一种软脂固定液及其应用制造技术

本申请涉及一种软脂固定液及其应用，属于测试用样品制备技术领域。包括甲醛、卵磷脂、无水乙醇、丙酮、去氧胆酸、甲醇，各组分在固定液中的浓度分别为：甲醛50~150ml/L，卵磷脂30~70g/L，无水乙醇200~300 ml/L，丙酮200~300ml/L，去氧胆酸30~70g/L，甲醇200‑300ml/L。将本申请应用于肿瘤淋巴结等的清扫，不仅有效溶解脂肪组织、保证淋巴结及时充分的固定，还确保了淋巴结细胞形态保存完整，无变形，免疫组化效果好，有效提高了淋巴结检出数目和精确淋巴结转移阳性率。

A soft fat fixing liquid and its application

The application relates to a soft fat fixing liquid and its application, belonging to the technical field of sample preparation for testing. The concentrations of formaldehyde, lecithin, ethanol, acetone, deoxycholic acid and methanol in the stationary solution were 50-150 ml/L, 30-70 g/L lecithin, 200-300 ml/L anhydrous ethanol, 200-300 ml/L acetone, 30-70 g/L deoxycholic acid and 200-300 ml/L methanol respectively. The application can not only effectively dissolve adipose tissue and ensure the timely and sufficient fixation of lymph nodes, but also ensure the integrity of lymph node cell morphology, no deformation, good immunohistochemical effect, and effectively improve the number of lymph nodes detected and the positive rate of accurate lymph node metastasis.

【技术实现步骤摘要】
一种软脂固定液及其应用
本申请涉及一种软脂固定液及其应用，属于测试用样品制备

技术介绍
现有新鲜离体标本通常是在福尔马林固定液中浸泡，这主要由于甲醛可以长时间并且很好的保存组织形态学结构特征，同时又具有良好的经济效用。此类标本处理方法虽然可以很好的固定组织的形态，但也使含有脂肪组织的标本变硬，在病理科取材特别是淋巴结取材时大大增加了难度。对于胃癌、肠癌、乳腺癌等肿瘤根治术标本中，彻底地淋巴结取材对肿瘤诊断分期、制定治疗方案及判断预后至关重要，而常规的固定液和现有的标本固定方法都无法满足在快速固定的同时提高淋巴结的取材速度和检出率，使得病理医生在长期的离体脂肪组织中手摸刀切式寻找淋巴结的方法存在取材不充分、操作时间长等诸多弊端，并最终影响病人的治疗方案、预后和转归。为解决现有肿瘤根治组织标本处理技术中存在的问题，临床实际工作中急需软化或者溶解脂肪的同时充分暴露和固定淋巴结、保持淋巴结组织结构和细胞形态完整的方法。基于此，做出本申请。
技术实现思路
针对现有淋巴结检出技术所存在的上述缺陷，本申请首先提供一种软脂固定液，在软化乳化溶解脂肪的同时固定淋巴结，保证淋巴结结构的完整和最佳染色效果。为实现上述目的，本申请采取的技术方案如下：一种软脂固定液，包括甲醛、卵磷脂、无水乙醇、丙酮、去氧胆酸、甲醇，各组分在固定液中的浓度分别为：甲醛50～150ml/L，卵磷脂30～70g/L，无水乙醇200～300ml/L，丙酮200～300ml/L，去氧胆酸30～70g/L，甲醇200-300ml/L。进一步的，作为优选：还包括有PBS溶液，PBS溶液添加至固定液中其浓度为100-200ml/L。更优选的，所述软脂固定液中，甲醛100ml/L，卵磷脂50g/L，去氧胆酸47.5g/L，无水乙醇250ml/L，甲醇250ml/L，丙酮250ml/L，PBS溶液1×。还包括有PBS溶液和美兰，PBS溶液添加至固定液中其浓度为100-200ml/L，美兰在固定液中的浓度为0.05-0.15g/L。更优选的，所述软脂固定液中，甲醛100ml/L，卵磷脂50g/L，去氧胆酸47.5g/L，无水乙醇250ml/L，甲醇250ml/L，丙酮250ml/L，PBS溶液1×，美兰0.1g/L。同时本申请还提供了一种具有上述特征软脂固定液的应用方法，取肿瘤淋巴结清扫新鲜组织标本，浸泡于固定液中进行固定处理，再增强脂肪细胞通透性，采用消化液35-39℃恒温处理2-6小时；所述固定处理是指标本于室温下在固定液中浸泡2-24小时，固定液包括甲醛、卵磷脂、无水乙醇、去氧胆酸、丙酮和甲醇，各组分在固定液中的浓度分别为：甲醛50～150ml/L，卵磷脂30～70g/L，无水乙醇200～300ml/L，丙酮200～300ml/L，去氧胆酸30～70g/L，甲醇200-300ml/L。进一步的，作为优选：所述增强脂肪细胞通透性是指先用HCl溶液处理新鲜组织标本5-20min，处理温度为室温；再将其浸泡在胰蛋白酶-EDTA中，浸泡选用35-39℃恒温水浴处理10-20min，其中，HCl溶液浓度为0.005N-0.05N；胰蛋白酶-EDTA构成为：含0.1-2.5％(体积质量比)胰蛋白酶、0.001-0.1％(体积质量比)EDTA，PBS配制。所述PBS溶液，是将pbs粉末加入蒸馏水中搅拌溶解至适宜浓度，或者采用浓度为70mmol/L(7×PBS溶液)的PBS溶液稀释成适宜浓度。所述肿瘤淋巴结清扫新鲜组织标本取自脂肪组织、乳腺组织、甲状腺组织、肺组织、结肠组织中的任一种。将上述软脂固定液处理标本，其优点主要体现为：(1)本申请所提供的新鲜肿瘤淋巴结清扫组织标本的处理方法，以HCl和胰蛋白酶-EDTA处理，增加脂肪细胞膜通透性。在该方案中，首先通过温和的化学法处理组织，增强脂肪细胞膜通透性，而淋巴结因为表面致密结缔组织被膜的保护，细胞组成成分细胞膜不受影响或影响轻微不足以引起细胞和组织结构的改变。(2)在增加脂肪细胞膜通透性处理后，以软化乳化脂肪、固定淋巴结等多重作用的固定液进行软脂处理，所选用的固定液具有乳化甚至部分溶解脂肪的作用，可使包裹淋巴结及淋巴结周边的脂肪组织软化，加大淋巴结和脂肪组织的软硬度差别，更容易和方便淋巴结取材，提高工作效率和取材质量。(3)使用软脂固定液对淋巴结及多种组织标本的固定效果与常规福尔马林进行保存固定的效果相当，提高了淋巴结的检出数目，精确淋巴结转移阳性率，也减少了病理科医生的解剖取材时间，为后期病理学科的室外质量控制提供了可能，商品化后在临床广泛推广应用中的作用尤其突出。附图说明图1为本申请所提供软脂固定液处理前后的脂肪组织，其中，A为处理前的新鲜脂肪组织，B为处理后的脂肪；C为转移癌放大40倍，D为微小转移癌放大200倍；图2为乳腺组织采用本申请所提供软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规HE染色及CD10、P63和PR免疫组化染色，×200；图3为甲状腺样本采用本申请所提供软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规HE染色及TTF-1、CD20和CD3免疫组化染色，×200；图4为肺组织标本采用本申请所提供软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规HE染色及CK、P63和TTF-1免疫组化染色，×200；图5为结肠组织标本采用本申请所提供软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规HE染色及actin、CK20和S100免疫组化染色，×200。具体实施方式实施例1：不同构成的软脂固定液本申请所提供的软脂固定液的核心作用成分主要是甲醛、卵磷脂、无水乙醇和丙酮，在不同实施环境下，还可以额外增加去氧胆酸、甲醇、PBS溶液和美兰中的任一种或多种，具体成分选择方式可参见表1所示。表1不同组成的软脂固定液我们分别对核心构成成分的软脂固定液(即表1中的序号1)以及补充成分进行测试，可以得到上述16种情况，相同组分采用相同浓度对同样的样品做平行试验，结果表明：核心构成成分的软脂固定液不论是对脂肪组织还是器官组织(如甲状腺组织、乳腺组织、肺组织)或者结肠组织，都具有很好的固定效果，淋巴结得到良好暴露；但补充成分的作用也不容忽视，如采用表1中序号2所提供方案时，去氧胆酸与核心构成成分的配合下，脂肪的消化效果较好，该趋势在序号1与序号2、序号3与序号6、序号8与序号12以及序号14与序号16的对比中有同样体现；序号3所提供的方案中，甲醇与无水乙醇起到协同的作用，配合其他核心构成成分，溶出效率更高，该趋势在序号1与序号3、序号4与序号8、序号6与序号7以及序号15与序号16的对比中有同样体现；序号4所提供的方案中，PBS溶液与核心构成成分的配合下，脂肪的溶出与软化效果更加均匀，该趋势在序号1与序号4、序号13与序号16；序号5所提供的方案中，与核心构成成分的配合下，在后续染色处理中可以更加快速的显色，该特性在序号1与序号5、序号6与序号13、序号12与序号16的对比中也有同样体现。因此，基于不同的固定目的和处理要求，可以选择上述不同构成的软脂固定本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种软脂固定液，其特征在于，包括甲醛、卵磷脂、无水乙醇、丙酮、去氧胆酸、甲醇，各组分在固定液中的浓度分别为：甲醛50~150ml/L，卵磷脂30~70g/L，无水乙醇200~300 ml/L，丙酮200~300ml/L，去氧胆酸30~70g/L，甲醇200‑300ml/L。

【技术特征摘要】
1.一种软脂固定液，其特征在于，包括甲醛、卵磷脂、无水乙醇、丙酮、去氧胆酸、甲醇，各组分在固定液中的浓度分别为：甲醛50~150ml/L，卵磷脂30~70g/L，无水乙醇200~300ml/L，丙酮200~300ml/L，去氧胆酸30~70g/L，甲醇200-300ml/L。2.如权利要求1所述的一种软脂固定液，其特征在于：还包括有PBS溶液，所述PBS溶液添加至固定液中其浓度为100-200ml/L。3.如权利要求2所述的一种软脂固定液，其特征在于：所述软脂固定液中，甲醛100ml/L，卵磷脂50g/L，去氧胆酸47.5g/L，无水乙醇250ml/L，甲醇250ml/L，丙酮250ml/L，PBS溶液1×。4.如权利要求1所述的一种软脂固定液，其特征在于：还包括有PBS溶液和美兰，PBS溶液添加至固定液中其浓度为100-200ml/L，美兰在固定液中的浓度为0.05-0.15g/L。5.如权利要求4所述的一种软脂固定液，其特征在于：所述软脂固定液中，甲醛100ml/L，卵磷脂50g/L，去氧胆酸47.5g/L，无水乙醇250ml/L，甲醇250ml/L，丙酮250ml/L，PBS溶液1×，美...

【专利技术属性】
技术研发人员：周春燕，徐关根，姚育英，李韩鑫，张剑，孙爱静，
申请(专利权)人：绍兴文理学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33