本发明专利技术公开了一种耐胃肠道降解的重组狂犬病口服疫苗毒株，它是在母本狂犬病口服疫苗毒株的基因组G基因和L基因之间插入布鲁菌外膜蛋白U‑OMP19基因，通过反向遗传操作系统拯救出可以表达U‑OMP19基因的重组狂犬病口服免疫毒株，所述布鲁菌外膜蛋白U‑OMP19基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明专利技术通过U‑OMP19基因的插入增强了毒株的免疫原性，提高了耐酸和耐蛋白酶消化的能力，在口服免疫后可以诱导高水平的中和抗体。
【技术实现步骤摘要】
一种耐胃肠道降解的重组狂犬病口服疫苗毒株及其制备方法
本专利技术属于动物疫苗
，涉及重组狂犬病口服疫苗毒株，尤其是一种耐胃肠道降解的重组狂犬病口服疫苗毒株，本专利技术还涉及该毒株的制备方法。
技术介绍
狂犬病是最古老的传染病之一，是由狂犬病毒(Rabiesvirus，RV)引起的一种人畜共患传染病。狂犬病是迄今为止人类病死率最高的急性传染病，一旦发病，病死率几乎达100％。据世界卫生组织报告，全世界每年有约55000人死于狂犬病，其中绝大多数分布在非洲和亚洲。近些年，我国平均每年约有3000人左右死于狂犬病，多数是由于被动物咬伤而被感染。疫苗免疫是预防和控制狂犬病的最有效途径，当前广泛应用的狂犬病疫苗主要是原代细胞培养疫苗和传代细胞纯化疫苗等灭活疫苗，这些疫苗虽然免疫效果较好，但价格昂贵，而且主要采用的免疫方式为肌注免疫，这样对于一些流浪动物及野生动物的免疫接种则很难实现。在我国，街头的流浪狗、猫等动物为当前主要的传染源，因此，将流浪的动物进行有效的免疫是狂犬病防控的关键。口服免疫是一种公认的易于实施的免疫方式，欧美许多国家已经将口服疫苗应用于野生动物的狂犬病防控。目前应用的口服疫苗主要有SAD-B19(SchneiderLG,CoxJH,MullerWWetal.CurrentoralrabiesvaccinationinEurope:aninterimbalance.RevInfectDis1988,10Suppl4:S654-659.WandelerAI,CaptS,KappelerAetal.Oralimmunizationofwildlifeagainstrabies:conceptandfirstfieldexperiments.RevInfectDis.1988,10Suppl4:S649-653.)、VR-G(KienyMP,LatheR,DrillienRetal.Expressionofrabiesvirusglycoproteinfromarecombinantvacciniavirus.Nature.1984,312:163-166.BrochierB,KienyMP,CostyFetal.Large-scaleeradicationofrabiesusingrecombinantvaccinia-rabiesvaccine.Nature.1991,354:520-522.FearneyhoughMG,WilsonPJ,ClarkKAetal.Resultsofanoralrabiesvaccinationprogramforcoyotes.JAmVetMedAssoc.1998,212:498-502.HanlonCA,NiezgodaM,HamirANetal.FirstNorthAmericanfieldreleaseofavaccinia-rabiesglycoproteinrecombinantvirus.JWildlDis.1998,34:228-239)，和SAG-2(FlamandA,CoulonP,LafayFetal.Avirulentmutantsofrabiesvirusandtheiruseaslivevaccine.TrendsMicrobiol.1993,1:317-320.CliquetF,RobardetE,MustKetal.EliminatingrabiesinEstonia.PLoSNeglTropDis.2012,6:e1535.CliquetF,AubertM.EliminationofterrestrialrabiesinWesternEuropeancountries.DevBiol(Basel).2004,119:185-204.NiinE,BarratJ,KristianMetal.FirstoralvaccinationofwildlifeagainstrabiesinEstonia.DevBiol(Basel).2006,125:145-147.)等。但这些口服疫苗均存在许多不足，例如，SAD虽然在欧美一些国家消灭了狂犬病在狐狸中的传播，但有研究表明SAD对小鼠及本土动物具有致病性(WinklerWG,ShaddockJH,WilliamsLW.Oralrabiesvaccine:evaluationofitsinfectivityinthreespeciesofrodents.AmJEpidemiol.1976,104:294-298.)。SAG-2为从SAD株发展而来，是在SAD株中突变2个氨基酸位点而使其致病性大大降低，但SAG-2所产生的中和抗体水平较低(HanlonCA,NiezgodaM,MorrillPetal.Oralefficacyofanattenuatedrabiesvirusvaccineinskunksandraccoons.JWildlDis.2002,38:420-427.)。VR-G为痘病毒表达狂犬病G蛋白的重组毒株，虽然VR-G帮助欧美许多国家阻止了狂犬病在浣熊和狐狸等野生动物中的传播，但有研究表明，VR-G暴露给人可导致严重的皮肤炎症发应和全身的痘病毒感染(MempelM,IsaG,KlugbauerNetal.Laboratoryacquiredinfectionwithrecombinantvacciniaviruscontaininganimmunomodulatingconstruct.JInvestDermatol.2003,120:356-358.RupprechtCE,BlassL,SmithKetal.Humaninfectionduetorecombinantvaccinia-rabiesglycoproteinvirus.NEnglJMed.2001,345:582-586.CentersforDiseaseC,Prevention.Humanvacciniainfectionaftercontactwitharaccoonrabiesvaccinebait-Pennsylvania,2009.MMWRMorbMortalWklyRep.2009,58:1204-1207.)。此外，当前的狂犬病口服疫苗的免疫起始部位多为口腔，不能引起胃肠道的免疫反应(OrciariLA,NiezgodaM,HanlonCAetal.RapidclearanceofSAG-2rabiesvirusfromdogsafteroralvaccination.Vaccine.2001Aug14；19(31):4511-8.ZhouM,ZhangG,RenGetal.RecombinantrabiesvirusesexpressingGM-CSForflagellinareeffectivevaccinesforbothintramuscularandoralimmunizations.PLoSOne.2013May20；8(5):e63384.ZhouM,WangL,ZhouSetal.RecombinantrabiesvirusexpressingdogGM-CSFisan本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种耐胃肠道降解的重组狂犬病口服疫苗毒株，其特征在于：它是在母本狂犬病口服疫苗毒株的基因组G基因和L基因之间插入布鲁菌外膜蛋白U‑OMP19基因，通过反向遗传操作系统拯救出可以表达U‑OMP19基因的重组狂犬病口服免疫毒株，所述布鲁菌外膜蛋白U‑OMP19基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
【技术特征摘要】
1.一种耐胃肠道降解的重组狂犬病口服疫苗毒株，其特征在于：它是在母本狂犬病口服疫苗毒株的基因组G基因和L基因之间插入布鲁菌外膜蛋白U-OMP19基因，通过反向遗传操作系统拯救出可以表达U-OMP19基因的重组狂犬病口服免疫毒株，所述布鲁菌外膜蛋白U-OMP19基因的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。2.如权利要求1所述耐胃肠道降解的重组狂犬病口服疫苗毒株，其特征在于：所述母本狂犬病口服疫苗毒株是LBNSE毒株，所述LBNSE毒株是将SAD-B19毒株G蛋白上的194位天冬氨酸突变为丝氨酸，将333位的精氨酸突变为谷...
【专利技术属性】
技术研发人员：周明，赵凌，傅振芳，张怡婧，张峻滔，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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