一种预防猪链球菌感染的广谱多联亚单位疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种预防猪链球菌感染的疫苗。本发明专利技术提供的疫苗，其活性成分由成分甲、成分乙、成分丙、成分丁和成分戊组成；所述成分甲为分选酶或具有所述分选酶的融合蛋白；所述成分乙为SSPA或具有所述SSPA的融合蛋白；所述成分丙为MRP或具有所述MRP的融合蛋白；所述成分丁为SCPC或具有所述SCPC的融合蛋白；所述成分戊为SLY或具有所述SLY的融合蛋白；所述疫苗还包括免疫佐剂，所述免疫佐剂为粘膜免疫佐剂CpG或其他粘膜免疫佐剂。本发明专利技术提供的疫苗具有高效、广谱、和低价的优越性。同时本发明专利技术提供的疫苗采用粘膜免疫的途径，具有无组织损伤、无局部副作用和使用简便的特点，易于推广使用。

A broad spectrum multi unit vaccine against Streptococcus suis infection

The invention discloses a vaccine against Streptococcus suis infection. The active component of the vaccine is composed of component A, component B, component C, component D and component E; the component A is a sorting enzyme or a fusion protein with the sorting enzyme; the component B is a SSPA or a fusion protein with the SSPA; the component C is an MRP or a fusion protein with the MRP; The vaccine also includes an immune adjuvant, which is a mucosal immune adjuvant CpG or other mucosal immune adjuvant. The vaccine provided by the invention has the advantages of high efficiency, broad spectrum and low price. At the same time, the vaccine provided by the invention adopts the way of mucosal immunity, has the characteristics of no tissue damage, no local side effects and simple use, and is easy to be popularized and used.

【技术实现步骤摘要】
一种预防猪链球菌感染的广谱多联亚单位疫苗
本专利技术属于生物
，具体涉及一种预防猪链球菌感染的广谱多联亚单位疫苗。
技术介绍
猪链球菌(Streptococcussuis，S.suis)是引起猪链球菌病的病原菌，根据细菌表面荚膜多糖(CPS)可以将猪链球菌分为35个血清型(1-34和1/2)，其中猪链球菌2型(SS2)毒力最强，流行广。SS2是一种人畜共患病原体，能够引起猪脑膜炎、脑炎、肺炎、心内膜炎、多发性浆膜炎、关节炎、败血症和流产等疾病；人类感染SS2可导致脑膜炎、败血型休克、永久性耳聋和心内膜炎甚至死亡。猪链球菌病给世界各国的猪养殖、加工行业带来严重的经济损失，同时对与猪的养殖、加工密切接触的人员造成感染的风险，1998年及2005年在中国暴发了两次大规模人感染猪链球菌疫情，绝大多数病人表现链球菌毒性休克综合征，病程短，死亡率极高，严重危害生命健康。猪是猪链球菌的天然宿主，研究发现健康猪的上呼吸道如鼻腔和扁桃体携带不同血清型的猪链球菌。猪链球菌在猪之间的传播包括垂直传播和水平传播，垂直传播是指猪链球菌携带状态的母猪在产仔时通过生殖道传播，水平传播是指猪之间面对面的接触导致猪链球菌的传播。猪链球菌在人之间的传播主要是通过皮肤损伤和口服进入(食用受污染的猪肉产品)，脑膜炎和败血型休克是最常见的症状；目前没有发现猪链球菌在人上呼吸道的感染，但是不排除这种可能性。目前用于预防猪链球菌病的市售疫苗多为细菌减毒或灭活疫苗，其保护作用是基于抗体的体液免疫。虽然目前市售疫苗在一定程度降低了猪链球菌病的发病率，但是存在明显的弱点，如免疫引起的高水平的血清抗体不都是保护性抗体，而能够提供保护性抗体的抗原表达或暴露有限，不足以诱导和提供有效的保护效果。此外，现有研究结果证实单一猪链球菌亚单位成分不能对多种血清型猪链球菌提供全面有效的保护，市售疫苗只能对少数血清型猪链球菌提供交叉保护作用并且效果不佳。因此，迫切需要开发安全、有效、广谱的猪链球菌疫苗。粘膜系统遍布全身，包括呼吸系统、消化系统、泌尿系统、生殖系统或皮肤，粘膜免疫不仅能够诱导粘膜系统分泌型的IgA和系统性的IgG，还可以诱导能够提供交叉保护作用的Th17。通过粘膜免疫的方式，选择猪链球菌高度保守的保护性抗原免疫，在保证安全性的同时，可以提供对不同血清型猪链球菌有效的交叉保护作用。SrtA(SortaseA，分选酶A)是普遍存在于革兰氏阳性菌中的成分，其功能是介导细菌的毒力蛋白锚定在细菌表面，缺失分选酶A的细菌致病力显著降低。经粘膜途径免疫分选酶A能够诱导以Th17为主的免疫反应，在抗粘膜细菌感染中有重要作用。SSPA(surface-associatedsubtilisin-likeprotease，表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶)是猪链球菌表面的毒力蛋白，在所有的猪链球菌血清型中普遍存在，SSPA可以降解CCL5和IL-6来发挥其致病力，研究表明SSPA可诱导高水平的中和抗体并发挥很好的保护作用。MRP(Muramidase-releasedprotein，溶菌酶释放蛋白)是一种纤维蛋白原结合蛋白，其与人纤维蛋白原结合促进了猪链球菌对中性粒细胞的抗吞噬作用，同时与猪链球菌突破血脑屏障造成宿主脑膜炎有关。作为一种表面抗原，MRP抗原性强，能诱导高水平的中和抗体，粘膜免疫诱导产生Th17，提供有效的保护作用。SCPC(streptococcalchemokineprotease，链球菌趋化因子蛋白酶)是表达于各种血清型的猪链球菌株表面的保守蛋白，通过降解IL-8抑制中性粒细胞在感染部位的迁移，抑制宿主对猪链球菌的清除。已证明SCPC免疫诱导抗体产生，并对猪链球菌提供免疫保护。SLY(suilysin，溶血素)是猪链球菌分泌型的毒力蛋白，属于胆固醇依赖的细胞溶素家族，可以在包含胆固醇成分的细胞膜形成穿孔造成细胞裂解。另外可以激活血小板并发生血小板凝集，形成血栓。SLY在所有猪链球菌中普遍存在，免疫SLY可诱导抗体生成，对猪链球菌提供免疫保护。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种预防猪链球菌感染的疫苗。本专利技术提供的预防猪链球菌感染的疫苗的活性成分由成分甲、成分乙、成分丙、成分丁和成分戊组成；所述成分甲为分选酶A(SrtA)、具有所述分选酶A全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述分选酶A全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述分选酶A全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述分选酶A全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分乙为表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶(SSPA)、具有所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分丙为溶菌酶释放蛋白(MRP)、具有所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述溶菌酶释放蛋白全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分丁为链球菌趋化因子蛋白酶(SCPC)、具有所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分戊为溶血素(SLY)、具有所述溶血素全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述溶血素全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述溶血素全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述溶血素全长或部分编码基因的DNA表达载体。上述疫苗中，所述分选酶A为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由序列表中序列3自N末端第50至249位氨基酸残基组成的蛋白质；(a2)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性的由其衍生的蛋白质；(a3)与序列3自N末端第50至249位所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；所述具有所述分选酶A全长或部分氨基酸序列的融合蛋白为如下(a4)或(a5)或(a6)：(a4)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(a5)将(a4)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性的由其衍生的蛋白质；(a6)与序列3所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶为如下(b1)或(b2)或(b3)：(b1)由序列表中序列6自N末端第41至852位氨基酸残基组成的蛋白质；(b2)将(b1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性的由其衍生的蛋白质；(b3)与序列6自N末端第41至852位所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；所述具有所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列的融合蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗，其活性成分由成分甲、成分乙、成分丙、成分丁和成分戊组成；所述成分甲为分选酶A、具有所述分选酶A全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述分选酶A全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述分选酶A全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述分选酶A全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分乙为表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶、具有所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分丙为溶菌酶释放蛋白、具有所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述溶菌酶释放蛋白全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分丁为链球菌趋化因子蛋白酶、具有所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分戊为溶血素、具有所述溶血素全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述溶血素全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述溶血素全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述溶血素全长或部分编码基因的DNA表达载体。...

【技术特征摘要】
1.一种疫苗，其活性成分由成分甲、成分乙、成分丙、成分丁和成分戊组成；所述成分甲为分选酶A、具有所述分选酶A全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述分选酶A全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述分选酶A全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述分选酶A全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分乙为表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶、具有所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分丙为溶菌酶释放蛋白、具有所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述溶菌酶释放蛋白全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分丁为链球菌趋化因子蛋白酶、具有所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述链球菌趋化因子蛋白酶全长或部分编码基因的DNA表达载体；所述成分戊为溶血素、具有所述溶血素全长或部分氨基酸序列的融合蛋白、所述溶血素全长或部分氨基酸序列与佐剂蛋白共轭连接的蛋白、所述溶血素全长或部分氨基酸序列与多糖的连接复合物或携带所述溶血素全长或部分编码基因的DNA表达载体。2.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述分选酶A为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由序列表中序列3自N末端第50至249位氨基酸残基组成的蛋白质；(a2)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性的由其衍生的蛋白质；(a3)与序列3自N末端第50至249位所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；所述具有所述分选酶A全长或部分氨基酸序列的融合蛋白为如下(a4)或(a5)或(a6)：(a4)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(a5)将(a4)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性的由其衍生的蛋白质；(a6)与序列3所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶为如下(b1)或(b2)或(b3)：(b1)由序列表中序列6自N末端第41至852位氨基酸残基组成的蛋白质；(b2)将(b1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性的由其衍生的蛋白质；(b3)与序列6自N末端第41至852位所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；所述具有所述表面相关枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶全长或部分氨基酸序列的融合蛋白为如下(b4)或(b5)或(b6)：(b4)由序列表中序列6所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b5)将(b4)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性的由其衍生的蛋白质；(b6)与序列6所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；所述溶菌酶释放蛋白为如下(c1)或(c2)或(c3)：(c1)由序列表中序列9自N末端第283至721位氨基酸残基组成的蛋白质；(c2)将(c1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性的由其衍生的蛋白质；(c3)与序列9自N末端第283至721位所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；所述具有所述溶菌酶释放蛋白全长或部分氨基酸序列的融合蛋白为如下(c4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王北难，邢新新，毕帅，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11