用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒，包括：包装盒、内含正向引物和反向引物的RPA反应液管、阳性对照管、阴性对照管、试纸条装置、至少1个反应容器和至少1个反应架；其中，所述试纸条装置包括试纸条体和试纸条盖，所述试纸条体包括侧向流动免疫层析试纸条，试纸条自下而上依次为反应区、质控区和检测区，质控区和监测区外侧设置有透明的聚乙烯材料外壳，且外壳靠近反应区的端部设置有螺纹，并与试纸条盖螺纹连接；上述RPA检测试剂盒检测速度快、时间短，效率高，便于携带，适合早期兽医临床检测。

RPA detection kit for rapid detection of II carp herpesvirus

The utility model discloses a RPA detection kit for rapid detection of type II Cyprinus herpesvirus, which comprises a packaging box, a RPA reaction liquid tube containing forward and reverse primers, a positive control tube, a negative control tube, a test strip device, at least one reaction container and at least one reaction rack. The test strip body and the test strip cover comprise a lateral flow immunochromatographic test strip. The test strip is in turn a reaction zone, a quality control zone and a detection zone from bottom to top. A transparent polyethylene material shell is arranged outside the quality control zone and the monitoring zone, and the shell is provided with a thread near the end of the reaction zone, and the test strip cover screw is arranged with the test strip cover screw. The RPA detection kit has the advantages of high detection speed, short detection time, high efficiency, easy to carry, and is suitable for early veterinary clinical detection.

【技术实现步骤摘要】
用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒
本技术涉及检测试剂盒，具体涉及用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒。
技术介绍
疱疹病毒性造血器官坏死病(herpesviralhaematopoieticnecrosis,HVNV)是一种鲫鱼的高致病性病，其病原体为II型鲤疱疹病毒(cyprinidherpesvirus2,CyHV-2)，鲫鱼患上这种病后，体表出血，伴随眼球和腹部膨胀，内脏器官严重出血，鳔壁斑点状突出，该病毒致死率高达90％以上，而且存在垂直传播的情况，感染该病毒后鱼的鱼苗和鱼卵中都能发现该病毒。该种病毒的传统检测方法大都存在特异性和敏感性差、操作繁琐、费时费力等缺点，不能满足兽医临床现地检测需要。重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是利用重组酶和单链结合蛋白在常温下协同实现引物与模板的特异结合，以代替传统PCR热循环中变性和复性过程的新型恒温体外核酸扩增技术。RPA与侧向流动免疫层析技术(LFD)相结合的方法具有判断结果肉眼可判读，检测方便，反应时间在10min内，便于携带等优点，其反应原理是羧基荧光素(FAM)标记的特异探针与生物素(Biotin)标记的核酸扩增产物特异性结合，将其滴加于试纸条上便会与胶体金标记的抗FAM的抗体结合，形成三元复合物，当扩散到检测线时，三元复合物被生物素配体捕获，形成有颜色的检测线。RPA检测手段操作简单、反应快速、检测成本低、结果确实可靠，用于II型鲤疱疹病毒的快速检测快速、可靠，且应用前景广阔。
技术实现思路
为克服现有技术的上述缺陷，本技术的目的在于提供一种用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒。本技术的上述目的通过以下技术方案实现：用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒，包括：包装盒、内含正向引物和反向引物的RPA反应液管、阳性对照管、阴性对照管、试纸条装置、至少1个反应容器和至少1个反应架用于检测时放置所述试纸条装置；其中，所述试纸条装置包括试纸条体和试纸条盖；所述试纸条体包括侧向流动免疫层析试纸条；所述的试纸条自下而上依次为反应区、质控区和检测区，所述的质控区和监测区外侧设置有透明的聚乙烯材料外壳；且所述外壳靠近反应区的端部设置有螺纹，并与所述试纸条盖螺纹连接。优选地，所述反应容器为透明聚乙烯材料，且可与所述试纸条体外壳靠近反应区端部的螺纹进行连接。优选地，所述试纸条体检测时与所述反应容器螺旋连接，并置于所述反应架内。优选地，所述阳性对照管内含有ORF72质粒。优选地，所述阴性对照管内含有无菌ddH2O。优选地，所述RPA反应液管包括正向引物、反向引物、酶、RehydrationBuffer、醋酸镁和水。需要说明的是，上述技术方案中，试纸条体的里层为侧向流动免疫层析试纸条，当试纸条的反应区放入反应容器内进行反应时，因为检测结果是由下往上跑，所以设计至少一个反应架用于放置螺旋连接好的试纸条体和反应容器观察试验结果，判定是否有II型鲤疱疹病毒，既直观又便捷、卫生，且不影响结果的正确判断。与现有技术相比，本技术具有如下有益效果：(1)检测速度快，效率高，适合于早期检测；(2)检测时间短，方便快捷；(3)易于鉴定，肉眼即可观察结果；(4)便于携带，局限性小，适合兽医临床检测。附图说明图1为本技术的结构示意图；图2为本技术中试纸条装置的结构示意图；图3为本技术中反应容器的结构示意图；图4为本技术中反应架的结构示意图；其中，1-包装盒，2-内衬，3-盒盖，4-RPA反应液管，5-阳性对照管，6-阴性对照管，7-试纸条装置，8-试纸条体，9-试纸条盖，10-反应容器，11-反应架。具体实施方式下述结合附图对本技术进一步描述。参见附图1-4所示，用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒，包括：包装盒1、内含正向引物和反向引物的RPA反应液管4、阳性对照管5、阴性对照管6、试纸条装置7、至少1个反应容器10和至少1个反应架11用于检测时放置试纸条装置；其中，试纸条装置7包括试纸条体8和试纸条盖9；试纸条体8包括侧向流动免疫层析试纸条，试纸条自下而上依次为反应区、质控区和检测区，质控区和监测区外侧设置有透明的聚乙烯材料外壳，且外壳靠近反应区的端部设置有螺纹，并与试纸条盖9螺纹连接；反应容器10为透明聚乙烯材料，且可与试纸条体8外壳靠近反应区端部的螺纹进行连接。阳性对照管5内含有ORF72质粒，阴性对照管6内含有无菌ddH2O，RPA反应液管4内除包括正向引物、反向引物外，还包括酶、RehydrationBuffer、醋酸镁和水。当上述RPA检测试剂盒使用时，将模板(DNA)2ul以及RPA反应液管4中的液体48ul加入反应容器10内，在37℃下加热10min，再把试纸条装置7的试纸条盖9旋开露出反应区，通过螺纹连接放入加热后的反应容器10中，等待5min观察结果。当试纸条体8内出现两条条带，一条位于质控区内，一条位于检测区，则结果为阳性，表明样本中含有II型鲤疱疹病毒；当试纸条只有质控区出现一条条带，检测区没有条带，则结果是阴性，表明样本中不含有II型鲤疱疹病毒。试纸条体的里层为侧向流动免疫层析试纸条，当试纸条的反应区放入反应容器内进行反应时，因为检测结果是由下往上跑，所以设计至少一个反应架用于放置螺旋连接好的试纸条体和反应容器观察试验结果，判定是否有II型鲤疱疹病毒，既直观又便捷、卫生，不影响结果的判断。本技术不局限于上述具体实施方式公开的内容，凡是不脱离本技术所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本技术保护的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括：包装盒(1)、内含正向引物和反向引物的RPA反应液管(4)、阳性对照管(5)、阴性对照管(6)、试纸条装置(7)、至少1个反应容器(10)和至少1个反应架(11)用于检测时放置所述试纸条装置(7)；其中，所述试纸条装置(7)包括试纸条体(8)和试纸条盖(9)；所述试纸条体(8)包括侧向流动免疫层析试纸条；所述的试纸条自下而上依次为反应区、质控区和检测区，所述的质控区和监测区外侧设置有透明的聚乙烯材料外壳；且所述外壳靠近反应区的端部设置有螺纹，并与所述试纸条盖(9)螺纹连接。

【技术特征摘要】
1.用于快速检测II型鲤疱疹病毒的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括：包装盒(1)、内含正向引物和反向引物的RPA反应液管(4)、阳性对照管(5)、阴性对照管(6)、试纸条装置(7)、至少1个反应容器(10)和至少1个反应架(11)用于检测时放置所述试纸条装置(7)；其中，所述试纸条装置(7)包括试纸条体(8)和试纸条盖(9)；所述试纸条体(8)包括侧向流动免疫层析试纸条；所述的试纸条自下而上依次为反应区、质控区和检测区，所述的质控区和监测区外侧设置有透明的聚乙烯材料外壳；且所述外壳靠近反应区的端部设置有螺纹，并与所述试纸条盖(9)螺纹连接。2.如权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕利群，孙萌，王浩，周书亭，刘宇斯，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：新型
国别省市：上海,31