一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法技术

本发明专利技术公开了一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚的方法，属于植物化学成分分离技术领域。方法包括如下步骤：利用乙醇‑酸水溶液回流提取柽柳枝叶、花或果实，合并提取液并浓缩至无醇味得提取物酸水溶液；该酸水溶液通过大孔吸附树脂柱，以蒸馏水和不同体积分数的乙醇进行梯度洗脱，收集洗脱液并浓缩至干得树脂纯化物；树脂纯化物使用硅胶柱色谱进行分离，以石油醚‑丙酮为洗脱剂进行梯度洗脱，合并相同流份，经重结晶后得到纯度均大于97％的山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚。本方法结合大孔树脂和硅胶柱色谱同时分离了高纯度的山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚，操作步骤少、快速、简便易行、成本低，适合工业化生产。

A method for isolation and isolation of kaempferol and quercetin -3 ', 4' - two methyl ether from Tamarix chinensis

The invention discloses a method for extracting and separating kaempferol and quercetin_3', 4'dimethyl ether from Tamarix chinensis, belonging to the technical field of separating plant chemical components. The method comprises the following steps: extracting the leaves, flowers or fruits of Tamarix chinensis by refluxing Ethanol-Acetic acid aqueous solution, combining the extracts and concentrating them into an alcohol-free aqueous extract, which is gradiently eluted by macroporous adsorption resin column with distilled water and different volume fractions of ethanol, and collecting the eluent and concentrating it until dry. The purified resin was separated by silica gel column chromatography. Petroleum ether acetone was used as eluent for gradient elution. The purity of kaempferol and quercetin 3', 4'dimethyl ether were obtained after recrystallization. This method combined with macroporous resin and silica gel column chromatographic separation of high purity of kaempferol and quercetin 3', 4'dimethyl ether, the operation steps are less, fast, simple, low cost, suitable for industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法
本专利技术属于植物化学成分分离
，具体涉及一种从柽柳中分离山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法。
技术介绍
柽柳(TamarixchinensisLour)为柽柳科柽柳属植物，是一种典型的耐盐药用植物。柽柳嫩枝叶为一味传统的中药，又称西河柳，中国药典记载其具有发表透疹，祛风除湿等功效，可用于治疗麻疹不透、风湿痹痛等症。柽柳中含有多种黄酮化合物，包括山奈甲黄素、槲皮素-3′，4′-二甲醚、柽柳素、槲皮素、山奈酚、芹菜素、鼠李柠檬素、山奈酚-4′,7-二甲醚、芦丁、柽柳素-7-O-β-D-葡萄糖苷等。山奈甲黄素又名山奈素，是一种游离黄酮化合物，在柽柳、沙姜、槐角、金钱草、天山花楸叶等多种植物中均有分布，常被用作中药制剂的含量测定指标。研究表明，山奈甲黄素具有显著的抗肿瘤活性，如能抑制胃癌细胞增殖转移、诱导胃癌细胞凋亡等。另外，山奈甲黄素还具有抗氧化、抗炎、止咳祛痰、降压等多种药理活性。槲皮素-3′，4′-二甲醚也为一种游离黄酮化合物，在柽柳、五层龙及滇桂艾纳香等植物中有分布，具有抗炎活性。因此，制备高纯度的山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚用作药理活性研究及中药质量控制的标准品是非常有必要的。尽管目前已发现多种植物中含有山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚，但由于含量低或分离工艺难度大等方面的问题，适合分离高纯度山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的工业化方法至今还研究较少。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术旨在提供一种从柽柳中同时分离高纯度山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法。该方法简便有效、步骤少、周期短、成本低、提取效率高，适合工业化生产。本专利技术包括以下具体步骤：1.柽柳原料干燥粉碎后，加入乙醇-酸水溶液室温下浸泡24h，使用回流法进行提取，提取完毕，回收溶剂至无醇味，得提取物酸水溶液；2.所得提取物酸水溶液上样到大孔树脂柱，依次用蒸馏水和不同体积分数的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏回收溶剂至干得树脂纯化物；3.将树脂纯化物上样到硅胶柱，用石油醚-丙酮进行梯度洗脱，经TLC分析，分别收集含有山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的流份，经重结晶后得山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚。所述的步骤1中，柽柳原料为柽柳枝叶、柽柳花和柽柳果实中的一种。所述的步骤1中，乙醇-酸水溶液为体积分数60％-80％的乙醇(含盐酸、甲酸和三氟乙酸中的任一种，酸的质量分数为0.2％-0.5％)，回流法提取溶剂用量料液比为1：6-1：12，提取温度为70-90℃，提取时间为0.5-2h；提取次数为1-3次。所述的步骤2中，使用的大孔树脂为HPD-300树脂、HPD-400树脂和D101树脂中的任一种，上样流速为2-4BV/h，上样体积为5-10BV。所述的步骤2中，洗脱方式为使用蒸馏水、30％、70％和90％乙醇梯度洗脱，用量分别为5-8BV，洗脱流速为2-4BV/h，收集70％和90％乙醇洗脱物，减压蒸馏回收溶剂至干得树脂纯化物。所述的步骤3中，柱层析硅胶为200-300目，硅胶用量为树脂纯化物重量的10-40倍，所述的洗脱剂石油醚-丙酮体积比为5:1(用量为8-10BV)和3:1(用量为8-10BV)。本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术所用原料为柽柳的枝叶、花或果实，来源丰富，均为可再生的原料。可以在不影响植物生态平衡的基础上，对柽柳植物资源进行有效利用。(2)本专利技术创造性地在提取步骤中使用了乙醇-酸水溶液为提取溶剂的提取方法；本专利技术创造性地使用了大孔树脂与硅胶柱色谱结合的方式进行纯化，实现了山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的同步分离，所得到的山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚纯度高，纯度均达97％以上。(3)本专利技术建立的分离方法步骤少、高效快速、简便易行，成本低，适合山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的工业化生产。附图说明图1为柽柳枝叶提取物酸水溶液(A)、70％(B)和90％乙醇(C)洗脱产物的HPLC色谱图图2为硅胶柱层析纯化后山奈甲黄素(A)和槲皮素-3′，4′-二甲醚(B)的HPLC色谱图图3为山奈甲黄素(A)和槲皮素-3′，4′-二甲醚(B)的结构具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不仅局限于下述的实施方式。实施例一：1.称取干燥粉碎后的柽柳枝叶200g，加入10倍量的体积分数为70％乙醇溶液(含质量分数为0.3％的盐酸)，室温浸泡24h，于85℃下加热回流提取2次，每次提取60min，提取完毕后抽滤，滤除药渣，合并两次提取液，减压蒸馏回收溶剂至无醇味，得柽柳枝叶提取物酸水溶液。2.柽柳枝叶提取物酸水溶液以2BV/h的流速上样到HPD-300大孔树脂柱上，上样体积为8BV。上样完成后，依次用蒸馏水(5BV)和30％乙醇(5BV)洗脱杂质，再使用70％乙醇(5BV)和90％乙醇(5BV)进行解吸。柽柳枝叶提取物酸水溶液、70％和90％乙醇洗脱产物的HPLC色谱图见图1，可以看出山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚主要集中在70％和90％乙醇洗脱产物中。合并70％和90％乙醇洗脱液，减压蒸馏浓缩至干得树脂纯化物。3.树脂纯化物用少量甲醇溶解后，加入等质量的200-300目的硅胶进行拌样，40℃烘干。称取树脂纯化产物质量25倍的200-300目柱层析硅胶，采用石油醚湿法装入玻璃色谱柱中，将拌干的样品装入色谱柱，分别使用10BV的石油醚-丙酮(5：1)和10BV的石油醚-丙酮(3：1)进行梯度洗脱，使用TLC检测，合并相同流份，经重结晶后得到山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚，两种化合物的色谱图和结构分别见图2和图3，纯度均达到97％。实施例二：1.称取干燥粉碎后的柽柳枝叶200g，加入8倍量的体积分数为80％乙醇溶液(含质量分数为0.3％的三氟乙酸)，室温浸泡24h，于80℃下加热回流提取2次，每次提取80min，提取完毕后抽滤，滤除药渣，合并两次提取液，减压蒸馏回收溶剂至无醇味，得柽柳枝叶提取物酸水溶液。2.柽柳枝叶提取物酸水溶液以4BV/h的流速上样到HPD-300大孔树脂柱上，上样体积为6BV。上样完成后，依次用蒸馏水(5BV)和30％乙醇(5BV)洗脱杂质，再使用70％乙醇(5BV)和90％乙醇(5BV)进行解吸。合并70％和90％乙醇洗脱液，减压蒸馏浓缩至干得树脂纯化物。3.树脂纯化物用少量甲醇溶解后，加入等质量的200-300目的硅胶进行拌样，40℃烘干。称取树脂纯化产物质量30倍的200-300目柱层析硅胶，采用石油醚湿法装入玻璃色谱柱中，将拌干的样品装入色谱柱，分别使用10BV的石油醚-丙酮(5：1)和10BV的石油醚-丙酮(3：1)进行梯度洗脱，使用TLC检测，合并相同流份，经重结晶后得到山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚，纯度均达到97％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)柽柳原料干燥粉碎后，加入乙醇‑酸水溶液室温下浸泡24h，使用回流法进行提取，提取完毕，回收溶剂至无醇味，得提取物酸水溶液；(2)所得提取物酸水溶液上样到大孔树脂柱，依次用蒸馏水和不同体积分数的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏回收溶剂至干得树脂纯化物；(3)将树脂纯化物上样到硅胶柱，用石油醚‑丙酮进行梯度洗脱，经TLC分析，分别收集含有山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚的流份，经重结晶后得山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚。

【技术特征摘要】
1.一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)柽柳原料干燥粉碎后，加入乙醇-酸水溶液室温下浸泡24h，使用回流法进行提取，提取完毕，回收溶剂至无醇味，得提取物酸水溶液；(2)所得提取物酸水溶液上样到大孔树脂柱，依次用蒸馏水和不同体积分数的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏回收溶剂至干得树脂纯化物；(3)将树脂纯化物上样到硅胶柱，用石油醚-丙酮进行梯度洗脱，经TLC分析，分别收集含有山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的流份，经重结晶后得山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚。2.根据权利要求1所述的一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法，其特征在于，步骤(1)中，所用柽柳原料包括柽柳枝叶、柽柳花和柽柳果实。3.根据权利要求1所述的一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法，其特征在于，步骤(1)中，所使用的乙醇-酸水溶液为体积分数60％-80％的乙醇(添加盐酸、甲酸和三氟乙酸中的任一种，酸的质量分数为0.2％-0.5％)。4.根据权利要求1所述的一种从柽柳中提取分离山奈...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洪娟，王春华，李园园，赵峰，
申请(专利权)人：滨州医学院，
类型：发明
国别省市：山东,37