一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及痛风药物制备领域，具体公开了一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物的制备方法和应用。该提取物为葜根茎经干燥、粉碎、过筛、浸提法制备、依次经过石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取、冷冻干燥后得到菝葜黄嘌呤氧化酶抑制剂粉末。其中，乙酸乙酯层菝葜提取物对黄嘌呤氧化酶具有较好的抑制作用，可应用于制备痛风症药物。本发明专利技术中产物提取方法简易，产品可直接保存和使用。本发明专利技术中菝葜黄嘌呤氧化酶抑制剂粉末的制备成功，实现了天然产物的高值化综合利用。同时，弥补了合成药物成本高、副作用大的缺陷，实现了高效抑制黄嘌呤氧化酶活性和节约经济成本的双重目的。

Preparation method and application of Smilax China extract for inhibiting xanthine oxidase activity

The invention relates to the field of gout drug preparation, in particular to a preparation method and application of a sarsaparis extract which inhibits xanthine oxidase activity. The extract was prepared by drying, crushing, sieving, extracting, followed by petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, n-butanol extraction and freeze-drying to obtain the powder of xanthine oxidase inhibitor. Among them, the ethyl acetate layer of Smilax japonica extract has a good inhibitory effect on xanthine oxidase and can be used in the preparation of gout drugs. The product has simple extraction method, and the product can be directly stored and used. The powder of xanthine oxidase inhibitor of Smilax has been successfully prepared and the high value comprehensive utilization of natural products has been realized. At the same time, it makes up for the high cost and side effects of synthetic drugs, and achieves the dual purposes of high efficiency inhibition of xanthine oxidase activity and economic cost savings.

【技术实现步骤摘要】
一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物制备方法和应用
本专利技术涉及一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物的制备方法及应用。
技术介绍
黄嘌呤氧化酶(EC1.2.3.2)，英文名XanthineOxidase，缩写XO，是一种非特异性蛋白酶，能连续催化黄嘌呤和次黄嘌呤产生尿酸，并伴随着过氧化氢和超氧阴离子的产生。由于人体内缺乏分解尿酸的尿酸酶，产生的尿酸就会在体内聚集，引发高尿酸血症。当尿酸浓度超过血液饱和值（416.5µmol/L）时，就会在体内结晶，并可能以尿酸钢针状结晶的形式存在于血液、关节滑膜、组织间液及肾间质中，从而引起生理炎症反应及痛风，继而引发关节炎。抑制黄嘌呤氧化酶的活性，可以减少尿酸的生成量有效预防和治疗高尿酸血症和痛风等疾病，因此，天然黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备具有重要意义。菝葜，又名金刚藤，为百合科植物SmilaxchinaL.的干燥根茎，是常见中药材，收载于2010《中国药典》一部。菝葜具有利湿去浊、祛风除痹、解毒散瘀等功效，在中医临床上用于治疗小便淋浊、带下量多、风湿痹痛、疔疮痈肿等症状。最新药理学研究显示，菝葜中部分生物活性物质，还具抗炎，清除自由基，抑制肥胖和抗癌的作用。然而，传统中药菝葜能否作为黄嘌呤氧化酶抑制剂仍然是一个未知数。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物，以弥补合成药物成本高、副作用大的不足。该方法工艺简单，生产成本低，对黄嘌呤氧化酶抑制效果佳。本专利技术另一目的在于提供一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物的制备方法。本专利技术再一目的在于提供上述一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物在制备痛风症药物中的应用。本专利技术所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：一种上述抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物的制备方法，包含如下步骤：菝葜根茎干燥后粉碎，过筛得到菝葜粉末。采用浸提法提取得到菝葜粗提物后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，旋转蒸发浓缩去除萃取剂，冷冻干燥，得到菝葜黄嘌呤氧化酶抑制剂粉末，将粉末置于干燥避光低温下保存。所述菝葜根茎干燥时间为24-48h。所述菝葜粉末过筛筛目为60-100目。所述浸提法中所用的提取剂为乙醇。所述浸提法中所用的提取剂乙醇浓度为70%-90%。所述浸提法中料液比为1:1-1:25。所述浸提法中原料需浸泡1-2h，重复浸提2-3次。所述浸提法中提取物需旋转蒸发浓缩去除乙醇得到菝葜粗提物。所述萃取中每次均需震荡，每隔2小时震荡一次，每次震荡时间为15分钟。优选地，所述的浸提法中乙醇为90%乙醇。优选地，所述的浸提法中料液比为1:20。优选地，所述的菝葜提取物中乙酸乙酯层的生物活性最高。上述抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物在制备治疗痛风的药物中的应用。上述抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物作为抗氧化剂的应用。本专利技术相对于现有技术，具有如下优点及有益效果：（1）本专利技术的抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物采用浸提法和萃取法制备，操作简单，生产成本低；（2）本专利技术的菝葜提取物对黄嘌呤氧化酶活性有显著抑制作用；（3）本专利技术制备的抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物，产品体系稳定，可直接保存和使用。附图说明图1为菝葜提取物乙酸乙酯层HPLC分析结果。图2为菝葜粗提物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用。图3为菝葜提取物对黄嘌呤氧化酶半数抑制浓度的测定。图4为菝葜提取物对黄嘌呤氧化酶抑制动力学参数测定。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步解释本专利技术，但实施例对本专利技术不做任何形式的限定。实施例1菝葜提取物的制备1）菝葜原材料预处理：菝葜根茎，干燥处理24h，粉碎，过60目筛，得到菝葜粉末。2）菝葜粗提物的制备工艺：菝葜粉末，以90%乙醇作为提取剂，料液比1:20，在室温条件下，采用浸提法，浸泡1h，重复浸提2次，过滤，合并提取液，离心，旋转蒸发浓缩去除乙醇，得到菝葜粗提物。3）菝葜黄嘌呤氧化酶抑制剂粉末的制备工艺：将浸膏依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，每次萃取均需震荡，每隔2小时震荡一次，每次震荡时间为15分钟。将萃取层旋转蒸发浓缩去除乙酸乙酯，冷冻干燥，得到菝葜黄嘌呤氧化酶抑制剂粉末，将粉末置于干燥避光低温下保存。4）称取一定量的菝葜乙酸乙酯萃取层粉末，配成一定浓度的样品溶液，用Agilent1260液相色谱仪测定单体成分，色谱条件为：柱温：20℃，检测波长：280nm，进样量：10μL，流量：0.8mL/min，最大压力限值[bar]：600。实施例2菝葜粗提物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用建立200μL的酶反应体系，取60μL的磷酸钠缓冲溶液于96孔酶标板中，加入50μL不同浓度的菝葜粗提物，再30μL0.1U/mL黄嘌呤氧化酶混匀，25°C避光条件下孵化15min后，加入60μL150μM的底物黄嘌呤启动反应，室温条件下反应5min后于295nm测吸光值（As），以不含菝葜粗提物的反应体系为控制组（Ac），以不含黄嘌呤氧化酶的反应体系为样品空白组（Ab），控制组的空白对照组为A1，以别嘌呤醇片为阳性对照，所有测试重复三次。实施例3菝葜提取物对黄嘌呤氧化酶半数抑制浓度的测定在200μL酶反应体系中，固定黄嘌呤氧化酶与底物的浓度不变，通过改变抑制剂的浓度，建立抑制率与菝葜乙酸乙酯层浓度之间的关系，通过线性拟合，算出IC50值，以别嘌呤醇片为阳性对照。实施例4菝葜提取物对黄嘌呤氧化酶抑制动力学参数测定称取一定量的菝葜乙酸乙酯萃取层粉末，配制成浓度依次为0、80、160μg/mL的溶液，反应条件不变，固定黄嘌呤氧化酶的浓度为0.1U/mL，测定不同浓度的抑制剂存在下，反应速率与底物浓度之间的关系，利用双倒数作图法，绘制米氏方程曲线。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物制备方法，其特征在于：该提取物为菝葜根茎提取物。

【技术特征摘要】
1.一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物制备方法，其特征在于：该提取物为菝葜根茎提取物。2.根据权利要求1所述的一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物制备方法，其特征在于：菝葜根茎干燥后粉碎，过筛得到菝葜粉末，采用浸提法提取得到菝葜粗提物后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，重复萃取三次，每次萃取至提取液无色，蒸发浓缩去除萃取剂，冷冻干燥，得到菝葜黄嘌呤氧化酶抑制剂粉末，将粉末置于干燥避光低温下保存。3.根据权利要求2所述的一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物制备方法，其特征在于：所述菝葜根茎干燥时间为24-48h。4.根据权利要求2所述的一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物制备方法，其特征在于：所述菝葜粉末过筛筛目为60-100目。5.根据权利要求2所述的一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的菝葜提取物制备方法，其特征在于：所述浸...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑国栋，杨丽聪，金伟丽，林乐珍，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西,36