一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物及其应用，该标志物为血浆标志物miR‑346,miR‑10a‑5p和miR‑34a‑5p以及血清标志物miR‑25‑3p,miR‑296‑5p和miR‑92a‑3p中的一种或多种。循环miRNA作为新型的生物标志物，具有稳定性好、微创易获取、灵敏性和特异性高的特点。这类分子标志物的开发利用将为包括肿瘤在内的各种疾病的诊断以及进一步治疗提供新的方向。本研究将更有针对性的得出具有临床诊断潜能的甲状腺乳头状癌循环miRNA标记物。研究证实了这组miRNA作为诊断甲状腺乳头状癌的无创标记物的可靠性以及可重复性。

A circulating miRNA marker associated with thyroid papillary carcinoma diagnosis and its application

The present invention discloses a circulating microRNA marker associated with the auxiliary diagnosis of thyroid papillary carcinoma and its application. The marker is one or more of plasma markers, microRNA346, microRNA10a 5p and microRNA34a 5p, and serum markers, microRNA25 3p, microRNA296 P and microRNA a 3p. As a new biomarker, circulating microRNAs have the characteristics of good stability, minimally invasive and easy to obtain, high sensitivity and specificity. The development and utilization of these molecular markers will provide new directions for the diagnosis and further treatment of various diseases, including tumors. In this study, circulating microRNA markers with clinical diagnostic potential for papillary thyroid carcinoma will be more targeted. The study confirmed the reliability and reproducibility of this group of microRNAs as noninvasive markers for the diagnosis of papillary thyroid carcinoma.

【技术实现步骤摘要】
一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物及其应用
本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物及其应用。
技术介绍
甲状腺癌(ThyroidCancer)起源于甲状腺组织，是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤之一，近30年来全球发病率增长近三倍。其中，甲状腺乳头状癌(PapillaryThyroidCarcinoma，PTC)是最常见的亚型，约占甲状腺癌的80-85％。外科治疗目前是甲状腺乳头状癌首选和最主要的治疗方法，并且能对早期的甲状腺乳头状癌患者达到治愈的目的，但由于甲状腺乳头状癌患者早期临床表现无明显特异性，在我国早期诊断率仍较低，易错失最佳的手术治疗时机。目前，超声波(ultrasoundimaging)及细针抽吸细胞检查(Fine-NeedleAspirationbiopsy，FNA)是较为推荐的诊断方法，但其仍存在诸如成本高、耗时长、损伤大以及过于依赖仪器设备和研究人员专业水平等方面的局限性。随着基因组学、蛋白组学以及代谢组学等生物技术的发展，越来越多的生物标志物已被发现或研究。因此，发现新的能够早期诊断甲状腺乳头状癌的标记物指日可待，从而促进甲状腺乳头状癌早期干预和治疗，延长病人的生存期。微小RNA(miRNAs)是一类长度在22个左右的核苷酸的小非编码RNA分子，其通过转录后调控广泛参与了各种生命活动过程，包括肿瘤的发生、侵袭及转移等。研究发现，miRNA的表达在肿瘤中有不同程度的上调和下调，为其能够作为一种新兴的肿瘤标志物奠定了基础。2008年，Mitchell在外周血中检测到游离的miRNA，发现其能够稳定存在于外周血中，并且可以作为诊断肿瘤的无创标志物。现已有研究证实了循环miRNA在甲状腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌等肿瘤中的潜在诊断价值。但由于研究方法及纳入人群的差异，导致研究结果不完全一致。因此，本研究利用ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及基于qRT-PCR的相对定量法，通过对大样本的甲状腺乳头状癌血清及血浆的研究，旨在寻找对甲状腺乳头状癌具有潜在诊断价值的循环miRNA。并对这些miRNA在甲状腺乳头状癌组织中以及外周血外泌体中的表达进行验证，以进一步明确其与甲状腺乳头状癌的关系。若根据这类miRNA设计针对于甲状腺乳头状癌的诊断试剂盒，将会推动我国甲状腺乳头状癌的诊治水平，也为将来对甲状腺乳头状癌的进一步研究提供思路。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物。本专利技术的另一目的在于提供上述循环miRNA标志物及其引物在制备甲状腺乳头状癌辅助诊断试剂盒以及在制备治疗甲状腺乳头状癌的药物中的应用。本专利技术的又一目的在于提供用于甲状腺乳头状癌辅助诊断和治疗的试剂盒及药物。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物，该标志物为血浆标志物miR-346(ugucugcccgcaugccugccucu),miR-10a-5p(uacccuguagauccgaauuugug)和miR-34a-5p(uggcagugucuuagcugguugu)以及血清标志物miR-25-3p(cauugcacuugucucggucuga),miR-296-5p(agggcccccccucaauccugu)和miR-92a-3p(uauugcacuugucccggccuguuauugcac)中的一种或多种。该循环miRNA标志物优选为血浆标志物miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清标志物miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中两种或两种以上的组合，进一步优选为血浆miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p六种miRNA所组成的组合。上述的循环miRNA标志物在辅助诊断甲状腺乳头状癌中的应用。上述的循环miRNA标志物在制备甲状腺乳头状癌辅助诊断试剂盒或制备治疗甲状腺乳头状癌药物中的应用。一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物的引物，该引物包含血浆miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为包含血浆miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中两种或两种以上miRNA的引物；进一步优选为包含血浆miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p六种miRNA的引物。上述的引物在辅助诊断甲状腺乳头状癌或制备甲状腺乳头状癌辅助诊断试剂盒中的应用。一种甲状腺乳头状癌辅助诊断试剂盒，该试剂盒中含有血浆miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为含有血浆miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中两种或两种以上miRNA的引物；进一步优选为含有血浆miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p六种miRNA的引物。该试剂盒中还包括PCR技术常用的试剂。该试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术所涉及的与甲状腺乳头状癌诊断相关的循环miRNA标志物miR-346,miR-10a-5p，miR-34a-5p，miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中的每种miRNA的序列均已公开，但是将各miRNA标志物进行组合作为甲状腺乳头状癌辅助诊断标志物需要本领域技术人员付出创造性劳动。各miRNA标志物的扩增引物均可通过市场购买获得，本专利技术实施例中使用的循环miRNA标志物的引物为购自广州锐博公司所合成生产的特异性miRNA茎环RT-PCR引物。具体地说，本专利技术解决问题的技术方案包括：(1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)血清及血浆miRNA差异表达谱分析：分析甲状腺乳头状癌和正常对照人群中差异表达的循环miRNA，并对差异表达miRNAs进行进一步大样本多阶段验证。(3)通过多阶段的验证，明确这些miRNA诊断甲状腺乳头状癌的能力。(4)循环miRNA诊断试剂盒的研制：根据甲状腺乳头状癌患者与正常人群血清及血浆中的差异表达miRNA开发miRNAs诊断试剂盒，实现对甲状腺乳头状癌患者的无创辅助诊断。(4)分析这些miRNA在甲状腺乳头状癌组织以及外泌体中的表达情况，揭示这些miRNA与甲状腺乳头状癌的关系，为将来研制可能与这些本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物，其特征在于该循环标志物为血浆标志物miR‑346,miR‑10a‑5p和miR‑34a‑5p以及血清标志物miR‑25‑3p,miR‑296‑5p和miR‑92a‑3p中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物，其特征在于该循环标志物为血浆标志物miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清标志物miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的循环miRNA标志物，其特征在于该循环miRNA标志物为血浆标志物miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清标志物miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中两种或两种以上的组合，优选为血浆miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p六种miRNA所组成的组合。3.权利要求1或2所述的循环miRNA标志物在辅助诊断甲状腺乳头状癌中的应用。4.权利要求1或2所述的循环miRNA标志物在制备甲状腺乳头状癌辅助诊断试剂盒或制备治疗甲状腺乳头状癌药物中的应用。5.一种与甲状腺乳头状癌辅助诊断相关的循环miRNA标志物的引物，其特征在于该引物包含血浆标志物miR-346,miR-10a-5p和miR-34a-5p以及血清标志物miR-25-3p,miR-296-5p和miR-92a-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为包含循环miRNA中血浆...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱伟，周鑫，邹璇，蒋琳，朱军，陈旭峰，吕金如，王治砚，
申请(专利权)人：朱伟，
类型：发明
国别省市：江苏,32