一种具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌制造技术

一种具有Keap1‑Nrf2通路抑制活性的海洋真菌，所述海洋真菌的种子液接种到发酵培养基中液体培养，每升培养基接种干重0.22±0.05g的海洋真菌菌体；调节发酵培养基的pH值：发酵初始时调节培养基的pH5.8—6.4，得到海洋真菌的发酵液；将发酵液中的海洋真菌细胞进行修饰Keap1的半胱氨酸残基，使Nrf2在细胞核内积聚，并且表达Nrf2的靶基因，筛选后得到具有Keap1‑Nrf2通路抑制活性的海洋真菌；在正常条件下，Nrf2与Keap1结合，存在于细胞之中，发生氧化应激时，Keap1的半胱氨酸残基被修饰，改变构象导致Nrf2释放出来，进入细胞核中，与ARE结合后，促进靶基因的表达；它具有可为后续抗肿瘤药物的研究提供微生物资源等特点。

Marine fungus with Keap1-Nrf2 pathway inhibitory activity

A marine fungus with inhibitory activity of Keap 1 Nrf 2 pathway is inoculated with seed liquid of the marine fungus into a fermentation medium for liquid culture, and inoculated with marine fungus with dry weight of 0.22 0.05g per liter of medium; and the pH value of the fermentation medium is regulated as follows: the pH of the medium is adjusted from 5.8 to 6.4 at the beginning of fermentation, and the hair of the marine fungus is obtained. Fermentation broth was used to modify the cysteine residue of Keap1, which made Nrf2 accumulate in the nucleus and expressed the target gene of Nrf2. After screening, the marine fungi with the inhibitory activity of Keap1 Nrf2 pathway were obtained. Under normal conditions, Nrf2 binds to Keap1 and exists in the cell and oxidizes. When stimulated, the cysteine residue of Keap1 is modified, and the conformation changes lead to the release of Nrf2 into the nucleus, which binds to ARE and promotes the expression of target genes.

【技术实现步骤摘要】
一种具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌
本专利技术涉及的是一种具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌。
技术介绍
癌症发生以后Keap1-Nrf2通路的高表达或过度积累会降低化疗或放疗引起的过度氧化应激对肿瘤细胞的伤害，帮助其抵抗化学药物或放射治疗，有利于肿瘤细胞的存活并促进其生长。此外，在肿瘤发生之后或在恶性肿瘤中Nrf2的过度激活会引起肿瘤细胞对化疗或放射疗法的抵抗和耐受性、导致患者预后不良。由此看来，肿瘤一旦发生，Nrf2因子在细胞内积累，不但不利于肿瘤的预防，反而会增强肿瘤细胞的耐药性并促进其生长，不利于肿瘤的治疗和患者的康复。因此，发现具有Keap1-Nrf2-ARE通路抑制作用的微生物，可为后续抗肿瘤药物的研究提供资源。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种可为后续抗肿瘤药物的研究提供微生物资源的具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌。本专利技术的目的是通过如下技术方案来完成的，一种具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌，所述海洋真菌的种子液接种到发酵培养基中液体培养，每升培养基接种干重0.22±0.05g的海洋真菌菌体；调节发酵培养基的pH值：发酵初始时调节培养基的pH5.8—6.4，得到海洋真菌的发酵液；将发酵液中的海洋真菌细胞进行修饰Keap1的半胱氨酸残基，使Nrf2在细胞核内积聚，并且表达Nrf2的靶基因，筛选后得到具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌。作为优选：在正常条件下，Nrf2与Keap1结合，存在于细胞之中，发生氧化应激时，Keap1的半胱氨酸残基被修饰，改变构象导致Nrf2释放出来，进入细胞核中，与ARE结合后，促进靶基因的表达；所述的海洋真菌选择一株——链格孢属（Alternariasp.）MNP801，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCCNo:M2012288，保藏日期2012年7月18日。所述的发酵培养基组成为：麦芽浸粉3.0—7.0g/L，麦芽糖1.5—2.0g/L，葡萄糖3.0—7.0g/L，酵母浸粉0.8—1.5g/L，溶剂为水。作为优选：所述发酵培养基的发酵培养中，培养温度26—30℃，发酵罐装液量是罐体容量的60-80%；和/或发酵过程中维持发酵罐的罐内压力为0.01～0.04Mpa；发酵罐中装备1-3层搅拌桨，搅拌转速80～500r/min；发酵罐中初始通气量为0.3-0.6vvm，发酵过程的最低溶氧不低于30%。本专利技术具有可为后续抗肿瘤药物的研究提供微生物资源等特点。具体实施方式下面将结合具体实施例对本专利技术作详细的介绍：本专利技术所述的一种具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌，其特征在于所述海洋真菌的种子液接种到发酵培养基中液体培养，每升培养基接种干重0.22±0.05g的海洋真菌菌体；调节发酵培养基的pH值：发酵初始时调节培养基的pH5.8—6.4，得到海洋真菌的发酵液；将发酵液中的海洋真菌细胞进行修饰Keap1的半胱氨酸残基，使Nrf2在细胞核内积聚，并且表达Nrf2的靶基因，筛选后得到具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌。作为优选的实施例：在正常条件下，Nrf2与Keap1结合，存在于细胞之中，发生氧化应激时，Keap1的半胱氨酸残基被修饰，改变构象导致Nrf2释放出来，进入细胞核中，与ARE结合后，促进靶基因的表达；所述的海洋真菌选择一株——链格孢属（Alternariasp.）MNP801，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCCNo:M2012288，保藏日期2012年7月18日。所述的发酵培养基组成为：麦芽浸粉3.0—7.0g/L，麦芽糖1.5—2.0g/L，葡萄糖3.0—7.0g/L，酵母浸粉0.8—1.5g/L，溶剂为水。作为进一步优选的实施例：所述发酵培养基的发酵培养中，培养温度26—30℃，发酵罐装液量是罐体容量的60-80%；和/或发酵过程中维持发酵罐的罐内压力为0.01～0.04Mpa；发酵罐中装备1-3层搅拌桨，搅拌转速80～500r/min；发酵罐中初始通气量为0.3-0.6vvm，发酵过程的最低溶氧不低于30%。本专利技术的其它实施例可以在上述公开的实施例基础上，通过数值和特征的简单替换，可以获得无数个实施例，且本领域技术人员在了解本
技术实现思路
的基础上，可以方便地实施本专利技术，并不需要做出任何创造性劳动。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有Keap1‑Nrf2通路抑制活性的海洋真菌，其特征在于所述海洋真菌的种子液接种到发酵培养基中液体培养，每升培养基接种干重0.22±0.05g 的海洋真菌菌体；调节发酵培养基的pH值：发酵初始时调节培养基的pH5.8—6.4，得到海洋真菌的发酵液；将发酵液中的海洋真菌细胞进行修饰Keap1的半胱氨酸残基，使Nrf2在细胞核内积聚，并且表达Nrf2的靶基因，筛选后得到具有Keap1‑Nrf2通路抑制活性的海洋真菌。

【技术特征摘要】
1.一种具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌，其特征在于所述海洋真菌的种子液接种到发酵培养基中液体培养，每升培养基接种干重0.22±0.05g的海洋真菌菌体；调节发酵培养基的pH值：发酵初始时调节培养基的pH5.8—6.4，得到海洋真菌的发酵液；将发酵液中的海洋真菌细胞进行修饰Keap1的半胱氨酸残基，使Nrf2在细胞核内积聚，并且表达Nrf2的靶基因，筛选后得到具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌。2.根据权利要求1所述的具有Keap1-Nrf2通路抑制活性的海洋真菌，其特征在于：在正常条件下，Nrf2与Keap1结合，存在于细胞之中，发生氧化应激时，Keap1的半胱氨酸残基被修饰，改变构象导致Nrf2释放出来，进入细胞核中，与ARE结合后，促进靶基因的表达；所述的海洋真菌选择一株——链格孢...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙坤来，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33