一种VEGF-C单克隆抗体及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种VEGF‑C单克隆抗体，其重链的氨基酸序列如VH:CAA63907所示，其轻链的氨基酸序列如VL:2X1W_D所示。所述VEGF‑C单克隆抗体具有较高的亲和力，特异性强，在体外具有良好的生物学活性。将本发明专利技术VEGF‑C单抗与VEGF‑C多抗建立的VEGF‑C蛋白检测试剂盒可作为评价肿瘤淋巴管生成和淋巴转移指标。

A VEGF-C monoclonal antibody and kit

The present invention discloses a monoclonal antibody against VEGF_C. The amino acid sequence of its heavy chain is shown as VH: CAA63907, and the amino acid sequence of its light chain is shown as VL: 2X1W_D. The monoclonal antibody against VEGF_C has high affinity, strong specificity and good biological activity in vitro. The detection kit for VEGF_C protein established by the anti-VEGF_C monoclonal antibody and the anti-VEGF_C polyantibody of the present invention can be used as an index for evaluating tumor lymphangiogenesis and lymphatic metastasis.

【技术实现步骤摘要】
一种VEGF-C单克隆抗体及试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种VEGF-C单克隆抗体及VEGF-C蛋白检测试剂盒。
技术介绍
血管内皮生长因子C(VEGF-C)属VEGF/PDGF家族成员，人VEGF-C基因位于染色体4q34上，编码产物为419个氨基酸残基的蛋白质，属分泌性多肽，经蛋白酶水解加工后，形成以二硫键连接的同源二聚体，分子量为46.9kD。VEGF-C受体为VEGFR-2，VEGFR-3。VEGF通过VEGFR-2调节血管和淋巴管的增生，而VEGFR-3表达则局限于淋巴管内皮，VEGF-C为VEGFR-2的结合，产生生物学效应的所需浓度远高于VEGFR-C，因此，VEGFR-3是淋巴管增生特异性调节因子，用VEGF-C转基因鼠实验证实，VEGF-C的高表达可以选择性地引起淋巴管增生[NeufeldG等，FASEBJ，1999，13：9-22]，经研究，VEGF-C表达与肿瘤淋巴管增生和转移的关系是VEGF-C高表达可促进肿瘤的淋巴转移，其机理是VEGF-C促进了肿瘤周围及间质的淋巴管生长以及肿瘤组织中淋巴管增生。VEGF-C是最早发现的淋巴管生长因子，与淋巴管的关系较为密切，包括对淋巴管增生的诱导及对淋巴细胞内皮进行有效的调节，而肿瘤往往最先通过淋巴管进行转移，因此，VEGF-C与肿瘤转移密切相关。VEGF-C在发育的胚胎中即能促进血管进行分化、生长，因此，与其他促进血管生成的因子相比，其发挥作用的时间更早。VEGF-C可作用于VEGFR-2和VEGFR-3，诱导内皮细胞增生，尤其是微血管细胞增生。VEGF-C与VEGFR-3结合后，激活VEGFR-3引起SHC的磷酸化，导致ERK1和ERK2的活化，继而活化细胞骨架蛋白Paxillin促进淋巴管上皮细胞的转移；同时也可激活Ras/MAPK信号转导通路或TNK通路，诱导淋巴管内皮细胞肌动蛋白的重组，刺激内皮细胞增生。VEGF-C与受体VEGFR-2结合，通过PI3K途径，激活抗体凋亡蛋白Akt/PKB，上调凋亡蛋白Bcl-2抑制肿瘤细胞的凋亡，从而促进肿瘤细胞的生长，在体外能刺激血管内皮细胞增生和移动，在体内能增加血管的通透性。而同一组织中，VEGF-C与VEGFR-3的结合力是与VEGFR-2结合力的3倍，这使得VEGF-C的促淋巴管生成作用成为主导，只有在一定条件下(如:高浓度、局部组织主要表达VEGFR-2)才促进血管的生成。作为特异性淋巴管内皮细胞的生长因子，VEGF-C在肿瘤发生、发展的不同阶段都具有重要作用。目前的临床研究统计和试验显示，VEGF-C以旁分泌和自分泌方式分别作用于血管和淋巴管内皮细胞并诱导其新生，改变淋巴管内皮的黏附特性，增加分泌细胞因子和趋化因子，促进肿瘤细胞增殖。影响癌症临床疗效的主要原因之一是肿瘤的转移，而且，肿瘤淋巴转移发生较早。因此，探索肿瘤淋巴转移的机制，研究针对肿瘤淋巴转移过程的有效治疗方法，显得尤为重要。随着VEGF-C及其受体的相继发现，研究肿瘤淋巴管生成及淋巴转移的机制已成为目前肿瘤研究的热点。虽然VEGF-C介导的肿瘤淋巴管生成的具体机制尚不清楚。但通过大量的研究，已证实VEGF-C的高表达与肿瘤淋巴管密度与肿瘤临床分期和腋淋巴结转移有关相关，VEGF-C能促进淋巴管生成，与淋巴结转移状况密切相关，且VEGF-C的阳性表达与肿瘤血行转移危险密切相关，所以监测VEGF-C的表达有望成为肿瘤淋巴转移的生物标记物。近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。用于检测血清学指标的方法主要包括放射性同位素免疫分析、酶联免疫吸附法、和化学发光免疫分析。这些方法既可以作为初筛试验也可以作为确认试验，其中化学发光法具有检测线性范围宽、检测仪器简单、操作方便等优点。现有技术中针对肿瘤淋巴转移的生物标记物产品目前国内尚属空白，同类产品其特异性和亲和力等方面还存在进一步的提升可能，基于此，我们开发了VEGF-C测定试剂盒(化学发光法)及其制备方法。
技术实现思路
为了克服现有中的上述问题，本专利技术提供了一种VEGF-C单克隆抗体，具有较高的亲和力，在体外具有良好的生物学活性；开发前景广阔。一种VEGF-C单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列为：MetHisLeuLeuGlyPhePheSerValAlaCysSerLeuLeuAlaAlaAlaLeuLeuProGlyProArgGluAlaProAlaAlaAlaAlaAlaPheGluSerGlyLeuAspLeuSerAspAlaGluProAspAlaGlyGluAlaThrAlaTyrAlaSerLysAspLeuGluGluGlnLeuArgSerValSerSerValAspGluLeuMetThrValLeuTyrProGluTyrTrpLysMetTyrLysCysGlnLeuArgLysGlyGlyTrpGlnHisAsnArgGluGlnAlaAsnLeuAsnSerArgThrGluGluThrIleLysPheAlaAlaAlaHisTyrAsnThrGluIleLeuLysSerIleAspAsnGluTrpArgLysThrGlnCysMetProArgGluValCysIleAspValGlyLysGluPheGlyValAlaThrAsnThrPhePheLysProProCysValSerValTyrArgCysGlyGlyCysCysAsnSerGluGlyLeuGlnCysMetAsnThrSerThrSerTyrLeuSerLysThrLeuPheGluIleThrValProLeuSerGlnGlyProLysProValThrIleSerPheAlaAsnHisThrSerCysArgCysMetSerLysLeuAspValTyrArgGlnValHisSerIleIleArgArgSerLeuProAlaThrLeuProGlnCysGlnAlaAlaAsnLysThrCysProThrAsnTyrMetTrpAsnAsnHisIleCysArgCysLeuAlaGlnGluAspPheMetPheSerSerAspAlaGlyAspAspSerThrAspGlyPheHisAspIleCysGlyProAsnLysGluLeuAspGluGluThrCysGlnCysValCysArgAlaGlyLeuArgProAlaSerCysGlyProHisLysGluLeuAspArgAsnSerCysGlnCysValCysLysAsnLysLeuPheProSerGlnCysGlyAlaAsnArgGluPheAspGluAsnThrCysGlnCysValCysLysArgThrCysProArgAsnGlnProLeuAsnProGlyLysCysAlaCysGluCysThrGluSerProGlnLysCysLeuLeuLysGlyLysLysPheHisHisGlnThrCysSerCysTyrArgArgProCysThrAsnArgGlnLysAlaCysGluProGlyPheSerTyrSerGluGluV本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种VEGF‑C单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列为：Met His Leu Leu Gly Phe Phe Ser Val Ala Cys Ser Leu Leu Ala Ala Ala Leu Leu Pro Gly Pro Arg Glu Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Glu Ser Gly Leu Asp Leu Ser Asp Ala Glu Pro Asp Ala Gly Glu Ala Thr Ala Tyr Ala Ser Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu Arg Ser Val Ser Ser Val Asp Glu Leu Met Thr Val Leu Tyr Pro Glu Tyr Trp Lys Met Tyr Lys Cys Gln Leu Arg Lys Gly Gly Trp Gln His Asn Arg Glu Gln Ala Asn Leu Asn Ser Arg Thr Glu Glu Thr Ile Lys Phe Ala Ala Ala His Tyr Asn Thr Glu Ile Leu Lys Ser Ile Asp Asn Glu Trp Arg Lys Thr Gln Cys Met Pro Arg Glu Val Cys Ile Asp Val Gly Lys Glu Phe Gly Val Ala Thr Asn Thr Phe Phe Lys Pro Pro Cys Val Ser Val Tyr Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Ser Glu Gly Leu Gln Cys Met Asn Thr Ser Thr Ser Tyr Leu Ser Lys Thr Leu Phe Glu Ile Thr Val Pro Leu Ser Gln Gly Pro Lys Pro Val Thr Ile Ser Phe Ala Asn His Thr Ser Cys Arg Cys Met Ser Lys Leu Asp Val Tyr Arg Gln Val His Ser Ile Ile Arg Arg Ser Leu Pro Ala Thr Leu Pro Gln Cys Gln Ala Ala Asn Lys Thr Cys Pro Thr Asn Tyr Met Trp Asn Asn His Ile Cys Arg Cys Leu Ala Gln Glu Asp Phe Met Phe Ser Ser Asp Ala Gly Asp Asp Ser Thr Asp Gly Phe His Asp Ile Cys Gly Pro Asn Lys Glu Leu Asp Glu Glu Thr Cys Gln Cys Val Cys Arg Ala Gly Leu Arg Pro Ala Ser Cys Gly Pro His Lys Glu Leu Asp Arg Asn Ser Cys Gln Cys Val Cys Lys Asn Lys Leu Phe Pro Ser Gln Cys Gly Ala Asn Arg Glu Phe Asp Glu Asn Thr Cys Gln Cys Val Cys Lys Arg Thr Cys Pro Arg Asn Gln Pro Leu Asn Pro Gly Lys Cys Ala Cys Glu Cys Thr Glu Ser Pro Gln Lys Cys Leu Leu Lys Gly Lys Lys Phe His His Gln Thr Cys Ser Cys Tyr Arg Arg Pro Cys Thr Asn Arg Gln Lys Ala Cys Glu Pro Gly Phe Ser Tyr Ser Glu Glu Val Cys Arg Cys Val Pro Ser Tyr Trp Lys Arg Pro Gln Met Ser；轻链可变区氨基酸序列为：Ala His Tyr Asn Thr Glu Ile Leu Lys Ser Ile Asp Asn Glu Trp Arg Lys Thr Gln Cys Met Pro Arg Glu Val Ala Ile Asp Val Gly Lys Glu Phe Gly Val Ala Thr Asn Thr Phe Phe Lys Pro Pro Cys Val Ser Val Tyr Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Ser Glu Gly Leu Gln Cys Met Asn Thr Ser Thr Ser T...

【技术特征摘要】
1.一种VEGF-C单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列为：MetHisLeuLeuGlyPhePheSerValAlaCysSerLeuLeuAlaAlaAlaLeuLeuProGlyProArgGluAlaProAlaAlaAlaAlaAlaPheGluSerGlyLeuAspLeuSerAspAlaGluProAspAlaGlyGluAlaThrAlaTyrAlaSerLysAspLeuGluGluGlnLeuArgSerValSerSerValAspGluLeuMetThrValLeuTyrProGluTyrTrpLysMetTyrLysCysGlnLeuArgLysGlyGlyTrpGlnHisAsnArgGluGlnAlaAsnLeuAsnSerArgThrGluGluThrIleLysPheAlaAlaAlaHisTyrAsnThrGluIleLeuLysSerIleAspAsnGluTrpArgLysThrGlnCysMetProArgGluValCysIleAspValGlyLysGluPheGlyValAlaThrAsnThrPhePheLysProProCysValSerValTyrArgCysGlyGlyCysCysAsnSerGluGlyLeuGlnCysMetAsnThrSerThrSerTyrLeuSerLysThrLeuPheGluIleThrValProLeuSerGlnGlyProLysProValThrIleSerPheAlaAsnHisThrSerCysArgCysMetSerLysLeuAspValTyrArgGlnValHisSerIleIleArgArgSerLeuProAlaThrLeuProGlnCysGlnAlaAlaAsnLysThrCysProThrAsnTyrMetTrpAsnAsnHisIleCysArgCysLeuAlaGlnGluAspPheMetPheSerSerAspAlaGlyAspAspSerThrAspGlyPheHisAspIleCysGlyProAsnLysGluLeuAspGluGluThrCysGlnCysValCysArgAlaGlyLeuArgProAlaSerCysGlyProHisLysGluLeuAs...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕鹏辉，
申请(专利权)人：浙江众意生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33