一株链霉菌属菌株及其产星孢菌素的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新的链霉菌菌株及其应用，该菌株命名为链霉菌(streptomyce sp.)HS‑HY‑153，其保藏编号为CGMCC NO.14806；同时公开了通过培养该菌株HS‑HY‑153制备星孢菌素(Staurosporine)的方法。

Application of a strain of Streptomyces and its production of styosporin

The present invention discloses a new streptomycete strain and its application. The strain is named streptomycete sp. (HS_HY_153) and its preservation number is CGMCC NO. 14806. Meanwhile, the method of preparing astrosporin by culturing the strain HS_HY_153 is also disclosed.

【技术实现步骤摘要】
一株链霉菌属菌株及其产星孢菌素的应用
本专利技术属于微生物工程
，尤其涉及一株链霉菌属菌株及其在制备星孢菌素中的应用。
技术介绍
星孢菌素(staurosporine，结构式如式1所示)，最初发现于Streptomycesstaurosporeus(AM-2282)菌株的发酵产物中，具有抗细菌，抗真菌，降血压，血小板凝聚，抗肿瘤以及神经保护等多种生物活性，尤其是作为蛋白激酶C的有效抑制剂，在治疗癌症方面极具研究开发的价值。2017年4月28日，FDA批准其半合成药物米哚妥林(Midostaurin，商品名为Rydapt，结构式如式2所示)与化疗疗法联合用于新确诊的急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia，AML)成年患者的治疗，适用于有特定基因突变FLT3的患者。同时，Rydapt被批准与伴随诊断试剂LeukoStratCDxFLT3MutationAssay一起使用，用来检测AML患者的FLT3突变。另外，除AML之外，Rydapt也被批准用于患有某些类型罕见血液障碍的成年患者的治疗，包括侵袭性系统性肥大细胞增生症(ASM)、伴有血液肿瘤的系统性肥大细胞增生症(SM-AHN)和肥大细胞白血病(MCL)。当前已报道的星孢菌素产生菌很多，US7608420B和EP0444503A公开了利用StreptomyceshygroscopicusC39280-450-9(ATCC53730)发酵制备星孢菌素，其发酵单位分别为392mg/L、130mg/L；US4107297公开了星孢菌素产生菌Streptomycessp.AM-2282(Streptomycesstaurosporeusnov.sp.NRRL11184)的形态学特征、培养特征和生理生化特征；盖翠娟等(中国抗生素杂志，2015，40(5)：325-329)对海洋链霉菌Streptomycessp.YB-24进行了诱变育种，使得生产星孢菌素发酵单位为3.833mg/L；庄以彬等(中国海洋药物，2011，30(2)：29-33)以海洋链霉菌Streptomycesfradiae007、StreptomycesarenaeZ4007和StreptomycesrubrolavendulaeTHW-12为出发菌株进行复合诱变选育，其发酵单位较低，为9.06ug/mL；Byung-YongKim等(InternationalJournalofSystematicandEvolutionaryMicrobiology，2012，62：966-970)发表了星孢菌素产生菌Streptomycesstaurosporininussp.nov.，对其进行了形态学、生理生化、分子生物学的鉴定，但并未发表其发酵生产工艺和发酵单位。蒲小明等(微生物学通报，2009，36(11)：1631-1637)通过对海洋放线菌H41-38进行了发酵工艺优化，使得星孢菌素的发酵单位达到286.44ug/mL。综上所述，公开的专利及文献中星孢菌素的生产菌虽然较多，但菌株比较原始，发酵单位水平低，不适合产业化。因此寻找一种新的、高效的星孢菌素的生产菌株的工作仍在继续进行中。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种新的链霉菌(Streptomycesp.)HS-HY-153，具有产生星孢菌素的能力，其保藏编号为CGMCCNO.14806。本专利技术的目的还在于提供了一种新的链霉菌HS-HY-153(CGMCCNO.14806)在制备星孢菌素或含有星孢菌素的药物组合物中的应用。本专利技术还提供了一种星孢菌素的制备方法。该方法包括采用链霉菌HS-HY-153(CGMCCNO.14806)在含有可同化的碳源和/或氮源的营养培养基里进行有氧发酵的过程。在优选的实施方案中，所述可同化的碳源选自玉米淀粉、玉米可溶性淀粉、麦芽糊精、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、甘油、麦芽糖、乳糖、半乳糖、木聚糖、工业糖蜜、豆油、油酸甲酯之一或者上述物质的组合。在优选的实施方案中，所述可同化的氮源选自牛肉抽提粉、牛肉浸膏、酵母浸膏、酵母抽提物、麦芽抽提粉、酵母粉、蛋白胨、麸质粉、小麦麸、小麦胚芽片、棉籽饼粉、棉籽精粉、花生饼粉、黄豆饼粉、小麦胚芽粉、大豆粉、鱼粉、玉米浆干粉、玉米粉、尿素、铵盐、硝酸盐之一或者上述物质的组合。在优选的实施方案中，所述营养培养基还包括无机盐，所述无机盐选自硫酸锌、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、磷酸氢二铵、氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钴、钼酸钠、柠檬酸三钠、碳酸钙、氯化钙之一或者上述物质的组合。在优选的实施方案中，所述营养培养基含有葡萄糖0～30.0g/L、甘油5.0～90.0g/L、花生饼粉5.0～60.0g/L、酵母粉3.0～20.0g/L、黄豆饼粉0～40.0g/L，小麦胚芽片0～30.0g/L、大豆粉0～40.0g/L、硫酸镁0～5.0g/L、碳酸钙1.0～5.0g/L、硫酸亚铁0～5.0×10-2g/L、硫酸锌0～5.0×10-5g/L、硫酸锰0～2.0×10-4g/L、氯化钴0～5.0×10-5g/L、钼酸钠0～2.0×10-4g/L。在优选的实施方案中，所述有氧发酵的温度为20℃-30℃，优选24℃-28℃；培养基pH为6.0-8.0，优选7.0-7.8；培养时间为24-300小时，优选120-168小时。在优选的实施方案中，所述链霉菌HS-HY-153是通过种子液接种至所述营养培养基中进行所述发酵培养的；其中所述种子液是将链霉菌HS-HY-153在种子培养基里进行种子培养得到的；所述种子培养的条件为：种子培养的温度为20℃-30℃，优选24℃-28℃；培养基pH为6.0-8.0，优选6.5-7.8；培养时间为17-80小时，优选19-72小时。在优选的实施方案中，所述的种子培养基含有玉米淀粉2.0～40.0g/L、葡萄糖0～20.0g/L、麦芽糊精0～10.0g/L、甘油5.0～50.0g/L、花生饼粉5.0～40.0g/L、酵母粉5.0～20.0g/L、黄豆饼粉0～10.0g/L，碳酸钙1.0～4.0g/L。本专利技术星孢菌素可通过以下条件进行HPLC检测：色谱柱：C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇:水:氨水＝85:15:0.1(v/v/v)；进样量：20uL；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；本专利技术链霉菌HS-HY-153(CGMCCNO.14806)的微生物菌种于2017年10月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，其保藏编号为CGMCCNO.14806，分类命名为链霉菌streptomycesp.，并登记入册，证明存活。本专利技术链霉菌HS-HY-153(CGMCCNO.14806)主要生物学特征为：菌落形态圆整，表面凸起，菌落直径大小约5～7mm，菌落表面光滑，有沟纹，中间偶稍凹陷，基质菌丝发达，与培养基结合紧密，不易挑起，颜色呈无色、米色或淡黄色，气生菌丝白色，产孢丰富，前期青色，后期转深青色、青灰色、玛瑙灰，无可溶性色素。本专利技术菌株HS-HY-153生产能力高；且其产生星孢菌素的能力比现有技术中其他菌种有了大幅度的提高，有利于实现本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种链霉菌(Streptomyce sp.)HS‑HY‑153，其保藏编号为CGMCC NO.14806。

【技术特征摘要】
1.一种链霉菌(Streptomycesp.)HS-HY-153，其保藏编号为CGMCCNO.14806。2.根据权利要求1所述的链霉菌HS-HY-153在制备星孢菌素或者含有星孢菌素的药物组合物中的应用。3.一种星孢菌素的制备方法，其特征在于：包括采用如权利要求1所述的链霉菌HS-HY-153在含有可同化的碳源和/或氮源的营养培养基里进行有氧发酵的过程。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述可同化的碳源选自玉米淀粉、玉米可溶性淀粉、麦芽糊精、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、甘油、麦芽糖、乳糖、半乳糖、木聚糖、工业糖蜜、豆油、油酸甲酯之一或者上述物质的组合。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述可同化的氮源选自牛肉抽提粉、牛肉浸膏、酵母浸膏、酵母抽提物、麦芽抽提粉、酵母粉、蛋白胨、麸质粉、小麦麸、小麦胚芽片、棉籽饼粉、棉籽精粉、花生饼粉、黄豆饼粉、小麦胚芽粉、大豆粉、鱼粉、玉米浆干粉、玉米粉、尿素、铵盐、硝酸盐之一或者上述物质的组合。6.根据权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于：所述营养培养基还包括无机盐，所述无机盐选自硫酸锌、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、磷酸氢二铵、氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钴、钼酸钠、柠檬酸三钠、碳酸钙、氯化钙之一或者上述物质的组合。7.根据权利要求3-6任一项所述的方法，其特征在于：所述营养培养基含有葡萄糖0～30.0g/L、甘油5.0～90.0g/L、花生饼粉5.0～60....

【专利技术属性】
技术研发人员：方佳双，张辉，项仁鑫，邓爱文，王微芬，姜南，应灵萍，王继栋，滕云，
申请(专利权)人：浙江海正药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33