短肽在制备免疫调节药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及短肽miPEP155在制备免疫调节药物中的应用。所述短肽来自于微小RNA155的host gene，称为miPEP155。所述的miPEP155多肽能抑制Th17细胞的分化，具有免疫调节功能，可用于预防或治疗自身免疫性疾病。

Application of short peptides in the preparation of immunomodulatory drugs

The invention relates to the application of short peptide miPEP155 in the preparation of immunomodulatory drugs. The short peptide comes from the host gene of tiny RNA155, called miPEP155. The miPEP155 polypeptide can inhibit the differentiation of Th17 cells, has the immune regulation function, and can be used for preventing or treating autoimmune diseases.

【技术实现步骤摘要】
短肽在制备免疫调节药物中的应用
本专利技术属于生物医药领域，更具体地说，本专利技术涉及短肽miPEP155在制备免疫调节药物中的应用。
技术介绍
Th17细胞(Thelpercell17，Th17)是一种新发现的能够分泌白介素17(interleukin17，IL-17)的T细胞亚群，Th17是由TH0细胞在IL-6和IL-23的刺激下分化而成的辅助性T细胞，RORγ是其重要的转录因子。Th17细胞能够分泌产生IL-17A、IL-17F、IL-6以及肿瘤坏死因子a(tumornecrosisfactora，TNF-a)等，这些细胞因子可以集体动员、募集及活化中性粒细胞，从而有效地介导了组织的炎症反应，因此Th17在自身免疫性疾病和机体防御反应中具有重要的意义。已有研究表明，Th17与银屑病、自身免疫性脑炎、哮喘、类风湿性关节炎等自身免疫疾病密切相关。此外，其也与结肠炎、脑肿瘤，糖尿病病等疾病密切相关。因此，Th17对于自身免疫性疾病的发生和发展都具有重要意义，对其进行深入研究将有助于了解自身免疫性疾病的发病机制，对疾病预后判断、进一步的治疗有着深远的意义。银屑病是一种慢性炎症性疾病，其诱因主要包括：感染、免疫、遗传、精神及环境等因素。银屑病主要病理学变化包括：角质形成细胞角化不全或角化过度，真皮大量炎症细胞浸润，血管异常增生，常伴有糖尿病、冠心病、高血压、抑郁、代谢综合征等系统性疾病。银屑病在中国的发病人群以25-45岁的青壮年为多，近年来儿童银屑病发病率也逐渐增加，银屑病不易治愈且容易复发的特性不仅严重危害患者的身心健康，并且严重影响患者的生活质量。目前临床上治疗银屑病的方法，包括药物治疗、物理治疗、免疫生物学治疗和中医中药治疗等。中国每年用于进口治疗银屑病的药物，尤其是科技含量高、靶向性强的小分子生物类药物的花销庞大，但是，大部分基于抗体等生物制剂药物的银屑病治疗方法都易造成一定程度的毒副作用，并且机体可能对药物产生耐药性，有些银屑病患者在使用一些分子抗体药物停药后出现复发及反弹。因此，开发中国自主知识产权的靶向性强、远期疗效好、安全性高、价格低廉的新一代治疗银屑病的新药势在必行。多肽类(peptide)药物习惯上常指多肽类激素。一般将50或50以下氨基酸残基组成的化合物列入多肽。现已知生物体内含有和分泌很多种激素和活性多肽，仅脑中就存在近40种，而人们还在不断地发现、分离、纯化新的活性多肽物质。多肽随着长度的增加，其稳定性及体内的半衰期都相应变差或者缩短。生理情况的多肽也不一定全部序列都是发挥功能所必须的。通过探索其发挥功能的最短功能域，我们可以增加多肽药物的稳定性及半衰期，降低合成成本，减少生物毒性。多肽在生物体内的浓度很低，但生理活性很强，在调节生理功能时起着非常重要的作用。多肽类药物具有毒性低，特异性高，分子量小等自身独特的优势，且可以通过体外合成及生物学合成大量获得。因此，针对自身免疫性疾病的多肽类药物具有重要的临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术的意义在于本专利技术提供了一种新型的由miRNAhostgene编码的短肽，其可在炎症环境中特异性靶向Th17，抑制Th17的分化，降低银屑病人外周血及IMQ诱导的类银屑病模型鼠皮损区IL-17A的mRNA及蛋白表达水平，并且能够降低Th17的转录因子C/EBPβ的mRNA及蛋白表达水平，小鼠活体实验能够有效减轻IMQ诱导的小鼠类银屑病模型，能够通过人工合成或生物学合成大量获得，可应用于制备免疫调节药物。在本专利技术的第一方面，提供一种短肽，该短肽具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。在一个优选例中，所述的短肽由微小RNA155(miRNA-155)hostgene编码。在本专利技术的另一方面，提供一种分离的多核苷酸，其编码所述的短肽；较佳地，其具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列，或具有SEQIDNO:1中第181～231位或第181～234位所示的核苷酸序列，或它们的简并序列。在本专利技术的另一方面，提供一种表达载体(包括病毒载体或非病毒载体)，其含有所述的多核苷酸。在本专利技术的另一方面，提供一种重组细胞，其含有所述的表达载体或其基因组中包含所述的多核苷酸。在本专利技术的另一方面，提供所述的短肽或编码其的多核苷酸，或所述的表达载体或所述的重组细胞在制备治疗自身免疫性疾病的药物中的应用；较佳地，所述的自身免疫性疾病是Th17过度分化、Th17细胞过度增殖、IL-17A过度表达、C/EBPβ过度表达为特征的自身免疫性疾病；较佳地，所述的自身免疫性疾病是自身免疫性炎症性疾病；更佳地，所述自身免疫性炎症性疾病包括(但不限于)：银屑病，白癜风，皮炎，实验性自身免疫性脑炎(EAE)，哮喘，类风湿性关节炎(RA)，阿瑟氏反应。在一个优选例中，所述的短肽或编码其的多核苷酸，或所述的表达载体或所述的重组细胞在制备免疫调节药物中的应用，所述的免疫调节包括：抑制Th17过度分化、抑制Th17细胞过度增殖、抑制IL-17A过度表达，和/或抑制C/EBPβ过度表达。在本专利技术的另一方面，提供一种制备所述的短肽的方法，所述方法包括：培养所述的重组细胞，从而重组表达所述的短肽；或所述方法包括：通过体外人工合成的方法或生物学合成方法制备所述的短肽。在本专利技术的另一方面，提供一种用于免疫调节的药物组合物，所述的药物组合物包括：所述的短肽或编码其的多核苷酸，或所述的表达载体或所述的重组细胞；以及药学上或生理学上可接受的载体。在本专利技术的另一方面，提供一种用于银屑病治疗的药盒，所述药盒中包括：所述的短肽或编码其的多核苷酸；或所述的表达载体；或所述的重组细胞；或所述的药物组合物。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1A、质谱分析确定miPEP155氨基酸正确性，质谱检测的分子量为1879.3。图1B、HPLC的纯度分析，其纯度为95.1％。图2、外源合成的miPEP155-Histag可以在细胞中表达。A、将miPEP155的编码序列及6*Histag构建到质粒pcDNA3.1(+)的BamHI/XhoI限制性位点中。从而，获得的重质粒在表达后能够形成miPEP155与histag的融合蛋白，经测序鉴定重组质粒重组序列正确。B、将miPEP155-Histag融合蛋白转染293T细胞，24h后固定细胞，免疫荧光染色检测到miPEP155-Histag融合蛋白主要表达在细胞的胞浆及胞膜。图3、外源合成的miPEP155可以抑制Th17的分化。不同浓度的miPEP155(0.1μΜ，1μΜ，10μΜ)加入到T细胞诱导的Th17分化体系中，流式细胞术检测，发现外源合成的miPEP155可以抑制体外诱导的Th17的分化。图4A～C、外源合成的miPEP155可以减少类银屑病模型鼠皮肤中及脾脏Th17的数量。尾静脉注射miPEP155(100μg/只)治疗IMQ诱导的类银屑病模型鼠，7天后，处死小鼠，取耳部皮肤及脾脏进行固定，免疫组化染色检测到miPEP155治疗组小鼠耳部皮肤及脾脏中Th17的数量减少。图5、外源合成的miPEP155能够降低IMQ诱导的类银屑病模型鼠皮损区IL-17AmRNA、蛋白及C/EBPβ蛋白的表达水平。A、外源合成的miPEP155能够降本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种短肽，其特征在于，该短肽具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种短肽，其特征在于，该短肽具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的短肽，其特征在于，所述的短肽由微小RNA155hostgene编码。3.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1所述的短肽；较佳地，其具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列，或具有SEQIDNO:1中第181～231位或第181～234位所示的核苷酸序列，或它们的简并序列。4.一种表达载体，其含有权利要求3所述的多核苷酸。5.一种重组细胞，其含有权利要求4所述的表达载体或其基因组中包含权利要求3所述的多核苷酸。6.权利要求1所述的短肽或编码其的多核苷酸，或权利要求4所述的表达载体或权利要求5所述的重组细胞在制备治疗自身免疫性疾病的药物中的应用；较佳地，所述的自身免疫性疾病是Th17过度分化、Th17细胞过度增殖、IL-17A过度表达、C/EBPβ过度表达为特征的自身免疫性疾病；较佳地，所述的自身免疫性疾病是自身免疫性炎症性疾病；更佳地，所述自身免疫性炎症性疾病包括：银屑病，白癜风，皮炎，实验性自身免疫性脑炎，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宏林，牛立慢，孙洋，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：上海,31