一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法技术

本发明专利技术属公开了一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法，主要包括β‑环糊精水溶液提取，树脂吸附，酸水解，乙酸乙酯萃取和重结晶等步骤。通过本方法可将土茯苓中落新妇苷转化为花旗松素，经分离纯化后花旗松素纯度大于98％，得率为0.35％。

A method for preparing high purity of Douglas pine by using Smilax glabra as raw material

The invention discloses a method for preparing high-purity Citisone from Poria cocos, which mainly comprises the steps of extracting aqueous solution of beta-cyclodextrin, resin adsorption, acid hydrolysis, ethyl acetate extraction and recrystallization. By this method, the content of Asiaticoside in Poria cocos was converted into Citisonin. After purification, the purity of Citisonin was more than 98%, and the yield was 0.35%.

【技术实现步骤摘要】
一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法
本专利技术涉及一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法，属医药领域。
技术介绍
花旗松素，又名二氢槲皮素、黄杉素、紫杉叶素，是一种二氢黄酮醇。研究表明花旗松素有多种显著的药理活性，如具有非常强的抗氧化活性，能保护红细胞避免氧化导致的溶血；有降“三高”作用，可以用于心血管疾病和糖尿病的治疗；花旗松素还具有抗菌、抗病毒、抗辐射、抗突变、抗肿瘤等作用。此外，花旗松素无任何毒副作用，是食品、药品、保健品生产的珍贵原料。俄罗斯已开发出以花旗松素和维生素C为主要功能成分的新药Ascovertin，并用于心血管疾病的治疗。花旗松素在紫杉、黄杉、落叶松等松科植物中含量较高，但这些植物资源在我国较为稀少和匮乏。因为原料和生产工艺问题，俄罗斯是目前花旗松素的主要生产和产品开发国家。因此，市场上高纯度花旗松素价格非常昂贵。土茯苓是我国的常用中药，其主要功效成分为黄酮“落新妇苷”,《中国药典》要求其在土茯苓中的含量>0.45％。落新妇苷是花旗松素的鼠李糖苷，在一定条件下可以水解生成花旗松素。我们通过实验优化了土茯苓中落新妇苷的水解条件，并建立了水解液中花旗松素的分离纯化方法。本专利技术方法可以土茯苓为原料大量制备高纯度花旗松素，拓展了土茯苓的用途，并为后续花旗松素产品的开发奠定了基础。
技术实现思路
本专利技术在于提供一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法。本专利技术方法是通过以下步骤来实现的：(1)土茯苓粉碎后过40目筛，按1公斤土茯苓加入10L质量浓度为0.25～1％β-环糊精水溶液(m/v)，在20-40℃条件下搅拌提取30min，经常规过滤获得提取液；将料渣进行二次提取，合并提取液；(2)将步骤(1)所得提取液流过H103大孔树脂床，进行吸附操作；(3)用50～90％乙醇进行洗脱操作，收集洗脱液，真空浓缩回收乙醇后得到解吸液；(4)往步骤(3)所得解吸液中加HCl至浓度为0.25～2mol/L，并在60～80℃水浴条件下酸解0.5～4h；(5)酸解液放凉至室温后，用NaOH调节pH至1～5，用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯，真空浓缩至干。贴壁残渣用少量热乙醇溶解后，放置于4℃冰箱中结晶48h。收集结晶干燥后得到纯度为98％的花旗松素。为了达到更好的技术效果：作为优选，步骤(1)所述β-环糊精水溶液的浓度为0.5％(m/v)。作为优选，步骤(2)所述H103大孔树脂床体积为1000ml，柱床高度为80cm，吸附流速为40ml/min。作为优选，步骤(3)所述洗脱溶剂为75％乙醇，洗脱体积为3倍柱体积，洗脱流速为20ml/min。作为优选，步骤(4)所述HCl浓度为1mol/L，水解温度为80℃，水解时间为1h。作为优选，步骤(5)所述pH值为2。在以上技术方案中，所述土茯苓是名称为土茯苓的中药材，其本质为百合科植物光叶菝葜的干燥根茎。所述筛过物是指利用筛网筛分后，粒径较小因而通过筛网的部分。本专利技术提供了一种以土茯苓为原料制备花旗松素的方法。土茯苓中几乎不含天然花旗松素，但富含其鼠李糖苷化合物“落新妇苷”。在这种情况下，本专利技术通过酸水解将落新妇苷转化为花旗松素，并设计了前端的浸提条件以及后续的纯化方法。本专利技术的有益效果(1)提取花旗松素的常用原料为落叶松，其生长受环境影响，主要在我国东北和俄罗斯分布，并且生长周期非常长，我国资源短缺。而土茯苓是一种常见中药，资源非常丰富。(2)在提取步骤中，用β-环糊精水溶液代替常用的乙醇溶液，在保证落新妇苷提取效率的同时，实现了绿色提取；并且提取液直接上柱，无需浓缩回收乙醇，节约了能源；(3)H103树脂具有突出的吸附落新妇苷效果，通过H103树脂柱对土茯苓提取液进行浓缩和纯化，减少了后续酸解时盐酸用量和能量消耗。(4)优化了酸解条件中盐酸浓度、水解温度、及水解时间，让落新妇苷水解完全，同时尽量避免其结构被破坏分解，提高花旗松素产率。(5)通过用NaOH调节酸解液pH值，可以增加乙酸乙酯萃取对花旗松素的选择性，去除部分杂质，再通过重结晶即可获得花旗松素纯品。附图说明图1为土茯苓提取液酸水解前(a)和酸水解后(b)的高效液相液色谱图，图中：1号峰为落新妇苷；2号峰为花旗松素。图2是本专利技术具体实施方式中，花旗松素产物的高效液相液色谱图。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。实施例1(1)取1kg土茯苓粉碎过后40目筛，加入10L的0.5％β-环糊精水溶液，在室温下搅拌提取30min，经200目的滤布过滤后得到提取液。将滤渣进行二次提取，合并滤液，即得土茯苓提取液。经高效液相色谱法测定，提取液中总共含有落新妇苷20.6g(图1a)。(2)H103树脂经常规净化操作后，装入内径为4cm的树脂柱，树脂柱床高为80cm，柱床体积为1000mL。(3)以40ml/min的流速使土茯苓提取液流过树脂柱，进行吸附操作。(4)吸附操作结束后，用3L75％的乙醇溶液以20ml/min的流速对树脂吸附的黄酮进行洗脱；收集洗脱液，60℃减压回收乙醇后得到约500ml浓缩液。(5)往浓缩液中加浓盐酸，盐酸最终浓度为1mol/L，并在80℃水浴条件下酸解60min。经高效液相色谱法测定，水解液中共含有花旗松素10.6g，而落新妇苷含量为0(图1b)。(6)酸解结束后，将酸解液放凉至室温，用NaOH调节pH至2，用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯，60℃减压浓缩至干。贴壁残渣用50ml热乙醇溶解后，放置于4℃冰箱中结晶48h。收集结晶并干燥得到3.5g产物；经HPLC分析产物中花旗松素纯度为98.6％。对比例1取与实施例1同一批1kg土茯苓粉碎过后40目筛，加入10L的0.25％β-环糊精水溶液，吸附树脂采用的是D101树脂，其余同实施例1。收集结晶干燥得到2.8g产物，经过HPLC分析产物中花旗松素纯度为96.2％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法，其特征在于：依照以下步骤：(1)土茯苓粉碎后过40目筛，按1公斤土茯苓加入10L质量浓度为0.25～1％β‑环糊精水溶液(m/v)，在20‑40℃条件下搅拌提取30min，经常规过滤获得提取液；将料渣进行二次提取，合并提取液；(2)将步骤(1)所得提取液流过H103大孔树脂床，进行吸附操作；(3)用50～90％乙醇进行洗脱操作，收集洗脱液，真空浓缩回收乙醇后得到解吸液；(4)往步骤(3)所得解吸液中加HCl至浓度为0.25～2mol/L，并在60～80℃水浴条件下酸解0.5～4h；(5)酸解液放凉至室温后，用NaOH调节pH至1～5，用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯，真空浓缩至干。贴壁残渣用少量热乙醇溶解后，放置于4℃冰箱中结晶48h，收集结晶干燥后得到纯度为98％的花旗松素。

【技术特征摘要】
1.一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法，其特征在于：依照以下步骤：(1)土茯苓粉碎后过40目筛，按1公斤土茯苓加入10L质量浓度为0.25～1％β-环糊精水溶液(m/v)，在20-40℃条件下搅拌提取30min，经常规过滤获得提取液；将料渣进行二次提取，合并提取液；(2)将步骤(1)所得提取液流过H103大孔树脂床，进行吸附操作；(3)用50～90％乙醇进行洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张清峰，冯峰，郑丹，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西,36