The invention aims at the microporous plate fermentation technology to determine the biomass, that is, after washing the fermentation broth precipitation three times with normal saline, the magnesium ion in the bacteria body is determined by the chrome black T dual-wavelength coloration method (A=A560_A680) based on the enzyme marker, and the biomass of the bacteria is reflected by the content of magnesium ion. The invention overcomes the defect that it is difficult to characterize the biomass of fermentation broth by weighing dry weight method in the process of microporous plate fermentation, and at the same time, the determination value of the method is more close to the actual value based on the elimination of various interference factors, and has strong correlation with other biomass determination methods (glucosamine method) and accords with the level. The growth trend of bacteria in plate colony counting method. In a word, the biomass measurement method of the present invention is convenient to operate, fast and accurate, can correctly reflect the change trend of bacterial biomass in the fermentation process, the reagent is non-corrosive and the dosage is small, and has very strong application value.
【技术实现步骤摘要】
一种快速测定液态发酵液中生物量的方法
本专利技术属于生物量测定领域,具体涉及真菌在液体发酵液中的生物量测定技术。
技术介绍
当前生物量的测定方法很多,然而许多生物量的测定方法操作较为繁琐,并且易受菌龄、培养条件、培养基质的干扰,如麦角固醇法等;此外,测定碳源氮源的消耗、呼吸速率、称干重等检测方法并不总能准确地反映生物量的变化情况。qPCR技术虽然既能做到高通量检测,其检测结果又相对准确,但其需要引物设计,难度较大、成本较高,因此构建一种较为准确便捷的菌体生物量的测定方法成为当前急需解决的问题。由于微生物在培养环境中会对金属离子进行利用,因此可根据菌体中金属离子含量来间接测定菌量。为了简便而迅速地获取检测结果,以便于后续进行高通量检测,本专利技术采用改进的显色法来对金属离子进行测定。由于常见的培养基中均含有钠、钾、镁离子,而镁离子在菌体内部含量较为稳定,因此可用过菌体内部镁离子含量来推测菌量。通过一系列的排除干扰的手段来提高本方法测定的准确度,使得以菌体内部镁离子含量来表征菌体生物量成为可能,本方法简单易行,操作便捷,试剂用量小,其检测结果能够很好地反应液态发酵过程中菌量的变化趋势。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种真菌液态发酵生物量的快速测定方法。为实现上述目的,本专利技术采用如下技术方案:用生理盐水对孔板培养后的发酵液沉淀进行清洗后,基于酶标仪以铬黑T双波长显色法对菌体内部的镁离子进行测定,通过镁离子的含量来反映菌体生物量。镁离子浓度测定方法的改良:如图1所示,由于显色剂与络合物的吸收波长有较大的重叠,若单单使用显色剂的消光曲线或络合物的吸光曲线则 ...
【技术保护点】
1.一种快速测定液态发酵液中生物量的方法,其特征在于:用生理盐水对孔板培养后的发酵液沉淀进行清洗后,基于酶标仪以铬黑T双波长显色法对菌体内部的镁离子进行测定,通过镁离子的含量来反映菌体生物量。
【技术特征摘要】
1.一种快速测定液态发酵液中生物量的方法,其特征在于:用生理盐水对孔板培养后的发酵液沉淀进行清洗后,基于酶标仪以铬黑T双波长显色法对菌体内部的镁离子进行测定,通过镁离子的含量来反映菌体生物量。2.根据权利要求1所述的一种快速测定液态发酵液中生物量的方法,其特征在于:包括以下具体步骤:(1)在离心无沉淀的发酵培养基中接入孢子,发酵3天后对发酵液进行4500rpm离心10min,弃上清,获得纯菌体的沉淀;离心无沉淀的发酵培养基制备:味精22.33g,硫酸铵9.72g,无水葡萄糖42.50g,磷酸二氢钾9.00g,一水合硫酸锰0.21g,七水合硫酸镁2.1g,加水定容至1000mL,121℃高压灭菌20min;(2)在离心有沉淀的发酵培养基中接入孢子,发酵3天后对发酵液进行4500rpm离心10min,弃上清,获得菌体和培养基的混合沉淀;离心有沉淀的发酵培养基制备:味精22.33g,硫酸铵9.72g,无水葡萄糖12.50g,籼米粉30.00g,磷酸二氢钾9.00g,一水合硫酸锰0.21g,七水合硫酸镁2.1g,加水定容至1000mL,121℃高压灭菌20min;(3)在(1)和(2)中所获得的沉淀分别加入生理盐水,上下颠倒几次将沉淀打散,4500rpm离心5min弃上清再次获得沉淀;重复操作3次...
【专利技术属性】
技术研发人员:倪莉,周康熙,冯瀚中,何冬萍,刘志彬,张雯,张晨,
申请(专利权)人:福州大学,
类型:发明
国别省市:福建,35
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