一株诱导大豆产生大豆抗毒素的解淀粉芽孢杆菌及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一株诱导大豆产生大豆抗毒素的解淀粉芽孢杆菌及其用途。该解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)AT34，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.15480。实验证明，本发明专利技术提供的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)AT34 CGMCCNo.15480可以诱导大豆产生大豆抗毒素，相应大豆粉中的大豆抗毒素含量达到5.78mg/g鲜豆重。本发明专利技术具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一株诱导大豆产生大豆抗毒素的解淀粉芽孢杆菌及其用途
本专利技术属于生物
，具体涉及一株诱导大豆产生大豆抗毒素的解淀粉芽孢杆菌及其用途。
技术介绍
大豆(Glycinemax)是豆科大豆属一年生草本植物，在豆类中营养价值最高。除了大豆本身所固有的异黄酮类化合物具有多种生物学作用外，在压力条件下大豆会产生一种次生代谢产物大豆抗毒素(glyceollins)。大豆抗毒素有大豆抗毒素Ⅰ、大豆抗毒素Ⅱ和大豆抗毒素Ⅲ三种异构体(结构式见图1)，其可以完全抑制雌激素诱导的MCF-7细胞中黄体酮受体的表达，并部分抑制其在BG-1细胞的表达，从而可高效阻断妇科肿瘤的生长和扩散。由此可知，大豆抗毒素是大豆中的又一健康元素。解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)为芽孢杆菌属，是一种与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)亲缘性很高的非致病细菌，广泛存在于自然界。目前国内外对其研究仅局限于发酵条件优化、降解除草剂丁草胺、抑制植物病原微生物、控制藻类繁殖和动物肠道益生菌等应用领域。
技术实现思路
本专利技术的目的是如何诱导大豆产生大豆抗毒素。本专利技术首先保护解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34，该菌株已于2018年03月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.15480。解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34CGMCCNo.15480简称为解淀粉芽孢杆菌AT34。本专利技术还保护一种菌剂，其含有解淀粉芽孢杆菌AT34。所述菌剂的用途可为a1)或a2)或a3)：a1)生产大豆抗毒素；a2)生产富含大豆抗毒素的大豆粉；a3)诱导大豆产生大豆抗毒素。所述菌剂的制备方法，可包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌AT34接种至细菌培养基并进行培养，获得的菌液即为菌剂。所述细菌培养基可为LB液体培养基或PDB培养基。所述LB液体培养基的制备方法具体可如下：将10g蛋白胨、10g氯化钠和5g酵母粉溶于去离子水，然后用去离子水定容至1L；121℃灭菌15min。所述PDB培养基的制备方法具体可如下：将5g马铃薯浸粉、15g葡萄糖、10g蛋白胨和5g氯化钠溶于去离子水，然后用去离子水定容至1L；121℃灭菌15min。所述菌剂的制备方法中，所述培养的具体条件可为：35-39℃(如35-37℃、37-39℃、35℃、37℃或39℃)、100-300rpm(如100-200rpm、200-300rpm、100rpm、200rpm或300rpm)振荡培养10-20h(如10-15h、15-20h、10h、15h或20h)。除了活性成分，所述菌剂还可以包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物。所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种。所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种。所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水。所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。所述解淀粉芽孢杆菌AT34或上述任一所述菌剂在a1)或a2)或a3)中的应用也属于本专利技术的保护范围：a1)生产大豆抗毒素；a2)生产富含大豆抗毒素的大豆粉；a3)诱导大豆产生大豆抗毒素。本专利技术还保护一种生产大豆抗毒素得方法，可包括如下步骤：(1)向有切口的大豆子叶中加入所述解淀粉芽孢杆菌AT34，培养；(2)完成步骤(1)后，从所述大豆子叶中提取大豆抗毒素。本专利技术还保护一种生产富含大豆抗毒素的大豆粉的方法，可包括如下步骤：(1)向有切口的大豆子叶中加入所述解淀粉芽孢杆菌AT34，培养；(2)完成步骤(1)后，将所述大豆子叶研磨成大豆粉；所述大豆粉即为富含大豆抗毒素的大豆粉。本专利技术还保护一种诱导大豆产生大豆抗毒素的方法，可包括如下步骤：(1)向有切口的大豆子叶中加入所述解淀粉芽孢杆菌AT34，培养；完成步骤(1)后的大豆子叶即产生大豆抗毒素。上述任一所述的方法中，所述步骤(1)中，“向有切口的大豆子叶中加入解淀粉芽孢杆菌AT34”是通过向有切口的大豆子叶中加入解淀粉芽孢杆菌AT34的菌悬液实现的。所述菌悬液中解淀粉芽孢杆菌AT34的浓度可为7×1010cfu/mL-2×1011cfu/mL(如7×1010cfu/mL-9.6×1010cfu/mL、9.6×1010cfu/mL-2×1011cfu/mL、7×1010cfu/mL、9.6×1010cfu/mL或2×1011cfu/mL)。上述任一所述的方法中，所述“向有切口的大豆子叶中加入解淀粉芽孢杆菌AT34”的方式可为b1)或b2)：b1)将所述有切口的大豆子叶完全浸泡在所述菌悬液中；b2)向所述切口内滴入所述菌悬液。所述b1)中，浸泡时间可为1-10min(如1-2min、2-5min、5-10min、1min、2min、5min或10min。上述任一所述的方法中，所述步骤(1)中，培养可为23-27℃(如23-25℃、25-27℃、23℃、25℃或27℃)暗培养3-5d(如3-4d、3-5d、3d、4d或5d)。上述任一所述的方法中，所述步骤(1)中，培养的湿度可为40-60％(如40-50％、50-60％、40％、50％或60％)。解淀粉芽孢杆菌是人畜安全的肠道益生菌。实验证明，本专利技术提供的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34CGMCCNo.15480可以诱导大豆产生大豆抗毒素，相应大豆粉中的大豆抗毒素含量达到5.78mg/g鲜豆重。本专利技术具有重要的应用价值。附图说明图1为大豆抗毒素三种异构体的结构式。图2为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34的生长曲线。图3为大豆抗毒素提取液的HPLC检测结果。图4为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34菌悬液中确认诱导子。图5为HPLC检测结果。图6为MS检测结果。保藏说明菌种名称：解淀粉芽孢杆菌拉丁名：(Bacillusamyloliquefaciens)菌株编号：AT34保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏机构简称：CGMCC地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号保藏日期：2018年03月26日保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.15480具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。LB液体培养基：将10g蛋白胨、10g氯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)AT34，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.15480。

【技术特征摘要】
1.解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.15480。2.一种菌剂，其特征在于：所述菌剂含有权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34CGMCCNo.15480。3.权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34CGMCCNo.15480、或、权利要求2所述菌剂的应用，为a1)或a2)或a3)：a1)生产大豆抗毒素；a2)生产富含大豆抗毒素的大豆粉；a3)诱导大豆产生大豆抗毒素。4.一种生产大豆抗毒素的方法，包括如下步骤：(1)向有切口的大豆子叶中加入权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34CGMCCNo.15480，培养；(2)完成步骤(1)后，从所述大豆子叶中提取大豆抗毒素。5.一种生产富含大豆抗毒素的大豆粉的方法，包括如下步骤：(1)向有切口的大豆子叶中加入权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)AT34CGMCCNo.15480，培养；(2)完成步骤(1)后，将所述大豆子叶研磨成大豆粉；所述大豆...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭晴，张宇微，魏晨阳，乔宇，石波，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11