岩陀提取物在制备兽药中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种岩陀提取物在制备兽药中的应用，岩陀提取物用于制备增强动物机体免疫功能的兽药中的药物添加剂，所述岩陀提取物为从岩陀植物中提取制备得到的黄酮粗提物，所述的岩陀黄酮粗提物用于兽药中的药物添加剂，添加到兽药中的药物浓度为1.25~5mg/mL。本发明专利技术所得岩陀黄酮粗提物生物活性好，在猪淋巴细胞转化实验中显示对淋巴细胞的转化有促进作用，对致免疫力低下大鼠血清中白细胞（WBC）、中性粒细胞（Gran）、淋巴细胞（Lym）含量有提高效果，使免疫抑制大鼠身体状况得到恢复；表明岩陀黄酮粗提物具有显著增强动物机体免疫功能的效果，可用作一种增强动物机体免疫功能的兽药原料。

Application of rhizome of Rhizoma rodmen in preparation of veterinary drugs

The invention discloses the application of the extract of Radix Ranunculus in the preparation of veterinary drugs, and the extract of Radix Ranunculus Ranunculus is used for preparing drug additives in the veterinary drugs for enhancing the immune function of animals. The extract of Radix Ranunculus Ranunculus Ranunculus is a crude flavonoid extract obtained from the plant of Radix Ranunculus Ranunculus Ranunculus Ranunc The dosage of drugs added to veterinary drugs is 1.25~5mg/mL. The crude extract of the extract of rutin has good biological activity. * it can promote lymphocyte transformation in pig lymphocyte transformation experiments, and has a high effect on the content of white blood cells (WBC), neutrophils (Gran) and lymphocytes (Lym) in the serum of immunocompromised rats, so that the body condition of immunosuppressed rats is improved. The results showed that the crude extract of Flavonoids from Ranunculus japonicus could significantly enhance the immune function of animals, and could be used as a kind of veterinary medicine material to enhance the immune function of animals.

【技术实现步骤摘要】
岩陀提取物在制备兽药中的应用
本专利技术属于动物医学中兽药制备领域，具体来说是一种岩陀提取物在制备兽药中的应用。
技术介绍
随着时代的进步，社会在不断发展，消费者对食品的安全以及对环保意识在逐渐增强，目前我们所食用的动物性食品所残留的兽药问题以及兽药对自然环境的污染问题越来越受到重视，寻找安全、有效的代替抗生素防治养殖动物疾病的药物具有重要意义。近年来，中草药凭借自身作用广泛以及毒副作用较低，而且不易产生耐药性的特点，在畜禽养殖行业中受到了大众的关注。岩陀药材为虎耳草科植物，西南鬼灯擎或羽叶鬼灯擎的干燥根茎。在中医上具有收敛、消炎、祛风除湿的功效，常用于治疗痢疾、肠炎、感冒头痛、外伤出血、风湿骨痛、老年性支气管炎等常见疾病。目前在动物医学中的开发应用较少。黄酮类化合物是一类具有2-苯基色原酮结构的植物次级代谢产物，是一类广泛存在于植物中的活性物质，在医学上具有抗氧化、抗肿瘤、抗心血管病以及抗炎症等功能，具有广阔的应用前景。目前黄酮类物质在动物生产中的应用较少。本申请提出之前，岩陀中的黄酮粗提物在制备兽药的药物原料作为添加剂的应用尚未见相关报道。免疫细胞产生的细胞因子和免疫球蛋白是免疫细胞相互作用的重要信号及物质基础，在机体细胞免疫和体液免疫调控中发挥重要作用。免疫细胞种类多，分布广泛。血液中的成熟免疫细胞俗称白细胞，主要由单个核细胞，主要由单个核细胞构成，包括单核细胞、淋巴细胞和粒细胞。淋巴细胞包括T、B淋巴细胞，是最主要的免疫细胞，T淋巴细胞参与细胞免疫，B淋巴细胞参与体液免疫。环磷酰胺常用于抗肿瘤的治疗，其最大的副作用就是免疫抑制，尤其是对体液免疫的抑制，所以，环磷酰胺常用于免疫抑制模型的建立。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种岩陀提取物在制备兽药中的应用，用于制备增强动物机体免疫功能的兽药中的药物添加剂，为兽药开发提供新的原料资源。植物岩陀中含有大量黄酮类物质，作为兽药的原料资源，对中兽药的发展和岩陀进一步的开发利用有很大帮助。本专利技术通过如下技术方案予以实现：一种岩陀提取物在增强动物机体免疫功能方面的应用，岩陀提取物用于制备增强动物机体免疫功能的兽药中的药物添加剂，所述岩陀提取物为从岩陀植物中提取制备得到的黄酮粗提物，所述的岩陀黄酮粗提物用于兽药中的药物添加剂，添加到兽药中的药物浓度为1.25~5mg/mL。所述的岩陀黄酮粗提物的制备步骤如下：（1）将晒干的岩陀根茎粉碎后过40目筛，得到岩陀粉；（2）取岩陀粉末，按料液质量比1:（55-65）加入浓度60%乙醇浸泡，静置过夜，超声波功率280-320W条件下提取10-20min，在65-75℃水浴锅水浴2.5-3.5小时；（3）用真空泵抽滤除去药渣，再经减压旋转蒸发仪挥去乙醇，放65-75℃恒温干燥箱干燥，得到纯度含量为35-40%的岩陀黄酮粗提物，提取率为36%左右。本专利技术的有益效果是：岩陀黄酮粗提物提取工艺简单，提取条件温和，所得岩陀黄酮粗提物活性强。所得岩陀黄酮粗提物在猪淋巴细胞转化试验和提高大鼠免疫力检测试验显示具有显著增强动物机体免疫功能的效果，开发成兽药使用安全方便，拓展中药黄芩的用途。所得岩陀黄酮粗提物在小白鼠急性毒理和35天亚慢性毒理试验中表明岩陀黄酮粗提物可在动物上应用。因此，所得岩陀黄酮粗提物作为一种中兽药原料，有利于增强动物机体免疫功能。岩陀黄酮粗提物具有原料来源广、提高免疫力显著、药用安全、绿色等优点。附图说明图1为岩陀黄酮粗提物对大鼠WBC的影响示意。图2为岩陀黄酮粗提物对大鼠Gran的影响。图3为岩陀黄酮粗提物对大鼠Lym的影响。图4为岩陀黄酮粗提物化合物混悬液对小鼠体重的影响。图5为各组小白鼠心脏切片。图6为各组小白鼠肝脏切片。图7为各组小白鼠肾脏切片。图8为黄酮化合物混悬液对小鼠血液生化指标影响。图5-7中1为对照组、2为低剂量组、3为中剂量组、4为高剂量组，HE：400×。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。实施例中的“药物”与岩陀黄酮粗提物为同一所指。一、岩陀黄酮粗提物的提取：（1）将晒干的岩陀根茎粉碎后过40目筛，得到岩陀粉；（2）取药材粉末，加入600mL含量为60%的乙醇浸泡，静置过夜，超声15min，70℃水浴锅水浴3小时；（3）用真空泵抽滤除去药渣，再经减压旋转蒸发仪挥去乙醇，放70℃恒温干燥箱干燥，3.647g纯度为39%的岩陀黄酮粗提物。实施例2岩陀黄酮粗提物对猪淋巴细胞转化实验：（1）无菌采集猪前腔静脉血20mL，装进含有肝素钠的抗凝管中。（2）将抗凝血与稀释液按1:1进行稀释，将稀释液与淋巴细胞分离液按1:2混匀分装到高压灭菌的离心管中，水平离心机1850r/min，30min进行离心。（3）吸取中间白色絮状物的淋巴细胞层，置于干净的高压灭菌离心管中，加入清洗液混匀后1500r/min，10min离心；弃掉液体，加入1mL红细胞裂解液吹打均匀，静置3min，加入清洗液配平后1500r/min，10min离心；弃掉液体。（4）完全培养基配制：1640培养基:胎牛血清:双抗比例为89%:10%:1%。（5）取450μL淋巴细胞悬液到小离心管中，加入50μL台盼蓝染色计数。将细胞悬液稀释至2×105个，置于二氧化碳培养箱进行培养。（6）将实施例1所得岩陀黄酮粗提物用完全培养基进行溶解，用微孔滤膜进行过滤，配制不同浓度梯度的药物。（7）取96孔板，按不同药物梯度进行加样，每一浓度梯度为4的重复，对照孔设4个重复，每孔100μL。（8）刀豆蛋白A（ConA）实验：分为无细胞组，加含有20%ConA的完全培养基100μL；有细胞组，加含有20%ConA的细胞悬液100μL。（9）无刀豆蛋白A（ConA）实验：分为无细胞组，加入完全培养基100μL；有细胞组，加淋巴细胞细胞悬液100μL。（10）置于二氧化碳培养箱进行培养42~44h。避光加5%的MTT溶液每孔20μL，二氧化碳培养箱培养4h，避光加二甲亚砜每孔100μL。紫外分光光度计570nm处测定OD值。（11）计算：转化率=（OD实验组-OD对照组）/OD对照组×100%；结果大于1表示药物有免疫增强效果。（12）结果：在药物浓度为5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL时，ConA岩陀黄酮粗提物对应的转化率为：3.294、3.275、1.908。结果表明实施例1所得岩陀黄酮粗提物在1.25~5mg/mL的浓度条件下具有显著提高免疫力的效果。实施例3提高大鼠免疫力检测实验：实验第0天，将21只实验大白鼠分为岩陀组、环磷酰胺对照组和空白对照组，每个组各7只，分别采集每组老鼠血液，开展白细胞（WBC）、中性粒细胞（Gran）、淋巴细胞（Lym）测定后，除空白对照外，均注射环磷酰胺50mg/kg，1次/天，连用3天。第7天采集样品分别测定各组WBC、Gran、Lym指标，采样后当天岩陀组灌胃岩陀黄酮粗提物200mg/kg，其他组灌胃等量生理盐水，1次/天，连用28天，结果如图1-3所示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种岩陀提取物在制备兽药中的应用，其特征在于，岩陀提取物用于制备增强动物机体免疫功能的兽药中的药物添加剂，所述岩陀提取物为从岩陀植物中提取制备得到的黄酮粗提物，所述的岩陀黄酮粗提物用于兽药中的药物添加剂，添加到兽药中的药物浓度为1.25~5mg/mL。

【技术特征摘要】
1.一种岩陀提取物在制备兽药中的应用，其特征在于，岩陀提取物用于制备增强动物机体免疫功能的兽药中的药物添加剂，所述岩陀提取物为从岩陀植物中提取制备得到的黄酮粗提物，所述的岩陀黄酮粗提物用于兽药中的药物添加剂，添加到兽药中的药物浓度为1.25~5mg/mL。2.如权利要求1所述的岩陀提取物在制备兽药中的应用，其特征在于，所述岩陀黄酮粗提物的制备步骤如下：（1）...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒相华，宋春莲，谢相悦，朱福春，白华毅，李文贵，凌万旭，罗高，吴常月，
申请(专利权)人：云南农业大学，昆明伟牧得生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53