本公开涉及一种生产高尿酸血症动物模型的方法，该方法包括：将斑马鱼进行尿酸氧化酶抑制处理。另一方面，本公开还提供了一种筛选用于治疗高尿酸血症的药物的方法，该方法包括：将斑马鱼进行尿酸氧化酶抑制处理，并且在进行所述尿酸氧化酶抑制处理的同时或在进行所述尿酸氧化酶抑制处理之后，对斑马鱼施用待筛选的药物候选物以进行给药处理，并且在给药处理之后测定斑马鱼体内尿酸含量。通过上述技术方案，所以较其它动物模型来说，可实现降尿酸药物的高通量筛选。
Method for producing hyperuricemia animal model and screening method for treating hyperuricemia
The present disclosure relates to a method for producing an animal model of hyperuricemia, which comprises: zebrafish are subjected to uric acid oxidase inhibition treatment. On the other hand, the present disclosure also provides a method for screening drugs for the treatment of hyperuricemia, which includes: the zebrafish is subjected to an inhibitory treatment of uric acid oxidase, and the zebrafish is subjected to a screening at the same time as or after the inhibitory treatment of uric acid oxidase. Drug candidates were selected for administration and uric acid content in zebrafish was determined after administration. Through the above technical scheme, it is possible to achieve high throughput screening of uric acid-lowering drugs compared with other animal models.
【技术实现步骤摘要】
生产高尿酸血症动物模型的方法和筛选用于治疗高尿酸血症的药物的方法
本公开涉及生物医药
，具体地，涉及一种生产高尿酸血症动物模型的方法和一种筛选用于治疗高尿酸血症的药物的方法。
技术介绍
尿酸是人类嘌呤代谢的终末产物，血尿酸水平男性>7.0mg/dL(420mol/L)或在女性>6.0mg/dL(360mol/L)为高尿酸血症(hyperuricaemia，HUA)，是痛风发生的前期状态。高尿酸血症和痛风发病率随着生活水平的提高而增加，且与性别和饮食习惯相关。痛风在西方发达国家男性和女性中发病率分别为3-6％和1-2％，而在发展中国家的发病率一般低于1％。美国痛风患者占人口的4％，中国内陆地区2000-2014年高尿酸血症人群比率为13.3％(男性19.4％，女性7.9％)，痛风发病率为1.1％，且逐年以0.9％左右的趋势增加，山东沿海城市痛风人群占1.14％，而广东地区高尿酸血症患病率已上升到约26％。痛风的发病进程可以分为四个阶段：第一阶段是血尿酸偏高成为高尿酸血症，但并未形成单钠尿酸盐(monosodiumurate，MSU)晶体；第二阶段是关节滑膜液中形成MSU结晶但无急性痛风关节炎发作；第三阶段是MSU晶体与周围巨噬细胞作用激活NLRP3炎性体(NLRP3inflammasome)，引发典型的急性痛风关节炎；第四阶段是患者四肢关节沉积痛风石并发慢性痛风性关节炎，这四个阶段的进程并非不可避免的。但MSU晶体沉积并不能完全解释痛风的发病机制，因为只有10％左右的高尿酸血症会发展为痛风，因此痛风的发病机制还有待探索。为了研究高尿酸血症的分子机制，采用全基因组关联分析(GenomeWideAssociationStudy，GWAS)技术对超过140000例高尿酸人群进行了相关基因筛选，得到28个与血尿酸浓度相关的基因，发现尿酸的过量产生(Overproduction)，和排泄异常(Underexcretion)都能影响血尿酸浓度。然而，已发现的28个基因只能解释7％的高尿酸血症。为了研究高尿酸血症发病机制，需要构建相应的病理模型。细胞模型不能完全模拟体内代谢，而现有的动物模型均存在一定的缺点。比如小鼠模型，很多通过药物处理并没有检测到血液里尿酸升高，通过敲除尿酸氧化酶构建的小鼠模型，半数不能存活四周以上。还有采用尿酸盐直接注入大鼠或兔体内或关节腔内形成关节肿胀，以模拟急性痛风，也有采用高嘌呤高尿酸喂食无Uox基因的禽类如鹌鹑构建的，然后从足趾肿胀、炎症等方面等评价药物治疗急性痛风的功效，由于以上均为急性药物造模，对于痛风的病理和生化基础均不同于人类因代谢障碍而形成的痛风性关节炎，所以不能准确评价抗痛风药物的作用及机制，许多具有抗炎镇痛的药物对MSU注射引起的关节肿胀都有不同程度的抑制。与人类尿酸代谢相似的禽类造模不方便，存在指标测定和实验室饲养困难等缺陷。最重要的是目前的动物模型均不能实现高通量筛选降尿酸药物的目的。
技术实现思路
本公开的目的是实现高通量筛选降尿酸药物。为了实现上述目的，本公开提供一种生产高尿酸血症动物模型的方法，所述动物模型为斑马鱼动物模型，该方法包括：将斑马鱼进行尿酸氧化酶抑制处理。另一方面，本公开还提供了一种筛选用于治疗高尿酸血症的药物的方法，该方法包括：将斑马鱼进行尿酸氧化酶抑制处理；并且该方法还包括：在进行所述尿酸氧化酶抑制处理的同时或在进行所述尿酸氧化酶抑制处理之后，对斑马鱼施用待筛选的药物候选物以进行给药处理，并且在给药处理之后测定斑马鱼体内尿酸含量。通过上述技术方案，所以较其它动物模型来说，可实现降尿酸药物的高通量筛选。本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。附图说明附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：图1是浸泡24h不同浓度氧嗪酸钾和黄嘌呤钠盐的斑马鱼体内尿酸含量。图2是不同浸泡时间斑马鱼体内尿酸含量。图3是不同浓度的别嘌呤醇对斑马鱼模型高尿酸有降低作用的结果图。图4是不同浓度的别嘌呤醇对斑马鱼模型高尿酸的尿酸降低率(Uricacidreduction)的结果图。具体实施方式以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。本公开提供了一种生产高尿酸血症动物模型的方法，该方法包括：将斑马鱼进行尿酸氧化酶抑制处理。可选地，所述尿酸氧化酶抑制处理可以包括：在斑马鱼的饲养水体中添加氧嗪酸钾和黄嘌呤钠盐以进行造模处理。可选地，在斑马鱼受精卵发育后的第3-8天起，进行所述造模处理；优选在斑马鱼受精卵发育后的第5-8天起，进行所述造模处理，更优选在斑马鱼受精卵发育后的第5天起，进行所述造模处理。其中，斑马鱼受精卵发育后的第5天时器官发育成熟度较为合适，适合进行尿酸氧化酶抑制处理。其中，氧嗪酸钾的终浓度可以为200-800μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度可以为10-40μmol/L；优选地，氧嗪酸钾的终浓度为200μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度为10μmol/L。其中，可选地，所述疾病为急性高尿酸血症，氧嗪酸钾的终浓度为200-400μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度为10-20μmol/L。其中，可选地，进行所述造模处理的时间为12-48小时。其中，可选地，每升的所述斑马鱼的饲养水体中饲养的斑马鱼的数量为40-60尾。另一方面，本公开还提供了一种筛选用于治疗高尿酸血症的药物的方法，该方法包括：将斑马鱼进行尿酸氧化酶抑制处理；并且该方法还包括：在进行所述尿酸氧化酶抑制处理的同时或在进行所述尿酸氧化酶抑制处理之后，对斑马鱼施用待筛选的药物候选物以进行给药处理，并且在给药处理之后测定斑马鱼体内尿酸含量。可选地，所述尿酸氧化酶抑制处理可以包括：在斑马鱼的饲养水体中添加氧嗪酸钾和黄嘌呤钠盐以进行造模处理。可选地，在斑马鱼受精卵发育后的第3-8天起，进行所述造模处理；优选在斑马鱼受精卵发育后的第5-8天起，进行所述造模处理，更优选在斑马鱼受精卵发育后的第5天起，进行所述造模处理。其中，斑马鱼受精卵发育后的第5天时器官发育成熟度较为合适，适合进行尿酸氧化酶抑制处理。其中，氧嗪酸钾的终浓度可以为200-800μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度可以为10-40μmol/L；优选地，氧嗪酸钾的终浓度为200μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度为10μmol/L。其中，可选地，所述疾病为急性高尿酸血症，氧嗪酸钾的终浓度为200-400μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度为10-20μmol/L。其中，可选地，进行所述造模处理的时间为12-48小时。其中，可选地，每升的所述斑马鱼的饲养水体中饲养的斑马鱼的数量为40-60尾。其中，可以将药物候选物在斑马鱼中的降尿酸效果与别嘌呤醇进行比较，也就是可以将别嘌呤醇作为治疗高尿酸血症的参考药物。以下通过实施例进一步详细说明本专利技术：实施例实验动物采用斑马鱼，品系为AB品系，购自中国科学院水生生物研究所；氧嗪酸钾和黄嘌呤钠盐购自Sigma公司。尿酸检测试剂盒购自Thermofisher公司。自受精卵开始，以40尾/20毫升的密度饲养于水中，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种生产高尿酸血症动物模型的方法，其特征在于，该方法包括：将斑马鱼进行尿酸氧化酶抑制处理。
【技术特征摘要】
1.一种生产高尿酸血症动物模型的方法，其特征在于，该方法包括：将斑马鱼进行尿酸氧化酶抑制处理。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述尿酸氧化酶抑制处理包括：在斑马鱼的饲养水体中添加氧嗪酸钾和黄嘌呤钠盐以进行造模处理。3.根据权利要求2所述的方法，其中，在斑马鱼受精卵发育后的第3-8天起，进行所述造模处理；优选在斑马鱼受精卵发育后的第5-8天起，进行所述造模处理，更优选在斑马鱼受精卵发育后的第5天起，进行所述造模处理。4.根据权利要求2所述的方法，其中，氧嗪酸钾的终浓度为200-800μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度为10-40μmol/L；优选地，所述疾病为急性高尿酸血症，氧嗪酸钾的终浓度为200-400μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度为10-20μmol/L；更优选地，氧嗪酸钾的终浓度为200μmol/L，黄嘌呤钠盐的终浓度为10μmol/L。5.根据权利要求2-4中任意一项所述的方法，其中，进行所述造模处理的时间为12-48小时。6.根据权利要求2-4中任意一项所述的方法，其中，每20毫升的所述斑马鱼的饲养水体中饲养的斑马鱼的数量为4...
【专利技术属性】
技术研发人员：李琦，张瑛毓，王凤忠，王东晖，张丽静，李淑英，王艳，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
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