检测冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统技术方案

本发明专利技术涉及检测冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统，所述系统在一次实验中实现对位于6p24.1区段的rs6903956位点；2p24.1区段的rs2123536位点；4q32.1区段的rs1842896位点；6p21.32区段的rs9268402位点；和12q21.33区段的rs7136259位点的检测。所描述的悬浮微珠阵列系统检测在一次实验中就可以完成5个位点的检测，有利于临床进行针对性的治疗；摊分到单个位点的检测上，试剂耗材的成本费用大幅度降低，因此可以降低医疗成本。

Suspension microsphere array system for detecting susceptibility gene loci of coronary heart disease

The present invention relates to a suspended microbead array system for detecting susceptible gene loci of coronary heart disease. The system can detect rs6903956 loci in 6p24.1, rs2123536 loci in 2p24.1, rs1842896 loci in 4q32.1, rs9268402 loci in 6p21.32, and rs7136259 loci in 12q21.33 in one experiment. Test. The suspended microbead array system described in this paper can detect five sites in one experiment, which is conducive to clinical targeted treatment. The cost of reagent consumables can be greatly reduced when the cost of reagent consumables is apportioned to a single site.

【技术实现步骤摘要】
检测冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统
本专利技术涉及一种检测冠心病易感基因位点的系统，特别涉及一种检测冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统。
技术介绍
先天性心脏病是由于心脏、血管在胚胎发育过程中发生障碍引起的心脏、血管形态、结构、功能上的异常，其发病率为0.8％，连续4年居我国出生缺陷之首。先天性心脏病患者通常需要接受长期的治疗，给患者、家庭乃至社会造成极大的经济负担和精神压力。大多数冠心病的原因是遗传因素和环境因素共同作用的结果。已有研究表明，某些基因单独发生突变可以导致不同类型的冠心病发生，这种突变往往发生频率极低，难以解释冠心病发病率高的现象。因此研究者开始关注频率较高的易感基因，这些基因的易感位点本身并不单纯致病；但当同时存在几个易感基因，以及在环境的影响下，多个易感基因位点共同作用而引发冠心病。随着人类基因组计划的实施，全基因组关联研究(GWAS)已经被广泛用于发现并鉴定与人类复杂疾病关联的遗传变异。近几年来，中国科学家利用GWAS在中国人群中发现了数个和冠心病发生相关的基因易感位点，包括位于6p24.1区段的rs6903956位点；2p24.1区段的rs2123536位点；4q32.1区段的rs1842896位点；6p21.32区段的rs9268402位点；12q21.33区段的rs7136259位点。通过检测这些冠心病相关的基因易感位点，对于判断冠心病患者的病因、预测患者的治疗疗效，以及预防下一代冠心病患儿的出生具有重要的应用价值。检测基因易感性位点的方法包括荧光定量PCR、飞行质谱法、基因芯片法、第一代和第二代测序法。针对本专利技术预检测的5个冠心病易感基因位点，我们选择了基因芯片技术中的悬浮微珠阵列技术来实施检测方案。悬浮微珠阵列在本检测上体现的优势包括：1.适合检测5-20个指标，能在一次实验中完成多指标的检测；2.实验流程简单，易于操作，一个工作日就可以完成检测；和3.液相芯片试剂大规模生产工艺简单，适合产业化。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供检测冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统，所述系统在一次实验中实现对位于6p24.1区段的rs6903956位点；2p24.1区段的rs2123536位点；4q32.1区段的rs1842896位点；6p21.32区段的rs9268402位点；和12q21.33区段的rs7136259位点的检测。在一种实施方式中，所述系统包括以下用于多重PCR扩增引物：在一种实施方式中，所述系统中对每个基因位点设计一条正常型探针和一条变异型探针，通过检测所述变异型探针和正常型探针的荧光强度比值判断各个突变位点的基因突变型。在一种实施方式中，所述系统包括以下探针序列：探针名称探针序列(5’-3’)序列号rs6903956-NagtgccataggttattacttaSEQIDNO:11rs6903956-MagtgccatagattattacttaSEQIDNO:12rs2123536-NtatgctgcgcgtgaaagacSEQIDNO:13rs2123536-MtatgctgcgtgtgaaagacSEQIDNO:14rs1842896-NcaccaaaatgcattcccttSEQIDNO:15rs1842896-McaccaaaattcattcccttSEQIDNO:16rs9268402-NtgaacatccagattgaagaSEQIDNO:17rs9268402-MtgaacatccggattgaagaSEQIDNO:18rs7136259-NctgtgtgaatctgcacaataaSEQIDNO:19rs7136259-MctgtgtgaatttgcacaataaSEQIDNO:20，其中rs6903956-N，rs2123536-N，rs1842896-N，rs9268402-N和rs7136259-N代表各个位点的正常型探针；rs6903956-M，rs2123536-M，rs1842896-M，rs9268402-M和rs7136259-M代表各个位点的变异型探针。在一种实施方式中，每个探针的5’端带C18-NH2修饰。本专利技术的检测冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统，在一次试验中可实现对位于6p24.1区段的rs6903956位点；2p24.1区段的rs2123536位点；4q32.1区段的rs1842896位点；6p21.32区段的rs9268402位点；12q21.33区段的rs7136259位点共计5个冠心病相关的基因易感位点的检测。所描述的悬浮微珠阵列系统检测在一次实验中就可以完成5个位点的检测，有利于临床进行针对性的治疗；摊分到单个位点的检测上，试剂耗材的成本费用大幅度降低，因此可以降低医疗成本。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。图1是经过优化后的多重PCR引物和探针，使得rs6903956位点上的三种基因型更容易被区分开结果图；图2是经过优化后的多重PCR引物和探针，使得rs2123536位点上的三种基因型更容易被区分开结果图；图3是经过优化后的多重PCR引物和探针，使得rs1842896位点上的三种基因型更容易被区分开结果图；图4是经过优化后的多重PCR引物和探针，使得rs9268402位点上的三种基因型更容易被区分开结果图；和图5是经过优化后的多重PCR引物和探针，使得rs7136259位点上的三种基因型更容易被区分开结果图。具体实施方式为了使本领域
人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合以下实施例对本专利技术作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。本专利技术通过设计检测冠心病易感基因位点的多重PCR扩增引物和探针。实施例一、冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统的构建一.多重PCR引物设计为了实现对5个冠心病易感基因位点的检测，一共需要进行5重PCR扩增。这5个冠心病基因易感位点对应的PCR引物序列见表1。表1.多重PCR引物序列二.探针设计本专利技术一共设计了10条探针，即每个基因位点设计一条正常型探针(N)和一条变异型探针(M)，10条探针序列如表2。表2.探针序列，其中rs6903956-N，rs2123536-N，rs1842896-N，rs9268402-N和rs7136259-N代表各个位点的正常型探针；rs6903956-M，rs2123536-M，rs1842896-M，rs9268402-M和rs7136259-M代表各个位点的变异型探针。3.悬浮微珠阵列的制备：将美国Luminex公司荧光编码微球与步骤(2)中所述的探针分别偶联，然后根据检测目的将偶联好探针的编码微球混合，得到悬浮微珠阵列。按照一万人份理论量计算，一种探针与一个编码的磁珠进行偶联，具体实验步骤为：A.从-20℃取出密封干燥保存的二氯乙烷(EDC)粉末，使其恢本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统，其特征在于，所述系统在一次实验中实现对位于6p24.1区段的rs6903956位点；2p24.1区段的rs2123536位点；4q32.1区段的rs1842896位点；6p21.32区段的rs9268402位点；和12q21.33区段的rs7136259位点的检测。

【技术特征摘要】
1.检测冠心病易感基因位点的悬浮微珠阵列系统，其特征在于，所述系统在一次实验中实现对位于6p24.1区段的rs6903956位点；2p24.1区段的rs2123536位点；4q32.1区段的rs1842896位点；6p21.32区段的rs9268402位点；和12q21.33区段的rs7136259位点的检测。2.根据权利要求1中所述的悬浮微珠阵列系统，其特征在于，所述系统包括用于以下多重PCR扩增引物：3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述系统中对每个基因位点设计一条正常型探针和一条变异型探针...

【专利技术属性】
技术研发人员：任建峰，黄姣，刘姣，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31