The invention discloses an RPA reagent kit for real-time detection of Tilapia Lake virus at constant temperature and its special primers and probes. Specific primers and probes for detection of Tilapia Lake virus by RPA are screened through design and experiment. Based on the combination of recombinant enzyme polymerase amplification (RPA) and lateral flow immunochromatography (LFD), the RPA reagent kit can be used within 15 minutes. Visual inspection of tilapia Lake virus at constant temperature of 37 degrees.
【技术实现步骤摘要】
恒温实时检测罗非鱼湖病毒的RPA试剂盒及其专用引物和探针
本专利技术属于生物
,涉及罗非鱼湖病毒的检测技术,具体涉及恒温实时检测罗非鱼湖病毒的RPA试剂盒及其专用引物和探针,及在监测罗非鱼湖病毒的应用。
技术介绍
2009年左右以色列的太巴列湖野生罗非鱼和人工饲养罗非鱼同时患上一种不明疾病,死亡率高达70%以上,两三年后厄瓜多尔的人工饲养罗非鱼也相继大量死亡,随后该病原被确诊为罗非鱼湖病毒(TilapiaLakeVirus,“罗湖病毒”),现已在三大洲5个国家得到确认,包括哥伦比亚、厄瓜多尔、埃及、以色列和泰国。2017年6月13日,台湾地区确认首例“罗湖”病毒疫情,罗非鱼出现大量死亡情形,我国已经在海南省发现了TiLV感染。我国是罗非鱼养殖和出口大国,2015年罗非鱼养殖产量达到180万吨,一旦爆发“罗湖”病毒疫情,将导致大批养殖罗非鱼死亡,造成严重的经济损失。TiLV被归类为正粘病毒科(Orthomyxoviridae)的一种新病毒,电子显微镜显示病毒粒子为具包膜的二十面体结构,大小为55~75nm,为分段、单链的负链RNA病毒,由10个基因片段组成,片段1最大,为1.641KB,片段2~10分别为1.471KB、1.371KB、1.250KB、1.099KB、1.044KB、0.777KB、0.657KB、0.548KB和0.465KB,其中片段1预测蛋白与C型流感病毒的聚合酶基1(polymerasebasic1,PB1)亚基具有弱同源性,其他9个片段与Genbank其他序列无同源性。研究表明,所有片段5′和3′非编码区的核苷酸序列都是相似的 ...
【技术保护点】
1.用于检测罗非鱼湖病毒的RPA专用引物,其特征在于,根据罗非鱼湖病毒目的基因设计的,且所述罗非鱼湖病毒目的基因序列为:gatgcacctagatcccaagcaatcggctaatataggggagcaagactttgtgagtacccgagaaatttacaagctggatatgttggaactacctcccataagtaggaagggtgatctggacagagctagtggtcttgagacaagatgggacgtcatcttacttctggaatgcctcgactctaca,如SEQ ID No 1所示;所述RPA专用引物的正向引物序列为:GATGCACCTAGATCCCAAGCAATCGGCTAA,如SEQ ID No 2所示;所述RPA专用引物的反向引物序列为:TGTAGAGTCGAGGCATTCCAGAAGTAAGAT,如SEQ ID No 3所示;所述用于侧向流动免疫层析反应的引物序列为:5`Biotin‑GATGCACCTAGATCCCAAGCAATCGGCTAA。
【技术特征摘要】
1.用于检测罗非鱼湖病毒的RPA专用引物,其特征在于,根据罗非鱼湖病毒目的基因设计的,且所述罗非鱼湖病毒目的基因序列为:gatgcacctagatcccaagcaatcggctaatataggggagcaagactttgtgagtacccgagaaatttacaagctggatatgttggaactacctcccataagtaggaagggtgatctggacagagctagtggtcttgagacaagatgggacgtcatcttacttctggaatgcctcgactctaca,如SEQIDNo1所示;所述RPA专用引物的正向引物序列为:GATGCACCTAGATCCCAAGCAATCGGCTAA,如SEQIDNo2所示;所述RPA专用引物的反向引物序列为:TGTAGAGTCGAGGCATTCCAGAAGTAAGAT,如SEQIDNo3所示;所述用于侧向流动免疫层析反应的引物序列为:5`Biotin-GATGCACCTAGATCCCAAGCAATCGGCTAA。2.用于检测罗非鱼湖病毒的探针,其特征在于,根据罗非鱼湖病毒目的基...
【专利技术属性】
技术研发人员:王浩,汝高盟,唐睿哲,郭亚男,许烨琦,
申请(专利权)人:上海海洋大学,
类型:发明
国别省市:上海,31
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