一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法技术

本发明专利技术涉及一种二抗染色方法，尤其涉及一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法。该方法包括以下步骤：S1、在组织切片中加入封阻液，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；S2、在组织切片中加入相应的一抗，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；S3、在组织切片中加入反应增强液；S4、在组织切片中加入聚合物二抗，与一抗特异性的结合；S5、在组织切片中加入DAB浓缩液和DAB buffer的混合液，DAB沉淀着色；S6、在组织切片中加入苏木素复染液，与染色质结合显蓝色。本发明专利技术优化了常规免疫组化实验中所需的试剂成分，提高了免疫组化的染色强度，降低了可能产生的非特异性染色背景，极大的提高了染色质量。

【技术实现步骤摘要】
一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法
本专利技术涉及一种二抗染色方法，尤其涉及一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法。
技术介绍
在临床病理诊断和形态学研究中，免疫组织化学(简称免疫组化)染色是一种很重要的技术和手段。免疫组化技术于上世纪70年代应用于病理诊断始，目前在全球病理界已经得到广泛应用，它已成为病理医生常规工作中不可缺少的部分。免疫组化技术拥有特异性、敏感性强及操作简便等优点，使得免疫组化技术在疾病诊断领域得到了广泛的推广和应用，特别是临床病理诊断和肿瘤转化诊断。免疫组化技术不仅能提高病理诊断的准确性，同时也渗透到了临床和基础学科，在探讨疾病的病因学、发病机制及科研工作中起到了不可估量的作用。免疫组化是利用抗原抗体的特异性结合，通过标记物的显色，来检测和定位组织或细胞中的抗原蛋白。在免疫组化实验中需要多种试剂配合使用，常规的免疫组化染色通常是通过手工操作进行，过程繁琐耗时又长，而且稳定性较差，重复性较低。手工染色所用试剂的灵敏度、亲和性、稳定性和质量都有所不足，这也导致了手工染色质量参差不齐，很难完全满足临床病理诊断的要求。而全自动免疫组化染色仪的出现极大的提高了染色效率，运行过程中无需人工干预，操作便捷。但是一般的免疫组化试剂仅适用于手工操作的染色要求，而无法应用于全自动免疫组化染色仪，使得染色灵敏度较低。
技术实现思路
本专利技术为解决上述技术问题，提供设计合理、显著提高染色效果的一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，包括以下步骤：S1、在组织切片中加入封阻液，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；S2、在组织切片中加入相应的一抗，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；S3、在组织切片中加入反应增强液；S4、在组织切片中加入聚合物二抗，与一抗特异性的结合；S5、在组织切片中加入DAB浓缩液和DABbuffer的混合液，DAB沉淀着色；S6、在组织切片中加入苏木素复染液，与染色质结合显蓝色。本专利技术优化了常规免疫组化实验中所需的试剂成分，提高了免疫组化的染色强度，降低了可能产生的非特异性染色背景，极大的提高了染色质量。进一步，所述封阻液为过氧化氢溶液，所述过氧化氢溶液的浓度为3％-4％。进一步，所述反应增强液为兔抗鼠IgG溶液，所述兔抗鼠IgG溶液的浓度为5～10μg/mL。进一步，所述DAB浓缩液为3，3-二氨基联苯胺四氯化氢溶液，所述3，3-二氨基联苯胺四氯化氢溶液的浓度为55～70mmol/L。进一步，所述DABBuffer为0.05～0.15％过氧化氢溶液。进一步，所述苏木素复染液的浓度为0.05～0.15％。更进一步，在步骤S1之前还包括步骤S0组织切片玻片的制作，步骤为：步骤一、烤片，烘干玻片上的水分；步骤二、脱蜡，溶解包埋组织的石蜡，使得组织切片完全暴露；步骤三、水化，酒精洗去脱蜡液，并使组织切片细胞内充满水；步骤四、抗原修复，在组织切片中加入抗原修复液，暴露抗原决定簇。更进一步，在步骤S6之后还包括步骤S7染色玻片的处理，包括以下步骤：步骤一、脱水，在染色玻片上先后分别加入80％酒精、90％酒精、95％酒精和100％酒精，进行梯度脱水；步骤二、透明，在染色玻片上加入脱蜡液；步骤三、封片，在染色玻片上加入中性树胶进行封片。本专利技术同现有技术相比具有以下优点及效果：1、本专利技术优化了常规免疫组化实验中所需的试剂成分，提高了免疫组化的染色强度，降低了可能产生的非特异性染色背景，极大的提高了染色质量；2、本专利技术包括了免疫组化染色的必要试剂，配套使用于全自动免疫组化染色仪，具有极高的灵敏度和亲和力；能够封闭内源性的过氧化物酶和非特异性的蛋白结合位点，减少了可能存在的染色背景，使背景着色更加清晰干净无杂质无残留，解决了长期以来影响染色质量的背景着色问题，能够完全满足仪器染色的病理诊断要求；3、本专利技术在不同组织不同抗体的仪器染色效果明显。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术试剂盛放装置的结构示意图。标号说明：1、试剂瓶，3、试剂瓶标签。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以下实施例是对本专利技术的解释而本专利技术并不局限于以下实施例。本专利技术中的全自动免疫组化染色仪属于现有技术，该全自动免疫组化染色仪适用于石蜡、冰冻、穿刺、细胞涂片、骨髓片等多种标本；全自动免疫组化染色仪上设置有控制软件，可编程百余种标准化免疫组化和快速特殊染色程序，且程序可根据要求随时更改、定制特性，在全自动免疫组化染色仪上设置合适的孵育时间即可完成免疫组化染色。全自动免疫组化染色仪的上市极大地提高了病理诊断的工作效率，完全代替了繁琐复杂耗时冗长的手工染色。另有试剂盛放装置与全自动免疫组化染色仪配合使用。实施例1：一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，包括以下方法：S1、在组织切片中加入封阻液150ul，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；S2、在组织切片中加入相应的一抗150ul，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；S3、在组织切片中加入反应增强液150ul；S4、在组织切片中加入聚合物二抗150ul，与一抗特异性的结合；S5、在组织切片中加入由7.5ul的DAB浓缩液和150ul的DABbuffer混合而成的的混合液，DAB沉淀着色；S6、在组织切片中加入苏木素复染液150ul，与染色质结合显蓝色。另一种方案，一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，包括以下方法：S1、在组织切片中加入封阻液100ul，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；S2、在组织切片中加入相应的一抗100ul，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；S3、在组织切片中加入反应增强液100ul；S4、在组织切片中加入聚合物二抗100ul，与一抗特异性的结合；S5、在组织切片中加入由5ul的DAB浓缩液和100ul的DABbuffer混合而成的的混合液，DAB沉淀着色；S6、在组织切片中加入苏木素复染液100ul，与染色质结合显蓝色。染色质是遗传物质的载体。染色质是指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构，是间期细胞遗传物质存在的形式。本专利技术中，封阻液用于封闭失活内源性的过氧化物酶。本专利技术中，聚合物二抗用于特异性的结合与抗原蛋白反应的一抗。本专利技术中，反应增强液用于增强聚合物二抗与一抗的结合能力，提高了二抗的结合数量，加大了抗原抗体的反应灵敏度，使某些低丰度的蛋白染色也能较为理想，颜色更加鲜亮，这解决了某些免疫组化试剂DAB着色偏暗，颜色不够鲜艳，对于低表达的蛋白染色偏浅，无法达到理想的染色效果。本专利技术中，DAB浓缩液用于HRP催化的目的蛋白的显色。DAB为Diaminobenzidine的缩写，中文名称为二氨基联苯胺，是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物，反应产物因不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物而被广泛地用于蛋白印迹(WesternBlot,WB)、免疫组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、在组织切片中加入封阻液，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；S2、在组织切片中加入相应的一抗，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；S3、在组织切片中加入反应增强液；S4、在组织切片中加入聚合物二抗，与一抗特异性的结合；S5、在组织切片中加入DAB浓缩液和DAB buffer的混合液，DAB沉淀着色；S6、在组织切片中加入苏木素复染液，与染色质结合显蓝色。

【技术特征摘要】
1.一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、在组织切片中加入封阻液，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；S2、在组织切片中加入相应的一抗，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；S3、在组织切片中加入反应增强液；S4、在组织切片中加入聚合物二抗，与一抗特异性的结合；S5、在组织切片中加入DAB浓缩液和DABbuffer的混合液，DAB沉淀着色；S6、在组织切片中加入苏木素复染液，与染色质结合显蓝色。2.根据权利要求1所述的一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，其特征在于，所述封阻液为过氧化氢溶液，所述过氧化氢溶液的浓度为3％-4％。3.根据权利要求1所述的一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，其特征在于，所述反应增强液为兔抗鼠IgG溶液，所述兔抗鼠IgG溶液的浓度为5～10μg/mL。4.根据权利要求1所述的一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，其特征在于，所述DAB浓缩液为3，3-二氨基联苯胺四氯化氢溶液，所述3，3-二氨基联苯胺四氯化氢溶液的浓度为55～70mmol/L。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁淦英，李思勇，余向东，
申请(专利权)人：杭州依美洛克医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33