选自B2M、CD247、CD3D、CD3E、CD3G、TRAC、TRBC1、TRBC2、HLA-A、HLA-B、HLA-C、DCK、CD52、FKBP1A、CIITA、NLRC5、RFXANK、RFX5、RFXAP或NR3C1的同种异体T细胞靶的靶序列互补。2.根据权利要求1所述的gRNA分子，其中：(a)同种异体T细胞靶是B2M，并且导引结构域包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:83或者SEQIDNO:5492至SEQIDNO:5527中的任一者；(b)同种异体T细胞靶是TRAC，并且导引结构域包含SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或者SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965中的任一者；(c)同种异体T细胞靶是TRBC1，并且导引结构域包含SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或者SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097中的任一者；(d)同种异体T细胞靶是TRBC2，并且导引结构域包含SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或者SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226中的任一者；(e)同种异体T细胞靶是CD247，并且导引结构域包含SEQIDNO:84至SEQIDNO:392中的任一者；(f)同种异体T细胞靶是CD3D，并且导引结构域包含SEQIDNO:393至SEQIDNO:532或者SEQIDNO:10780至SEQIDNO:10794中的任一者；(g)同种异体T细胞靶是CD3E，并且导引结构域包含SEQIDNO:533至SEQIDNO:839或者SEQIDNO:10677至SEQIDNO:10764中的任一者；(h)同种异体T细胞靶是CD3G，并且导引结构域包含SEQIDNO:840至SEQIDNO:968或者SEQIDNO:10765至SEQIDNO:10779中的任一者；(i)同种异体T细胞靶是HLA-A，并且导引结构域包含SEQIDNO:969至SEQIDNO:1345中的任一者；(j)同种异体T细胞靶是HLA-B，并且导引结构域包含SEQIDNO:1346至SEQIDNO:1698中的任一者；(k)同种异体T细胞靶是HLA-C，并且导引结构域包含SEQIDNO:1699至SEQIDNO:2068中的任一者；(l)同种异体T细胞靶是DCK，并且导引结构域包含SEQIDNO:5278至SEQIDNO:5491中的任一者；(m)同种异体T细胞靶是CD52，并且导引结构域包含SEQIDNO:6227至SEQIDNO:6324中的任一者；(n)同种异体T细胞靶是FKBP1A，并且导引结构域包含SEQIDNO:6325至SEQIDNO:6583或者SEQIDNO:6662至SEQIDNO:6749中的任一者；(o)同种异体T细胞靶是NR3C1，并且导引结构域包含SEQIDNO:2069至SEQIDNO:2941中的任一者；(p)同种异体T细胞靶是CIITA，并且导引结构域包含SEQIDNO:6750至SEQIDNO:7716或者SEQIDNO:7717至SEQIDNO:7804中的任一者；或(q)同种异体T细胞靶是NLRC5，并且导引结构域包含SEQIDNO:8622至SEQIDNO:10089中的任一者。3.根据权利要求1-2中任一项所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是TRAC，并且导引结构域包含SEQIDNO:5569、SEQIDNO:5585、SEQIDNO:5587、SEQIDNO:5592、SEQIDNO:5601、SEQIDNO:5589、SEQIDNO:5600、SEQIDNO:5594、SEQIDNO:5571、SEQIDNO:5593、SEQIDNO:5574、SEQIDNO:5598、SEQIDNO:5586、SEQIDNO:5599、SEQIDNO:5591、SEQIDNO:5610、SEQIDNO:5608、SEQIDNO:5617、SEQIDNO:5619或SEQIDNO:5620。4.根据权利要求3所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是TRAC，并且导引结构域包含SEQIDNO:5569、SEQIDNO:5586、SEQIDNO:5587、SEQIDNO:5592、SEQIDNO:5599或SEQIDNO:5600。5.根据权利要求1-2中任一项所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是TRBC2，并且导引结构域包含SEQIDNO:5719、SEQIDNO:5694、SEQIDNO:5706、SEQIDNO:5696、SEQIDNO:5711、SEQIDNO:5708、SEQIDNO:5709、SEQIDNO:5712、SEQIDNO:5703、SEQIDNO:5707、SEQIDNO:5687、SEQIDNO:5705、SEQIDNO:5713、SEQIDNO:5715或SEQIDNO:5710。6.根据权利要求1-2中任一项所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是B2M，并且导引结构域包含SEQIDNO:5519、SEQIDNO:5497、SEQIDNO:5499、SEQIDNO:5498、SEQIDNO:5503、SEQIDNO:5496、SEQIDNO:5507、SEQIDNO:5515、SEQIDNO:5493、SEQIDNO:5506、SEQIDNO:5509、SEQIDNO:5517、SEQIDNO:5521、SEQIDNO:5520、SEQIDNO:5500、SEQIDNO:5494、SEQIDNO:5508、SEQIDNO:5514或SEQIDNO:5492。7.根据权利要求6所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是B2M，并且导引结构域包含SEQIDNO:5496、SEQIDNO:5498或SEQIDNO:5509。8.根据权利要求1-2中任一项所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是CIITA，并且导引结构域包含SEQIDNO:7771、SEQIDNO:7769、SEQIDNO:7773、SEQIDNO:7726、SEQIDNO:7758、SEQIDNO:7739、SEQIDNO:7779、SEQIDNO:7770、SEQIDNO:7749、SEQIDNO:7754、SEQIDNO:7745、SEQIDNO:7785、SEQIDNO:7731、SEQIDNO:7772、SEQIDNO:7743或SEQIDNO:7750。9.根据权利要求8所述的gRNA分子，其中导引结构域包含SEQIDNO:7769、SEQIDNO:7771、SEQIDNO:7739或SEQIDNO:7785。10.根据权利要求1-4中任一项所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是TRAC，并且导引结构域包含SEQIDNO:5569、SEQIDNO:5587、SEQIDNO:5592或SEQIDNO:5586。11.根据权利要求1-4或10中任一项所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是TRAC，并且导引结构域包含SEQIDNO:5569。12.根据权利要求1-2中任一项所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是CD3E，并且导引结构域包含SEQIDNO:10729、SEQIDNO:10719、SEQIDNO:10764、SEQIDNO:10789、SEQIDNO:10701、SEQIDNO:10700或SEQIDNO:10722。13.根据权利要求1-2中任一项所述的gRNA分子，其中同种异体T细胞靶是FKBP1A，并且导引结构域包含SEQIDNO:6693、SEQIDNO:6705、SEQIDNO:6694、SEQIDNO:6708或SEQIDNO:6699。14.包含tracr和crRNA的gRNA分子，其中crRNA包含导引结构域，所述导引结构域与抑制性分子或借助抑制性分子发生信号传导的下游效应物的靶序列互补，所述抑制性分子或借助抑制性分子发生信号传导的下游效应物的靶序列选自CD274、HAVCR2、LAG3、PDCD1、PD-L2、CTLA4、CEACAM(例如、CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD113)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD107)、KIR、A2aR、MHCI类、MHCII类、GAL9、腺苷和TGFβ或PTPN11。15.根据权利要求14所述的gRNA分子，其中：(a)抑制性分子是CD274(PD-L1)，并且导引结构域包含SEQIDNO:2942至SEQIDNO:3270中的任一者；(b)抑制性分子是HAVCR2(TIM3)，并且导引结构域包含SEQIDNO:3271至SEQIDNO:3541中的任一者；(c)抑制性分子是LAG3，并且导引结构域包含SEQIDNO:3542至SEQIDNO:4032中的任一者；(d)抑制性分子是PDCD1(PD-1)，并且导引结构域包含SEQIDNO:4033至SEQIDNO:4589或SEQIDNO:5720至SEQIDNO:5815中的任一者；或(e)借助抑制性分子发生信号传导的下游效应物是PTPN1，并且导引结构域包含SEQIDNO:4590至SEQIDNO:5277中的任一者。16.根据权利要求14-15中任一项所述的gRNA分子，其中抑制性分子是PDCD1，并且导引结构域包含SEQIDNO:5743、SEQIDNO:5798、SEQIDNO:5748、SEQIDNO:5722、SEQIDNO:5800、SEQIDNO:5735、SEQIDNO:5724、SEQIDNO:5731、SEQIDNO:5725、SEQIDNO:5775、SEQIDNO:5766、SEQIDNO:5727、SEQIDNO:5744、SEQIDNO:5751或SEQIDNO:5734。17.根据权利要求14-15中任一项所述的gRNA分子，其中抑制性分子是PDCD1，并且导引结构域包含SEQIDNO:5775。18.根据权利要求2-13或15-16中任一项所述的gRNA分子，其中导引结构域包含任一个列举的导引结构域序列的17、18、19、20、21、22、23或24个连续核酸。19.根据权利要求2-13或15-16中任一项所述的gRNA分子，其中导引结构域由任一个列举的导引结构域序列的17、18、19、20、21、22、23或24个连续核酸组成。20.根据权利要求18或19所述的gRNA分子，其中任一个列举的导引结构域序列的17、18、19、20、21、22、23或24个连续核酸是在所列举导引结构域序列的3'端设置的17、18、19、20、21、22、23或24个连续核酸。21.根据权利要求18或19所述的gRNA分子，其中任一个列举的导引结构域序列的17、18、19、20、21、22、23或24个连续核酸是在所列举导引结构域序列的5'端设置的17、18、19、20、21、22、23或24个连续核酸。22.根据权利要求18或19所述的gRNA分子，其中任一个列举的导引结构域序列的17、18、19、20、21、22、23或24个连续核酸不包括所列举导引结构域序列的5’或3’核酸。23.根据权利要求2-13或15-16中任一项所述的gRNA分子，其中导引结构域由所列举的导引结构域序列组成。24.前述权利要求任一项所述的gRNA分子，其中crRNA的一部分和tracr的一部分杂交以形成包含SEQIDNO:6584或SEQIDNO:6585的旗杆。25.根据权利要求24所述的gRNA分子，其中旗杆还包括位于旗杆的crRNA部分3’的第一旗杆延长部分，其中所述第一旗杆延长部分包含SEQIDNO:6586。26.根据权利要求24或25所述的gRNA分子，其中旗杆还包括位于旗杆的crRNA部分3’的第二旗杆延长部分和，如果存在，第一旗杆延长部分，其中所述第二旗杆延长部分包含SEQIDNO:6587。27.根据权利要求1-26中任一项所述的gRNA分子，其中tracr包含：(a)SEQIDNO:7820，任选地在3'端还包含附加的1、2、3、4、5、6或7个尿嘧啶(U)核苷酸；(b)SEQIDNO:6660；或(c)SEQIDNO:6661。28.根据权利要求27所述的gRNA分子，其中旗杆的crRNA部分包含SEQIDNO:6607或SEQIDNO:6608。29.根据权利要求1-26中任一项所述的gRNA分子，其中tracr包含SEQIDNO:6589或SEQIDNO:6590，和任选地，如果存在第一旗杆延长部分，设置在SEQIDNO:6589或SEQIDNO:6590的5’的第一tracr延长部分，所述第一tracr延长部分包含SEQIDNO:6591。30.根据权利要求19-20中任一项所述的gRNA分子，其中导引结构域和tracr设置在分开的核酸分子上。31.根据权利要求1-23中任一项所述的gRNA分子，其中crRNA从5’至3’包含[导引结构域]-：a)SEQIDNO:6584；b)SEQIDNO:6585；c)SEQIDNO:6605；d)SEQIDNO:6606；e)SEQIDNO:6607；f)SEQIDNO:6608；或g)SEQIDNO:7806。32.根据权利要求1-23或31中任一项所述的gRNA分子，其中tracr从5’至3’包含：a)SEQIDNO:6589；b)SEQIDNO:6590；c)SEQIDNO:6609；d)SEQIDNO:6610；e)SEQIDNO:6660；f)SEQIDNO:6661；g)SEQIDNO:7820；h)SEQIDNO:7807；i)SEQIDNO:7808；j)SEQIDNO:7809；k)以上a)至j)的任一项，在3'端还包含至少1、2、3、4、5、6或7个尿嘧啶(U)核苷酸，例如，1、2、3、4、5、6或7个尿嘧啶(U)核苷酸；l)以上a)至k)的任一项，在3'端还包含至少1、2、3、4、5、6或7个腺嘌呤(A)核苷酸，例如，1、2、3、4、5、6或7个腺嘌呤(A)核苷酸；或m)以上a)至l)的任一项，在5'端(例如，在5'末端)还包含至少1、2、3、4、5、6或7个腺嘌呤(A)核苷酸，例如，1、2、3、4、5、6或7个腺嘌呤(A)核苷酸。33.根据权利要求1-23中任一项所述的gRNA分子，其中导引结构域和tracr设置在分开的核酸分子上，并且其中包含导引结构域的核酸分子包含任选地紧邻导引结构域的3’设置的SEQIDNO:6607，并且包含tracr的核酸分子包含SEQIDNO:6660，例如，由其组成。34.根据权利要求27-28中任一项所述的gRNA分子，其中导引结构域和tracr设置在单个核酸分子上，并且其中tracr在导引结构域的3’设置。35.根据权利要求34所述的gRNA分子，还包含在导引结构域的3’及在tracr的5’设置的环。36.根据权利要求35所述的gRNA分子，其中环包含SEQIDNO:6588。37.根据权利要求1-23中任一项所述的gRNA分子，从5’至3’包含[导引结构域]-：(a)SEQIDNO:6601；(b)SEQIDNO:6602；(c)SEQIDNO:6603；(d)SEQIDNO:6604；(e)SEQIDNO:7811；或(f)以上(a)至(e)的任一项，在3'端还包含1、2、3、4、5、6或7个尿嘧啶(U)核苷酸。38.根据权利要求1-23中任一项所述的gRNA分子，其中导引结构域和tracr设置在单个核酸分子上，并且其中所述核酸分子包含所述导引结构域和任选地紧邻所述导引结构域的3’设置的SEQIDNO:6601，例如，由其组成。39.根据权利要求1-23中任一项所述的gRNA分子，其中导引结构域和tracr设置在单个核酸分子上，并且其中所述核酸分子包含所述导引结构域和任选地紧邻所述导引结构域的3’设置的SEQIDNO:7811，例如，由其组成。40.根据权利要求1-39中任一项所述的gRNA分子，其中一个或任选地多于一个包含gRNA分子的核酸分子包含：a)在所述核酸分子或多个分子的3'端的硫代磷酸酯修饰，例如，三个硫代磷酸酯修饰；b)在所述核酸分子或多个分子的5'端的硫代磷酸酯修饰，例如，三个硫代磷酸酯修饰；c)在所述核酸分子或多个分子的3'端的2'-O-甲基修饰，例如，三个2'-O-甲基修饰；d)在所述核酸分子或多个分子的5'端的2'-O-甲基修饰，例如，三个2'-O-甲基修饰；e)在所述核酸分子或多个分子的3’倒数第4残基、倒数第3残基和倒数第2残基的每者处的2’O-甲基修饰；或f)其任意组合。41.根据权利要求1-40中任一项所述的gRNA分子，其中将包含gRNA分子的CRISPR系统(例如本文所述的RNP)引入细胞时，插入/缺失在与gRNA分子的导引结构域互补的靶序列处或其附近形成。42.根据权利要求41所述的gRNA分子，其中插入/缺失是移码突变。43.根据权利要求41-42中任一项所述的gRNA分子，其中插入/缺失是在图34A、图34B、图36、图38、图41、图44、图48、图49、图50或图53的任一图中列出的插入/缺失。44.根据权利要求1-40中任一项所述的gRNA分子，其中将包含gRNA分子的CRISPR系统(例如本文所述的RNP)引入细胞群体时，插入/缺失在至少约40％，例如，至少约50％，例如，至少约60％，例如，至少约70％，例如，至少约80％，例如，至少约90％，例如，至少约95％，例如，至少约96％，例如，至少约97％，例如，至少约98％，例如，至少约99％的细胞群体中与gRNA分子的导引结构域互补的靶序列处或其附近形成。45.根据权利要求1-40中任一项所述的gRNA分子，其中将包含gRNA分子的CRISPR系统(例如本文所述的RNP)引入细胞群体时，作为移码突变的插入/缺失在至少约20％，例如，至少约30％，例如，至少约35％，例如，至少约40％，例如，至少约45％，例如，至少约50％，例如，至少约55％，例如，至少约60％，例如，至少约65％，例如，至少约70％，例如，至少约75％，例如，至少约80％，例如，至少约85％，例如，至少约90％，例如，至少约95％，例如，至少约99％的细胞群体中与gRNA分子的导引结构域互补的靶序列处或其附近形成。46.根据权利要求43-44中任一项所述的gRNA分子，其中在至少约30％，例如，至少约40％，例如，至少约50％，例如，至少约60％，例如，至少约70％，例如，至少约80％，例如，至少约90％，例如，至少约95％，例如，至少约96％，例如，至少约97％，例如，至少约98％，例如，至少约99％的细胞群体中，插入/缺失是在图34A、图34B、图36、图38、图41、图44、图48、图49、图50或图53的任一图中列出的插入/缺失。47.根据权利要求43-45中任一项所述的gRNA分子，其中五个在所述细胞群体中最频繁检测到的插入/缺失包括三个或更多个，例如，四个，例如，五个与图34A、图34B、图36、图38、图41、图44、图48、图49、图50或图53的任一图中列出的任何gRNA相关的插入/缺失。48.根据权利要求41-46中任一项所述的gRNA分子，其中插入/缺失如通过下一代测序法(NGS)所测量。49.根据权利要求1-47中任一项所述的gRNA分子，其中将包含gRNA分子的CRISPR系统(例如本文所述的RNP)引入细胞时，包含与gRNA分子的导引结构域互补的靶序列的基因的表达在所述细胞中减少或消除。50.根据权利要求1-48中任一项所述的gRNA分子，其中将包含gRNA分子的CRISPR系统(例如本文所述的RNP)引入细胞群体时，包含与gRNA分子的导引结构域互补的靶序列的基因的表达在至少约40％，例如，至少约50％，例如，至少约60％，例如，至少约70％，例如，至少约80％，例如，至少约90％，例如，至少约95％，例如，至少约96％，例如，至少约97％，例如，至少约98％，例如，至少约99％的细胞群体中减少或消除。51.根据权利要求48-49中任一项所述的gRNA分子，其中通过流式细胞术测量减少或消除的表达。52.根据权利要求41-50中任一项所述的gRNA分子，其中将包含gRNA分子的CRISPR系统(例如本文所述的RNP)引入细胞时，所述细胞中不形成脱靶插入/缺失，例如，如通过下一代测序法和/或核苷酸插入测定法可检测。53.根据权利要求41-50中任一项所述的gRNA分子，其中将包含gRNA分子的CRISPR系统(例如本文所述的RNP)引入细胞群体时，在细胞群体不多于约5％，例如，不多于约1％，例如，不多于约0.1％，例如，不多于约0.01％的细胞中检测到脱靶插入/缺失，例如，如通过下一代测序法和/或核苷酸插入测定法可检测。54.根据权利要求41-52中任一项所述的gRNA分子，其中细胞是(或细胞群体包含)哺乳动物细胞、灵长类细胞或人细胞，例如，是人细胞。55.根据权利要求53所述的gRNA分子，其中细胞是(或细胞群体包含)免疫效应细胞。56.根据权利要求54所述的gRNA分子，其中免疫效应细胞是(或细胞群体包含)T细胞或NK细胞，例如，是T细胞。57.根据权利要求55所述的gRNA分子，其中T细胞是(或细胞群体包含)CD4+T细胞、CD8+T细胞或其组合。58.根据权利要求52-55中任一项所述的gRNA分子，其中细胞(或细胞群体)已经或将要工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)。59.根据权利要求57所述的gRNA分子，其中CAR是：(a)CD19CAR；或(b)BCMACAR。60.根据权利要求58所述的gRNA分子，其中：(a)CAR是包含抗原结合结构域的CD19CAR，所述抗原结合结构域包含SEQIDNO:7883至SEQIDNO:7898中的任一者；(b)CAR是包含SEQIDNO:7909或SEQIDNO:7920的CD19CAR；(a)CAR是包含抗原结合结构域的BCMACAR，所述抗原结合结构域包含SEQIDNO:7939至SEQIDNO:8112中的任一者，例如，包含SEQIDNO:7949的抗原结合结构域；或(d)CAR是包含SEQIDNO:8549至SEQIDNO:8621中的任一者，例如，包含SEQIDNO:8559的BCMACAR。61.根据权利要求41-59中任一项所述的gRNA分子，其中细胞相对于待施用所述细胞的患者是同种异体的。62.组合物，包含根据权利要求1-60中任一项所述的第一gRNA分子，还包含Cas9分子。63.根据权利要求61所述的组合物，其中Cas9分子包含SEQIDNO:6611或SEQIDNO:7821至SEQIDNO:7831的任一者，例如，由其组成。64.根据权利要求61所述的组合物，其中Cas9分子是有活性或无活性的化脓性链球菌(S.pyogenes)Cas9。65.根据权利要求61-63中任一项所述的组合物，其中第一gRNA分子和Cas9分子存在于核糖核蛋白复合体(RNP)中。66.根据权利要求61-64中任一项所述的组合物，还包含第二gRNA分子；第二gRNA分子和第三gRNA分子；或第二gRNA分子、第三gRNA分子和第四gRNA分子，其中第二gRNA分子、第三gRNA分子(如果存在)和第四gRNA分子(如果存在)是根据权利要求1-26中任一项所述的gRNA分子，并且其中组合物的每种gRNA分子与不同的靶序列互补。67.根据权利要求65所述的组合物，其中第一gRNA分子、第二gRNA分子、第三gRNA分子(如果存在)和第四gRNA分子(如果存在)与相同基因内部的靶序列互补。68.根据权利要求65或66所述的组合物，其中第一gRNA分子、第二gRNA分子、第三gRNA分子(如果存在)和第四gRNA分子(如果存在)与相隔不多于20000个核苷酸、不多于10000个核苷酸、不多于6000个、不多于5000个核苷酸、不多于4000，不多于1000个核苷酸、不多于500个核苷酸、不多于400个核苷酸、不多于300个核苷酸、不多于200个核苷酸、不多于100个核苷酸、不多于90个核苷酸、不多于80个核苷酸、不多于70个核苷酸、不多于60个核苷酸、不多于50个核苷酸、不多于40个核苷酸、不多于30个核苷酸、不多于20个核苷酸或不多于10个核苷酸的靶序列互补。69.根据权利要求65所述的组合物，其中第一gRNA分子、第二gRNA分子、第三gRNA分子(如果存在)和第四gRNA分子(如果存在)与不同基因内部的靶序列互补。70.根据权利要求68所述的组合物，包含第一gRNA分子、第二gRNA分子和第三gRNA分子，其中第一gRNA分子是根据权利要求2(b)、2(c)、2(d)、2(d)、2(e)、2(f)、2(g)或2(h)中任一项所述的gRNA分子；并且第二gRNA分子是根据权利要求2(a)、2(i)、2(j)、2(k)或2(q)中任一项所述的gRNA分子；并且第三gRNA分子是根据权利要求15(a)、15(b)、15(c)、15(d)或15(e)中任一项所述的gRNA分子。71.根据权利要求69所述的组合物，包含第一gRNA分子，第二gRNA分子和第三gRNA分子，其中第一gRNA分子是根据权利要求2(b)、2(c)、2(d)、2(d)、2(e)、2(f)、2(g)或2(h)中任一项所述的gRNA分子；并且第二gRNA分子是根据权利要求2(l)、2(m)、2(n)或2(o)中任一项所述的gRNA分子；并且第三gRNA分子是根据权利要求15(a)、15(b)、15(c)、15(d)或15(e)中任一项所述的gRNA分子。72.根据权利要求70所述的组合物，包含第一gRNA分子和第二gRNA分子，其中第一gRNA分子是根据权利要求2(b)、2(c)、2(d)、2(d)、2(e)、2(f)、2(g)或2(h)中任一项所述的gRNA分子；并且第二gRNA分子是根据权利要求2(l)、2(m)、2(n)或2(o)中任一项所述的gRNA分子。73.根据权利要求70所述的组合物，包含第一gRNA分子和第二gRNA分子，其中第一gRNA分子是根据权利要求2(b)、2(c)、2(d)、2(d)、2(e)、2(f)、2(g)或2(h)中任一项所述的gRNA分子；并且第二gRNA分子是根据权利要求2(a)、2(i)、2(j)或2(k)中任一项所述的gRNA分子。74.根据权利要求70所述的组合物，包含第一gRNA分子和第二gRNA分子，其中第一gRNA分子是根据权利要求2(b)、2(c)、2(d)、2(d)、2(e)、2(f)、2(g)或2(h)中任一项所述的gRNA分子；并且第二gRNA分子是根据权利要求15(a)、15(b)、15(c)、15(d)或15(e)中任一项所述的gRNA分子。75.根据权利要求70所述的组合物，包含第一gRNA分子和第二gRNA分子，其中第一gRNA分子是根据权利要求15(a)、15(b)、15(c)、15(d)或7(e)中任一项所述的gRNA分子；并且第二gRNA分子是根据权利要求15(a)、15(b)、15(c)、15(d)或15(e)中任一项所述的gRNA分子。76.根据权利要求74所述的组合物，还包含第三gRNA分子，其中第三gRNA分子是根据权利要求15(a)、15(b)、15(c)、15(d)或15(e)中任一项所述的gRNA分子。77.根据权利要求65-68、71、72、73或74中任一项所述的组合物，由根据权利要求1-60中任一项所述的两种gRNA分子组成。78.根据权利要求65-70或75中任一项所述的组合物，由根据权利要求1-60中任一项所述的三种gRNA分子组成。79.组合物，包含：a)根据权利要求1-60中任一项所述的第一gRNA分子，其中所述第一gRNA分子的导引结构域是根据权利要求2(a)、2(i)、2(j)或2(k)中任一项所述的导引结构域；和b)根据权利要求1-60中任一项所述的第二gRNA分子，其中所述第二gRNA分子的导引结构域是根据权利要求2(b)、2(c)、2(d)、2(f)、2(g)、2(h)或2(i)中任一项所述的导引结构域。80.根据权利要求78所述的组合物，其中：a)所述第一gRNA分子的导引结构域是根据权利要求6所述的导引结构域；和b)所述第二gRNA分子的导引结构域是根据权利要求3所述的导引结构域。81.根据权利要求78所述的组合物，其中：a)所述第一gRNA分子的导引结构域是根据权利要求7所述的导引结构域；和b)所述第二gRNA分子的导引结构域是根据权利要求4所述的导引结构域。82.根据权利要求78所述的组合物，其中：a)所述第一gRNA分子的导引结构域是根据权利要求7所述的导引结构域；和b)所述第二gRNA分子的导引结构域是根据权利要求11所述的导引结构域。83.根据权利要求78所述的组合物，其中：a)所述第一gRNA分子的导引结构域是根据权利要求7所述的导引结构域；和b)所述第二gRNA分子的导引结构域是根据权利要求12所述的导引结构域。84.根据权利要求78-82中任一项所述的组合物，还包含根据权利要求1-60中任一项所述的第三gRNA分子，其中所述第三gRNA分子的导引结构域是根据权利要求2(n)或2(q)中任一项所述的导引结构域。85.根据权利要求83所述的组合物，其中所述第三gRNA分子的导引结构域是根据权利要求8所述的导引结构域。86.根据权利要求83所述的组合物，其中所述第三gRNA分子的导引结构域是根据权利要求9所述的导引结构域。87.根据权利要求78-85中任一项所述的组合物，还包含第四gRNA分子，其中所述第四gRNA分子的导引结构域与NK抑制性分子的靶的靶序列互补。88.根据权利要求86所述的组合物，其中NK抑制性分子的靶是LILRB1。89.根据权利要求87所述的组合物，其中所述第四gRNA分子的导引结构域包含以下任一者，例如，由其组成：a)SEQIDNO:10090至SEQIDNO:10673中的任一者；b)SEQIDNO:10090至SEQIDNO:10673中任一者的17、18、19、20、21、22、23或24个连续核苷酸，优选地20个连续核苷酸。c)SEQIDNO:10090至SEQIDNO:10673中的任一者的5’17、18、19、20、21、22、23或24个核苷酸，优选地20个核苷酸；或d)SEQIDNO:10090至SEQIDNO:10673中的任一者的3’17、18、19、20、21、22、23或24个核苷酸，优选地20个核苷酸。90.根据权利要求78-88中任一项所述的组合物，其中每种所述gRNA分子在具有的Cas9分子的本文所述核糖核蛋白复合体(RNP)中。91.根据权利要求61-89中任一项所述的组合物，配制在适于电穿孔的培养基中。92.根据权利要求61-90中任一项所述的组合物，其中每种所述gRNA分子在具有本文所述的Cas9分子的RNP复合体中，并且其中每种所述RNP复合体处于小于约10uM，例如，小于约3uM，例如，小于约1uM，例如，小于约0.5uM，例如，小于约0.3uM，例如，小于约0.1uM的浓度。93.根据权利要求91所述的组合物，还包含例如本文所述的细胞，例如，细胞群体，例如，免疫效应细胞，例如，表达CAR的免疫效应细胞。94.核酸序列，编码根据权利要求1-60中任一项所述的gRNA分子或根据权利要求61-92中任一项所述的组合物的某个组分，例如，全部组分。95.根据权利要求93所述的核酸序列，其中核酸包含与编码gRNA分子的序列有效连接的启动子。96.根据权利要求94所述的核酸序列，其中启动子是RNA聚合酶II或RNA聚合酶III识别的启动子。97.根据权利要求95所述的核酸序列，其中启动子是U6启动子或HI启动子。98.根据权利要求93-96中任一项所述的核酸序列，其中核酸还编码Cas9分子。99.根据权利要求97所述的核酸序列，其中所述核酸包含与编码Cas9分子的序列有效连接的启动子。100.根据权利要求98所述的核酸序列，其中启动子是EF-1启动子、CMVIE基因启动子、EF-1α启动子、泛素C启动子或磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子。101.载体，包含根据权利要求93-99中任一项所述的核酸。102.根据权利要求80所述的载体，其中载体选自慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒(AAV)载体、单纯疱疹病毒(HSV)载体、质粒、微环、纳米质粒和RNA载体。103.组合物，包含根据权利要求1-60中任一项所述的gRNA分子和编码Cas9分子的核酸。104.组合物，包含编码根据权利要求1-60中任一项所述的gRNA分子的核酸和Cas9分子。105.根据权利要求61-92或102-103中任一项所述的组合物，还包含模板核酸。106.根据权利要求104所述的组合物，其中模板核酸包含与gRNA分子的靶序列的核苷酸对应的核苷酸。107.根据权利要求104-105中任一项所述的组合物，其中模板核酸包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸。108.根据权利要求106所述的组合物，其中CAR是：(a)CD19CAR，例如，如WO2012/079000或WO2014/153270中所述；或(b)BCMACAR，例如，如本文所述，例如，包含SEQIDNO:8559的BCMACAR。109.根据权利要求104-107中任一项所述的组合物，其中模板核酸包含编码NK抑制性分子的核酸。110.改变细胞的靶序列，例如，改变其结构，例如，改变其序列的方法，包括使所述细胞与以下接触：a)根据权利要求1-60中任一项所述的gRNA分子(例如多于一种的gRNA分子)和Cas9分子；b)根据权利要求1-60中任一项所述的gRNA分子(例如多于一种的gRNA分子)和编码Cas9分子的核酸；c)编码根据权利要求1-60中任一项所述的gRNA分子(例如多于一种的gRNA分子)的核酸和Cas9分子；d)编码根据权利要求1-60中任一项所述的gRNA分子(例如，多于一种的gRNA分子)的核酸和编码Cas9分子的核酸；e)以上a)至d)的任意项和模板核酸；f)以上a)至d)的任意项和包含有编码模板核酸的序列的核酸；g)根据权利要求61-92或102-108中任一项所述的组合物；或h)根据权利要求100-101中任一项所述的载体。111.根据权利要求109所述的方法，其中gRNA分子或编码gRNA分子的核酸和Cas9分子或编码Cas9分子的核酸配制在单一组合物中。112.根据权利要求109所述的方法，其中gRNA分子或编码gRNA分子的核酸和Cas9分子或编码Cas9分子的核酸配制在多于一种组合物中。113.根据权利要求111所述的方法，其中同时或依次地递送多于一种组合物。114.根据权利要求109-112中任一项所述的方法，其中细胞是动物细胞。115.根据权利要求109-112中任一项所述的方法，其中细胞是哺乳动物细胞、灵长类细胞或人细胞。116.根据权利要求114所述的方法，免疫效应细胞(例如，免疫效应细胞群体)。117.根据权利要求115所述的方法，其中免疫效应细胞是T细胞或NK细胞。118.根据权利要求115-116中任一项所述的方法，其中免疫效应细胞是T细胞。119.根据权利要求117所述的方法，其中T细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞或其组合。120.根据权利要求113-119中任一项所述的方法，其中细胞已经或将要工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)。121.根据权利要求119所述的方法，其中CAR是：(a)CD19CAR；或(b)BCMACAR。122.根据权利要求120所述的方法，其中CAR是包含抗原结合结构域的CD19CAR，所述抗原结合结构域包含SEQIDNO:7883至SEQIDNO:7898中的任一者。123.根据权利要求120和121中任一项所述的方法，其中CAR是CD19CAR并且包含SEQIDNO:7908至SEQIDNO:7920中的任一者。124.根据权利要求120所述的方法，其中CAR是包含抗原结合结构域的BCMACAR，所述抗原结合结构域包含SEQIDNO:7939至SEQIDNO:8112中的任一者。125.根据权利要求120和123中任一项所述的方法，其中CAR是BCMACAR并且包含SEQIDNO:8549至SEQIDNO:8621中的任一者，例如，包含SEQIDNO:8559。126.根据权利要求113-124中任一项所述的方法，其中细胞相对于待施用所述细胞的患者是自体的或同种异体的。127.细胞，借助根据权利要求109-124中任一项所述的方法改变。128.细胞，包含根据权利要求1-60中任一项所述的第一gRNA分子、或根据权利要求61-92或102-108中任一项所述的组合物、根据权利要求93-99中任一项所述的核酸，或根据权利要求100-101中任一项所述的载体。129.根据权利要求126或127中任一项所述的细胞，其中细胞是动物细胞。130.根据权利要求126-128中任一项所述的细胞，其中细胞是哺乳动物细胞、灵长类细胞或人细胞。131.根据权利要求129所述的细胞，其中细胞是免疫效应细胞(例如，免疫效应细胞群体)。132.根据权利要求130所述的细胞，其中免疫效应细胞是T细胞或NK细胞。133.根据权利要求130-131中任一项所述的细胞，其中免疫效应细胞是T细胞。134.根据权利要求132所述的细胞，其中T细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞或其组合。135.根据权利要求126-133中任一项所述的细胞，其中细胞已经或将要工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)。136.根据权利要求126-134中任一项所述的细胞，其中细胞相对于待施用所述细胞的患者是自体的。137.根据权利要求126-134中任一项所述的细胞，其中细胞相对于待施用所述细胞的患者是同种异体的。138.根据权利要求126-136中任一项所述的细胞，其中细胞包含、已经包含或将要包含根据权利要求1-60中任一项所述的第二gRNA分子，或编码根据权利要求1-60中任一项所述的第二gRNA分子的核酸，其中第一gRNA分子和第二gRNA分子包含不相同的导引结构域。139.根据权利要求137所述的细胞，其中第一gRNA分子包含与同种异体T细胞靶的靶序列互补的导引结构域(例如，表1、3、4或5中描述的导引结构域)，并且第二gRNA分子包含与抑制性分子的靶序列或借助抑制性分子发生信号传导的下游效应物的靶序列互补的导引结构域(例如，包括表2或表6中描述的导引结构域)。140.根据权利要求138所述的细胞，其中抑制性分子或借助抑制性分子发生信号传导的下游效应物是CD274、HAVCR2、LAG3、PDCD1、PD-L2、CTLA4、CEACAM(例如、CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD113)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD107)、KIR、A2aR、MHCI类、MHCII类、GAL9、腺苷和TGFβ或PTPN11。141.根据权利要求137所述的细胞，其中第一gRNA分子包含与TRAC、TRBC1、TRBC2、CD247、CD3D、CD3E或CD3G的靶序列互补的导引结构域，并且第二gRNA分子包含与NLRC5的靶序列互补的导引结构域，例如，包含有包含SEQIDNO:8622至SEQIDNO:10089中的任一者(例如，由其组成)的导引结构域。142.根据权利要求137所述的细胞，其中第一gRNA分子包含与TRAC、TRBC1、TRBC2、CD247、CD3D、CD3E或CD3G的靶序列互补的导引结构域，并且第二gRNA分子包含与B2M、HLA-A、HLA-B或HLA-C的靶序列互补的导引结构域。143.根据权利要求137和141中任一项所述的细胞，其中细胞还包含、已经包含或将要包含根据权利要求1-60中任一项所述的第三gRNA分子，或编码根据权利要求1-60中任一项所述的第三gRNA分子的核酸，其中第一gRNA分子、第二gRNA分子和第三gRNA分子包含不相同的导引结构域。144.根据权利要求142所述的细胞，其中第三gRNA分子包含与CIITA、RFXANK、RFX5或RFXAP的靶序列互补的导引结构域。145.根据权利要求143所述的细胞，其中第三gRNA分子包含与CIITA的靶序列互补的导引结构域。146.根据权利要求144所述的细胞，其中第三gRNA分子包含有包含SEQIDNO:7717至SEQIDNO:7804中任一者(例如，由其组成)的导引结构域，例如，包含有包含SEQIDNO:7769、SEQIDNO:7771或SEQIDNO:7785中任一者(例如，由其组成)的导引结构域。147.根据权利要求142-145中任一项所述的细胞，其中第一gRNA分子包含与TRAC的靶序列互补的导引结构域；第二gRNA分子包含与B2M的靶序列互补的导引结构域；并且第三gRNA分子包含与CIITA的靶序列互补的导引结构域。148.根据权利要求142-145中任一项所述的细胞，其中第一gRNA分子包含与TRAC的靶序列互补的导引结构域；第二gRNA分子包含与NLRC5的靶序列互补的导引结构域；并且第三gRNA分子包含与CIITA的靶序列互补的导引结构域。149.根据权利要求137所述的细胞，其中第一gRNA分子包含与TRAC、TRBC1、TRBC2、CD247、CD3D、CD3E或CD3G的靶序列互补的导引结构域，并且第二gRNA分子包含与NR3C1、DCK、CD52或FKBP1A的靶序列互补的导引结构域。150.根据权利要求137所述的细胞，其中：(1)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1至SEQIDNO:83和SEQIDNO:5492至SEQIDNO:5527的导引结构域；(2)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:969至SEQIDNO:1345的导引结构域；(3)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1346至SEQIDNO:1698的导引结构域；(4)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1699至SEQIDNO:2068的导引结构域；(5)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:2069至SEQIDNO:2941的导引结构域；(6)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:5278至SEQIDNO:5491的导引结构域；(7)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6227至SEQIDNO:6324的导引结构域；(8)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5528至SEQIDNO:5623或SEQIDNO:5816至SEQIDNO:5965的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6325至SEQIDNO:6583的导引结构域；(9)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1至SEQIDNO:83和SEQIDNO:5492至SEQIDNO:5527的导引结构域；(10)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:969至SEQIDNO:1345的导引结构域；(11)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1346至SEQIDNO:1698的导引结构域；(12)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1699至SEQIDNO:2068的导引结构域；(13)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:2069至SEQIDNO:2941的导引结构域；(14)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:5278至SEQIDNO:5491的导引结构域；(15)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6227至SEQIDNO:6324的导引结构域；(16)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5624至SEQIDNO:5643或SEQIDNO:5966至SEQIDNO:6097的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6325至SEQIDNO:6583的导引结构域；(17)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1至SEQIDNO:83和SEQIDNO:5492至SEQIDNO:5527的导引结构域；(18)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:969至SEQIDNO:1345的导引结构域；(19)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1346至SEQIDNO:1698的导引结构域；(20)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1699至SEQIDNO:2068的导引结构域；(21)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:2069至SEQIDNO:2941的导引结构域；(22)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:5278至SEQIDNO:5491的导引结构域；(23)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6227至SEQIDNO:6324的导引结构域；(24)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:5644至SEQIDNO:5719或SEQIDNO:6098至SEQIDNO:6226的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6325至SEQIDNO:6583的导引结构域；(25)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:84至SEQIDNO:392的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1至SEQIDNO:83和SEQIDNO:5492至SEQIDNO:5527的导引结构域；(26)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:84至SEQIDNO:392的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:969至SEQIDNO:1345的导引结构域；(27)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:84至SEQIDNO:392的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1346至SEQIDNO:1698的导引结构域；(28)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:84至SEQIDNO:392的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1699至SEQIDNO:2068的导引结构域；(29)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:84至SEQIDNO:392的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:2069至SEQIDNO:2941的导引结构域；(30)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:84至SEQIDNO:392的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:5278至SEQIDNO:5491的导引结构域；(31)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:84至SEQIDNO:392的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6227至SEQIDNO:6324的导引结构域；(32)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:84至SEQIDNO:392的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6325至SEQIDNO:6583的导引结构域；(33)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:393至SEQIDNO:532的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1至SEQIDNO:83和SEQIDNO:5492至SEQIDNO:5527的导引结构域；(34)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:393至SEQIDNO:532的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:969至SEQIDNO:1345的导引结构域；(35)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:393至SEQIDNO:532的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1346至SEQIDNO:1698的导引结构域；(36)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:393至SEQIDNO:532的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1699至SEQIDNO:2068的导引结构域；(37)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:393至SEQIDNO:532的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:2069至SEQIDNO:2941的导引结构域；(38)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:393至SEQIDNO:532的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:5278至SEQIDNO:5491的导引结构域；(39)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:393至SEQIDNO:532的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6227至SEQIDNO:6324的导引结构域；(40)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:393至SEQIDNO:532的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:6325至SEQIDNO:6583的导引结构域；(41)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:533至SEQIDNO:839的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1至SEQIDNO:83和SEQIDNO:5492至SEQIDNO:5527的导引结构域；(42)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:533至SEQIDNO:839的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:969至SEQIDNO:1345的导引结构域；(43)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:533至SEQIDNO:839的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1346至SEQIDNO:1698的导引结构域；(44)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:533至SEQIDNO:839的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:1699至SEQIDNO:2068的导引结构域；(45)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:533至SEQIDNO:839的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:2069至SEQIDNO:2941的导引结构域；(46)第一gRNA分子包含选自SEQIDNO:533至SEQIDNO:839的导引结构域，并且第二向导RNA分子包含选自SEQIDNO:5278至SEQ...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈名伟，M·戴克，G·德拉诺夫，C·米克宁，R·莱斯卡博，C·理查森，M·斯图尔特，Y·杨，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，因特利亚治疗公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH
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