The invention relates to a method for isolation and purification of an antifungal trypsin inhibitor from Radix pseudo ginseng, which comprises: preparation of crude protein extract from Radix pseudo ginseng, ammonium sulfate fractionation, Sephadex G 50 gel filtration chromatography and DEAE anion exchange chromatography, and a trypsin inhibitor is obtained. It has strong pH and temperature stability, and has significant growth inhibition on Fusarium oxysporum and Anthracnose of Castanea henryi. The invention obtains a trypsin inhibitor from Radix Pseudostellariae, which has stable inhibitory activity and remarkable antifungal activity. Trypsin inhibitors were obtained by column chromatography. The purification process was simple and helpful to the exploitation of protein resources of Radix Pseudostellariae and its application in agriculture and medicine.
【技术实现步骤摘要】
一种太子参抗真菌胰蛋白酶抑制剂的分离与纯化方法
本专利技术涉及一种太子参抗真菌胰蛋白酶抑制剂的分离与纯化方法,属于生物
技术介绍
太子参[Pseudostellariaheterophyllaroots(Miq.)Pax.]又名孩儿参,石竹科太子参属植物。太子参略有甘味,属于温和滋补型食材,具有生津润肺之特性,历史悠久,常用于治疗各种肺部和脾脏疾病,民间常作为药膳来食用。太子参中包含各类有效的化学成分,如氨基酸、环肽类、糖类等,这些化学成分与太子参具有降血糖、抗氧化、抗应激和增强机体免疫等功能有密切关系。目前,大多数研究专注于太子参多糖和皂苷等,而对太子参中丰富的蛋白质研究较少。因此,本研究从太子参中分离纯化出胰蛋白酶抑制剂的研究能有效的填补这一不足。胰蛋白酶抑制剂(Trypsininhibitor)是一类能够抑制蛋白水解酶催化活性的蛋白质或肽,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族。胰蛋白酶抑制剂广泛分布于动物、植物和微生物中,其中在乔本科植物和豆类中的研究较为深入。胰蛋白酶抑制剂具有调节蛋白酶、抗虫害、抗病毒、抗细胞增殖和抗真菌等活性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种太子参抗真菌胰蛋白酶抑制剂的分离与纯化方法,该方法操作简单、设备成本低,且得到的胰蛋白酶抑制剂活性强、稳定性好且具有抑制尖孢镰刀菌和锥栗炭疽病病菌的作用。为实现上述目的,采用以下技术方案:本专利技术太子参中抗真菌胰蛋白酶抑制剂的分离与纯化方法,包括如下步骤:(1)太子参蛋白粗提液的制备:新鲜太子参块根匀浆,浸提,过滤,离心取上清液;(2)硫酸铵分级沉降:利用质量分数为20%-80%硫酸 ...
【技术保护点】
1.一种太子参抗真菌胰蛋白酶抑制剂,其特征在于:所述胰蛋白酶抑制剂N端氨基酸序列为Phe‑Val‑Val‑Asp‑Leu‑Asp‑Gly‑Asp‑Pro‑Leu‑Asp‑Gly。
【技术特征摘要】
1.一种太子参抗真菌胰蛋白酶抑制剂,其特征在于:所述胰蛋白酶抑制剂N端氨基酸序列为Phe-Val-Val-Asp-Leu-Asp-Gly-Asp-Pro-Leu-Asp-Gly。2.一种太子参抗真菌胰蛋白酶抑制剂的分离与纯化方法,其特征在于包括如下步骤:(1)太子参蛋白粗提液的制备:将新鲜太子参块根匀浆,浸提,过滤,离心取上清液;(2)硫酸铵分级沉降:利用质量分数为20%-80%硫酸铵分级沉降初步纯化蛋白粗提液;(3)柱层析:利用SephadexG-50凝胶过滤层析及DEAE阴离子交换层进一步分离纯化,以得到高纯度的胰蛋白酶抑制。3.根据权利要求2所述的太子参抗真菌胰蛋白酶抑制剂分离纯化的方法,其特征在于:步骤(1)中太子参蛋白粗提液的制备如下:新鲜太子参块根清洗干净,以1:5-10质量体积比加入10-50mM、pH6.5-8.0Tris-HCl缓冲液,匀浆,4℃下搅拌浸提5-10h,砂布过滤,在10000r/min下离心10-30min,取上清液,即得太子参蛋白粗提液。4.根据权利要求2所述的太子参抗真菌胰蛋白酶抑制剂分离纯...
【专利技术属性】
技术研发人员:汪少芸,蔡茜茜,谢晓丽,
申请(专利权)人:福州大学,
类型:发明
国别省市:福建,35
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