新的苏云金芽孢杆菌突变株及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种新的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)突变株，其保藏编号为DSM32419。

New Bacillus thuringiensis mutant and its application

The present invention provides a new Bacillus thuringiensis mutant, whose preservation number is DSM32419.

【技术实现步骤摘要】
新的苏云金芽孢杆菌突变株及其应用
本专利技术涉及一种新的苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)突变株及其应用。
技术介绍
由于微藻能有效利用光能、二氧化碳和无机盐类来合成蛋白质、脂肪、碳水化合物以及多种高附加价值的生物活性物质，因此微藻培养技术可应用于生产生物燃料、保健食品、食品添加剂、饲料及其他化学品。近年来随着生物能源技术的发展，部分含油微藻由于其油脂生产能力高(约可占细胞干重的20-60％)，具有光合效率高、生长周期短、可于不同地域环境生长等优点，且由于其能够吸收工厂废气中的二氧化碳，而同时达到减碳的效益，因此世界各国无不投入大量的资金与研发能量，进行相关技术的研究与开发。然而，大规模、低成本、高效率的获得微藻生物量(biomass)，是目前微藻生物能源产业化的最大瓶颈。根据分析，获得微藻生物量的成本约占整体生物柴油生产成本的60％，所以，提升微藻的产量以及缩短生产时间，是提高微藻产业利用性的关键方式。因此，目前亟需一种能够促进微藻细胞生长的新技术。
技术实现思路
本专利技术提供一种新的苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)突变株，其保藏编号为DSM32419。本专利技术也提供一种促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法，包括：(a)将苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)突变株接种进培养液中以获得菌体悬浮液，其中所述苏云金芽孢杆菌突变株的保藏编号为DSM32419；(b)将在菌体悬浮液中的苏云金芽孢杆菌突变株至少培养至生长稳定期(stationaryphase)，以获得经培养苏云金芽孢杆菌突变株的培养液，其中培养苏云金芽胞杆菌突变株的温度为约20-40℃；以及(c)将经培养苏云金芽孢杆菌突变株的培养液进行减压加热程序，以获得促进微藻细胞生长的促进剂，其中促进微藻细胞生长的促进剂中含有促进微藻细胞生长的活性物质，其中减压加热程序的加热温度为约40-90℃，且减压加热程序的压力为约10-400mmHg。本专利技术还提供一种促进微藻细胞生长的促进剂，其是由上述促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法所制备。本专利技术还提供一种促进微藻细胞生长的方法，包括：将微藻细胞于上述促进微藻细胞生长的促进剂存在下进行培养，以促进微藻细胞生长。为了让本专利技术的上述和其他目的、特征、和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下。附图说明图1显示于本专利技术一个实施例中在对苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)(2014年12月11日保藏于德国微生物菌种保藏中心，保藏编号DSM29807)进行转座子(transposon)人工诱变过程中所使用的带有转座子的质粒。图2显示不同浓度的本专利技术微藻细胞生长促进剂对于雨生红球藻生长的影响。图3A显示本专利技术微藻细胞生长促进剂对于由以尿素及铵态氮为主要氮源的基础培养基所培养的拟球藻生长的影响。图3B显示本专利技术微藻细胞生长促进剂对于由以硝酸盐为主要氮源的基础培养基所培养的拟球藻生长的影响。图4显示本专利技术微藻细胞生长促进剂对于小球藻生长的影响。图5显示本专利技术微藻细胞生长促进剂对于周氏扁藻生长的影响。图6，本专利技术微藻细胞生长促进剂对于等鞭金藻生长的影响。图7，本专利技术微藻细胞生长促进剂对于杜氏藻生长的影响。具体实施方式在本专利技术一个方面中，本专利技术提供一种新的苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)突变株。所述苏云金芽胞杆菌突变株具备促进微藻细胞生长的能力，并或能够产生促进微藻细胞生长的活性物质或代谢产物。在此所描述的微藻细胞，可为真核或原核的单细胞或多细胞微小藻类的细胞，具有细胞壁，可行光合作用，可生长于淡水或咸水的环境，常见微藻有绿藻、蓝藻、褐藻、红藻等。所述微藻细胞的例子可包括，但不限于，雨生红球藻(Haematococcuspluvialis)、拟球藻(Nannochloropsissp.)、小球藻(Chlorellasp.)、扁藻(Tetraselmissp.)、等鞭金藻(Isochrysisgalbana)和杜氏藻(Dunaliellasp.)等。在一个实施例中，上述微藻细胞可为雨生红球藻。在另一个实施例中，上述微藻细胞可为拟球藻。在又另一个实施例中，上述微藻细胞可为小球藻。而且，在一个实施例中，上述微藻细胞可为扁藻，而所述扁藻可为周氏扁藻(Tetraselmischui)，但不限与此。此外，在一个实施例中，上述微藻细胞可为等鞭金藻。另外，在一个实施例中，上述微藻细胞可为杜氏藻。在一个实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株可为一种突变自苏云金芽胞杆菌DSM29807(2014年12月11日保藏于德国微生物菌种保藏中心)的突变株，但不限于此。所述苏云金芽胞杆菌突变株的16SrRNA基因可包括至少与序列号：1的序列具有至少95％序列相似度的序列，但不限于此。在另一个实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株可经由自然突变或人工诱变获得。而在一个特定实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株是经由转座子(transposon)人工诱变所获得。在一个特定实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株可为2017年1月30日保藏于德国微生物菌种保藏中心，保藏编号为DSM32419的苏云金芽胞杆菌突变株ITRI-BtM101。而所述苏云金芽胞杆菌突变株ITRI-BtM101可通过将苏云金芽胞杆菌DSM29807进行转座子(transposon)人工诱变所获得。而且，在此特定实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株ITRI-BtM101的16SrRNA基因可为序列号：1的序列。在本专利技术另一个方面中，本专利技术提供一种促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法。在此所描述的微藻细胞，可为真核或原核的单细胞或多细胞微小藻类的细胞，具有细胞壁，可行光合作用，可生长于淡水或咸水的环境，常见微藻有绿藻、蓝藻、褐藻、红藻等。所述微藻细胞的例子可包括，但不限于，雨生红球藻、拟球藻、小球藻、扁藻、等鞭金藻和杜氏藻等。在一个实施例中，上述微藻细胞可为雨生红球藻。在另一个实施例中，上述微藻细胞可为拟球藻。在又另一个实施例中，上述微藻细胞可为小球藻。而且，在一个实施例中，上述微藻细胞可为扁藻，而所述扁藻可为周氏扁藻，但不限与此。此外，在一个实施例中，上述微藻细胞可为等鞭金藻。另外，在一个实施例中，上述微藻细胞可为杜氏藻。本专利技术的促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法，可包括下列步骤，但不限于此。首先，将苏云金芽胞杆菌突变株接种进培养液中以获得菌体悬浮液，而所述苏云金芽胞杆菌突变株具备促进微藻细胞生长的能力，或能够产生促进微藻细胞生长的活性物质或代谢产物。在一个实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株可为突变自苏云金芽胞杆菌DSM29807的突变株，但不限于此。所述苏云金芽胞杆菌突变株的16SrRNA基因可包括至少与序列号：1的序列具有至少95％序列相似度的序列，但不限于此。在另一个实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株可经由自然突变或人工诱变获得。而在一个特定实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株是经由转座子(transposon)人工诱变所获得。在一个特定实施例中，所述苏云金芽胞杆菌突变株可为2017年1月30日保藏于德国微生物菌种保藏中心，保藏编号为DSM32419的苏云金芽胞杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新的苏云金芽孢杆菌突变株，其保藏编号为DSM32419。

【技术特征摘要】
1.一种新的苏云金芽孢杆菌突变株，其保藏编号为DSM32419。2.一种促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法，包括：(a)将苏云金芽孢杆菌突变株接种进培养液中以获得菌体悬浮液，其中所述苏云金芽孢杆菌突变株的保藏编号为DSM32419；(b)将在所述菌体悬浮液中的所述苏云金芽孢杆菌突变株至少培养至生长稳定期，以获得经培养所述苏云金芽孢杆菌突变株的培养液，其中培养所述苏云金芽胞杆菌突变株的温度为约20-40℃；以及(c)将所述经培养所述苏云金芽孢杆菌突变株的培养液进行减压加热程序，以获得所述促进微藻细胞生长的促进剂，其中所述促进微藻细胞生长的促进剂中含有促进微藻细胞生长的活性物质，其中所述减压加热程序的加热温度为约40-90℃，且所述减压加热程序的压力为约10-400mmHg。3.如权利要求2所述的促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法，在所述步骤(b)与所述步骤(c)之间还包括移除所述经培养所述苏云金芽孢杆菌突变株的培养液中的菌体。4.如权利要求3所述的促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法，其中移除所述经培养所述苏云金芽孢杆菌突变株的培养液中的菌体的方式包括将所述经培养所述苏云金芽孢杆菌突变株的培养液进行离心或过滤。5.如权利要求2所述的促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法，其中所述培养液的成分包括蛋白胨与酵母菌提取物。6.如权利要求2所述的促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法，其中培养在所述菌体悬浮液中的所述苏云金芽胞杆菌突变株约12-72小时以至少至生长稳定期。7.如权利要求2所述的促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法，其中所述减压加热程序的加热温度为约50℃，而所述减压加热程序的压力为约80mmHg。8.一种促进微藻细胞生长的促进剂，其是由如权利要求2所述的促进微藻细胞生长的促进剂的制备方法所制备。9.如权利要求8所述的促进微藻细胞生长的促进剂，在所述步骤(b)与所述步骤(c)之间还包括移除所述经培养所述苏云金芽孢...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈昌傑，白明德，吴劭易，郭欣慈，卢文章，万皓鹏，
申请(专利权)人：财团法人工业技术研究院，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71