一种囊孔附毛菌的驯化方法及驯化的囊孔附毛菌和应用技术

本发明专利技术提供了一种囊孔附毛菌的驯化栽培方法，属于菌物的人工驯化技术领域。本发明专利技术的驯化栽培方法，包括以下步骤：1)野生囊孔附毛菌子实体的分离培养，得母种菌丝体；2)母种菌丝体进行母种扩繁培养，得扩繁母种；3)扩繁母种菌块进行原种培养，得原种；4)原种进行栽培种培养，得栽培种；5)栽培种进行驯化栽培培养，菌丝生长速度快，菌丝长势好、浓密；14～17d原基发生，7～10d形成小子实体，10～15d长成正常子实体，子实体产量高。人工栽培获得的孔附毛菌子实体无毒，其子实体多糖具有明显的体外抗肝癌活性。

Domestication method and acclimation of PHAE and its application

The invention provides a domestication and cultivation method of Trichophyton bursa, belonging to the technical field of artificial domestication of fungi. The domestication and cultivation method of the invention comprises the following steps: 1) isolation and cultivation of the fruiting bodies of wild E. cysticercus, obtaining the mother species mycelium; 2) propagation and cultivation of the mother species mycelium, obtaining the mother species; 3) propagation of the mother species mycelium, obtaining the original species by original culture; 4) cultivation of the original species, obtaining the cultivated species; After domestication and cultivation, the mycelium grew fast, and the mycelium grew well and densely; 14-17 days primordium occurred, 7-10 days formed small fruiting bodies, 10-15 days grew into normal fruiting bodies, and the yield of fruiting bodies was high. The fruiting body polysaccharides of Trichophyton foraminifera obtained by artificial cultivation are non-toxic and have obvious anti-hepatoma activity in vitro.

【技术实现步骤摘要】
一种囊孔附毛菌的驯化方法及驯化的囊孔附毛菌和应用
本专利技术属于菌物的人工驯化
，具体涉及一种囊孔附毛菌的驯化方法及驯化的囊孔附毛菌和应用。
技术介绍
我国地域幅员辽阔，菌物资源丰富，野生菌达3700多种。野生菌中很多种类香味独特、味道鲜美，体内含有蛋白质、多糖、不饱和脂肪酸、矿质元素、维生素等多种营养成分，还有不少具有药用价值，如抗肿瘤、抗炎、抗病毒、保护肝脏、增强免疫力、降血糖、抗胃溃疡、防衰抗老、预防和治疗关节炎等多种药理活性。囊孔附毛菌(Trichaptumbiforme)是担子菌门异担子菌纲非褶菌目多孔菌科附毛菌属的一个种，该真菌生于阔叶树上，如桦、杨、柳、栎等。稀生于针叶树上，木材白色腐朽。在中国、越南、马来西亚、印度尼西亚、芬兰、美国等国家均有发现。该菌担子果一年生，无柄，韧革质。菌盖半圆形到扇形，单生或覆瓦状排列并左右相连，直径1～3cm，表面具放射状的粗毛，近白色，灰白色，具有浅土黄色有浅土褐色相间的环纹，具有细长绒毛或绒毛；边缘薄而锐，完整或瓣裂，波浪状，稍内卷。菌肉近白色或木材色，厚1～3mm。菌管与菌肉同色或色稍深，长2～7mm。孔面浅褐色或堇紫色；管口不规则形，往往裂成齿状，高低不平，每毫米0.5～2个。菌丝系统二体型；生殖菌丝透明，薄壁，具锁状联合，直径3～4μm；骨架菌丝淡黄色，厚壁，少分枝，直径4～5μm。囊状体多，无色，稍厚壁，纺锤状，被结晶，突出子实层12～15×5～6μm。目前围绕囊孔附毛菌的研究主要在发酵产物活性上，且数量不多，未见任何囊孔附毛菌驯化栽培技术的报道，所以其一直被视为野生种质资源，无栽培驯化种。专利
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种囊孔附毛菌的驯化栽培方法，将野生囊孔附毛菌驯化为可供人工培养且具有高子实体得率的菌种。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种囊孔附毛菌的驯化栽培方法，包括以下步骤：1)取野生囊孔附毛菌的子实体在PDA培养基上分离培养10～11d，得母种菌丝体；2)将步骤1)得到的所述母种菌丝体在母种培养基上进行7～8d的扩繁培养，得扩繁母种；所述母种培养基包括：木屑25～75g/L(煮汁)，麸皮25～75g/L(煮汁)，马铃薯切片150～250g/L(煮汁)，葡萄糖18～25g/L，蛋白胨2～4g/L，无水硫酸镁2～4g/L，磷酸二氢钾1～2g/L，琼脂18～22g/L；3)取步骤2)得到的所述扩繁母种的菌块在原种培养基上进行17～23d的原种培养，得原种；所述原种培养基包括以下重量百分比的原料：95～99％的高粱和1～5％的石膏；4)将步骤3)得到的所述原种在栽培种培养基上扩大培养25～30d，得栽培种；所述栽培种培养基包括以下重量百分比的原料：75～80％的木屑，15～25％的麸皮，0.5～2％的葡萄糖和0.5～2％的石膏；5)将步骤4)得到的所述栽培种在栽培料上进行30～40d的驯化培养，得驯化的囊孔附毛菌，所述栽培料包括以下重量百分比的原料：75～80％的棉籽壳，15～25％的麸皮，0.5～2％的葡萄糖和0.5～2％的石膏。优选的，步骤1)所述分离培养的条件包括：15～25℃的培养温度下进行暗培养。优选的，步骤2)所述扩繁母种培养的条件包括：培养温度为22～28℃。优选的，步骤3)、步骤4)所述原种、栽培种培养的条件包括：培养温度为22～28℃、空气湿度60～70％。优选的，步骤4)所述栽培种培养基的含水量为55～65％。优选的，步骤5)所述驯化培养的条件包括：培养温度为22～28℃、空气湿度为55～70％。优选的，步骤5)所述驯化培养后，包括菌种人工栽培，所述栽培的条件包括：在15～25℃，空气中CO2浓度低于0.1％，相对湿度为80～85％。本专利技术还提供了一种利用上述的驯化栽培方法得到的驯化囊孔附毛菌(Trichaptumbiforme)，保藏编号为CGMCCNo.15190，保藏地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏时间为2018年1月11日。本专利技术还提供了一种上述驯化囊孔附毛菌在制备治疗或预防肝癌药物中的应用。本专利技术提供了一种囊孔附毛菌的驯化栽培方法，本专利技术将野生囊孔附毛菌进行驯化培养，经过分离培养、母种扩繁培养、原种培养、栽培种培养、栽培料培养后得到的驯化种，在栽培料条件下所述野生囊孔附毛菌菌丝生长速度快，菌丝长势好、浓密，子实体产量高，具有广泛的应用价值。附图说明图1为野生囊孔附毛菌；图2为母种菌丝的培养图；图3为驯化栽培不同出菇方式的囊孔附毛菌子实体；图4为小鼠灌胃实验的体重变化图；图5为囊孔附毛菌处理小鼠肝脏组织的病理切片图；图6为囊孔附毛菌处理小鼠肾脏组织的病理切片图。具体实施方式本专利技术提供了一种囊孔附毛菌的驯化栽培方法，包括以下步骤：1)取野生囊孔附毛菌的子实体在PDA培养基上分离培养10～11d，得母种菌丝体；2)将步骤1)得到的所述母种菌丝体在母种培养基上进行7～8d的母种扩繁培养，得扩繁母种；所述母种培养基包括木屑25～75g/L(煮汁)，麸皮25～75g/L(煮汁)，马铃薯切片150～250g/L(煮汁)，葡萄糖18～25g/L，蛋白胨2～4g/L，无水硫酸镁2～4g/L，磷酸二氢钾1～2g/L，琼脂18～22g/L；3)取步骤2)得到的所述扩繁母种的菌块在原种培养基上进行17～23d的原种培养，得原种；所述原种培养基包括以下重量百分比的原料：95～99％的高粱和1～5％的石膏；4)将步骤3)得到的所述原种在栽培种培养基上扩大培养25～30d，得栽培种；所述栽培种培养基包括以下重量百分比的原料：75～80％的木屑，15～25％的麸皮，0.5～2％的葡萄糖和0.5～2％的石膏；5)将步骤4)得到的所述栽培种在栽培料上进行30～40d的驯化培养，得驯化的囊孔附毛菌，所述栽培料包括以下重量百分比的原料：75～80％的棉籽壳，15～25％的麸皮，0.5～2％的葡萄糖和0.5～2％的石膏。本专利技术取野生囊孔附毛菌的子实体在PDA培养基上分离培养10～11d，得母种菌丝体。在本专利技术中，所述野生囊孔附毛菌优选的来源于腐朽的阔叶树上，所述阔叶树优选的为桦树或栎树，更优选的为桦树。在本专利技术中，所述野生囊孔附毛菌从腐朽的阔叶树干上采集后优选进行菌株的分离，在本专利技术中，所述分离前优选的进行清洗，所述清洗优选的为利用无菌水进行清洗，所述无菌水的用量优选的为2～4mL。在本专利技术中，所述分离优选的为分离子实体的伞盖与伞柄，更优选的为分离伞柄和伞盖交接处的菌肉，所述菌肉的大小优选的为0.1～0.15cm，更优选的为0.15～0.25cm，最优选的为0.25～0.3cm，本专利技术对所述分离的方法并没有特殊的限定，常规的菌株分离方法即可。得到野生囊孔附毛菌的分离菌肉后，本专利技术将所述菌肉在PDA培养基上分离培养，所述分离培养的时间优选的为60～90min，更优选的为30～60min，最优选的为15～30min，所述分离培养的条件优选的包括：在15～25℃的培养温度下进行暗培养，所述培养温度优选的为15～18℃，更优选的为18～22℃，最优选的为22～25℃。菌肉系菌丝体交联而成，通过菌肉再生得到的菌种具有形成子实体的能力。得到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种囊孔附毛菌的驯化栽培方法，包括以下步骤：1)取野生囊孔附毛菌的子实体在PDA培养基上分离培养10～11d，得母种菌丝体；2)将步骤1)得到的所述母种菌丝体在母种培养基上进行7～8d的扩繁培养，得扩繁母种；所述母种培养基包括：木屑25～75g/L(煮汁)，麸皮25～75g/L(煮汁)，马铃薯切片150～250g/L(煮汁)，葡萄糖18～25g/L，蛋白胨2～4g/L，无水硫酸镁2～4g/L，磷酸二氢钾1～2g/L，琼脂18～22g/L；3)取步骤2)得到的所述扩繁母种的菌块在原种培养基上进行17～23d的原种培养，得原种；所述原种培养基包括以下重量百分比的原料：95～99％的高粱和1～5％的石膏；4)将步骤3)得到的所述原种在栽培种培养基上扩大培养25～30d，得栽培种；所述栽培种培养基包括以下重量百分比的原料：75～80％的木屑，15～25％的麸皮，0.5～2％的葡萄糖和0.5～2％的石膏；5)将步骤4)得到的所述栽培种在栽培料上进行30～40d的驯化培养，得驯化的囊孔附毛菌，所述栽培料包括以下重量百分比的原料：75～80％的棉籽壳，15～25％的麸皮，0.5～2％的葡萄糖和0.5～2％的石膏。...

【技术特征摘要】
1.一种囊孔附毛菌的驯化栽培方法，包括以下步骤：1)取野生囊孔附毛菌的子实体在PDA培养基上分离培养10～11d，得母种菌丝体；2)将步骤1)得到的所述母种菌丝体在母种培养基上进行7～8d的扩繁培养，得扩繁母种；所述母种培养基包括：木屑25～75g/L(煮汁)，麸皮25～75g/L(煮汁)，马铃薯切片150～250g/L(煮汁)，葡萄糖18～25g/L，蛋白胨2～4g/L，无水硫酸镁2～4g/L，磷酸二氢钾1～2g/L，琼脂18～22g/L；3)取步骤2)得到的所述扩繁母种的菌块在原种培养基上进行17～23d的原种培养，得原种；所述原种培养基包括以下重量百分比的原料：95～99％的高粱和1～5％的石膏；4)将步骤3)得到的所述原种在栽培种培养基上扩大培养25～30d，得栽培种；所述栽培种培养基包括以下重量百分比的原料：75～80％的木屑，15～25％的麸皮，0.5～2％的葡萄糖和0.5～2％的石膏；5)将步骤4)得到的所述栽培种在栽培料上进行30～40d的驯化培养，得驯化的囊孔附毛菌，所述栽培料包括以下重量百分比的原料：75～80％的棉籽壳，15～25％的麸皮，0.5～2％的葡萄糖和0.5～2％的石膏。2.根据权利要求1所述的驯化栽培...

【专利技术属性】
技术研发人员：王立安，姚澜，赵立强，张金秀，
申请(专利权)人：河北师范大学，
类型：发明
国别省市：河北,13