一种检测杨树感染腐烂病的方法技术

本发明专利技术为一种检测杨树感染腐烂病的方法，属于腐烂病领域。一种检测杨树感染腐烂病的方法，包括以下步骤：检测杨树中酶的活性，并根据酶活性的变化，判断杨树是否感染腐烂病；所述酶为过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β‑1,3‑葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶中的至少一种。本发明专利技术所述的一种检测杨树感染腐烂病的方法，在外界条件未发生较大变化时，通过对过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β‑1,3‑葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶中的一种酶或多种酶进行酶活性检测，并根据酶活性的变化，判断杨树是否感染腐烂病，该方法可以有效检测出腐烂病的侵入期和潜伏期，可以提前预防杨树腐烂病的大面积发生。

【技术实现步骤摘要】
一种检测杨树感染腐烂病的方法
本专利技术属于腐烂病领域，具体涉及一种检测杨树感染腐烂病的方法。
技术介绍
杨树是新疆主要防护林树种之一，在绿洲农业生产中起着极其重要的作用。近年来，杨树腐烂病发生蔓延迅速，造成大面积防护林带死亡，给脆弱的的绿洲生态农业带来极大的威胁。腐烂病侵染初期，杨树无肉眼可观测到的症状，到了后期有明显症状出现时，已来不及预防。因此，进行腐烂病侵入前期和潜伏期检测成为预防腐烂病发生的关键技术。有鉴于此，本专利技术提出一种检测杨树感染腐烂病的方法，该方法可以有效检测出腐烂病的侵入期和潜伏期，可以提前预防杨树腐烂病的大面积发生。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测杨树感染腐烂病的方法，该方法可以有效检测出腐烂病的侵入期和潜伏期，可以提前预防杨树腐烂病的大面积发生。为了实现上述目的，所采用的技术方案为：一种检测杨树感染腐烂病的方法，包括以下步骤：检测杨树中酶的活性，并根据酶活性的变化，判断杨树是否感染腐烂病；所述酶为过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β-1,3-葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶中的至少一种。进一步的，所述过氧化物酶的酶活性大于109.64U/g时，杨树感染腐烂病；所述过氧化氢酶的酶活性大于558.41nmol/min/g时，杨树感染腐烂病；所述超氧化物歧化酶的酶活性大于634.61U/g时，杨树感染腐烂病；所述β-1,3-葡聚糖酶的酶活性大于74.49mg/h/g时，杨树感染腐烂病；所述苯丙氨酸解氨酶的酶活性大于150.98U/g时，杨树感染腐烂病。再进一步的，所述过氧化物酶的酶活性为109.64-190.05U/g时，杨树感染腐烂病；所述过氧化氢酶的酶活性为558.41-905.37nmol/min/g时，杨树感染腐烂病；所述超氧化物歧化酶的酶活性为634.61-877.53U/g时，杨树感染腐烂病；所述β-1,3-葡聚糖酶的酶活性为74.49-91.01mg/h/g时，杨树感染腐烂病；所述苯丙氨酸解氨酶的酶活性为150.98-234.04U/g时，杨树感染腐烂病。进一步的，所述酶为过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β-1,3-葡聚糖酶和苯丙氨酸解氨酶。进一步的，所述检测部位为杨树中间部位的新鲜叶片或树皮组织。再进一步的，所述过氧化物酶采用过氧化物酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：(1)制备粗酶液：按照1g：10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，8000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；(2)将粗酶液和试剂在25℃下预热10min后，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2；计算ΔA＝A2-A1；过氧化物酶活性计算公式如下：POD(U/g鲜重)＝ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T＝7133×ΔA÷W式中：V反总-反应体系总体积，单位为mL；V样-加入样本体积，单位为mL；V样总-加入提取液体积，单位为mL；T-反应时间，单位为min；W-样本质量，单位为g。再进一步的，所述过氧化氢酶采用过氧化氢酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：(1)制备粗酶液：按照1g：5-10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，8000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；(2)将粗酶液和试剂在25℃下预热10min后，立即混匀并计时，室温下立即测定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA＝A1-A2；过氧化氢酶活性计算公式如下：CAT(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T＝678×ΔA÷W；式中：V反总-反应体系总体积；ε-H2O2摩尔消光系数，4.36×104L/mol/cm；d-比色皿光径，1cm；V样-加入样本体积，单位为mL；V样总-加入提取液体积，单位为mL；T-反应时间，单位为min；W-样本质量，单位为g。再进一步的，所述超氧化物歧化酶采用超氧化物歧化酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：(1)制备粗酶液：按照1g：5-10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，8000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；(2)将粗酶液和试剂充分混匀，在室温静置30min后，在560nm处测定各管吸光值A，并设置对照管，抑制百分率计算公式如下：抑制百分率＝(A对照管－A测定管)÷A对照管×100％在上述抑制百分率为50％时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)；超氧化物歧化酶活性计算公式如下：SOD活性(U/g鲜重)＝[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V反总]÷(W×V样÷V样总)×样本稀释倍数＝11.11×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W×样本稀释倍数；式中，V反总-反应体系总体积，单位为mL；V样-加入反应体系中样本体积，单位为mL；V样总-加入提取液体积，单位为mL；W-样本质量，单位为g。再进一步的，所述β-1,3-葡聚糖酶采用β-1,3-葡聚糖酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：(1)制备粗酶液：按照1g：5-10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，12000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；(2)将粗酶液和试剂充分混匀，并沸水浴加热5min，再流水冷却，在550nm处记录各管吸光值A，并设置对照管，ΔA＝A测定-A对照；β-1,3-葡聚糖酶活性计算公式如下：标准条件下测定回归方程为y＝0.0958x-0.0192；x为标准品浓度，y为吸光值；β-1,3-GA(mg/h/g鲜重)＝[(ΔA+0.0192)÷0.09585×V1]÷(W×V1÷V2)＝10.438×(ΔA+0.0192)÷W式中，V1-加入反应体系中样本体积，单位为mL；V2-加入提取液体积，单位为mL；W-样本鲜重，单位为g。再进一步的，所述苯丙氨酸解氨酶采用苯丙氨酸解氨酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：(1)制备粗酶液：按照1g：5-10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，10000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；(2)将粗酶液和试剂混匀，静置10min后，290nm处用蒸馏水调零，并设置对照管，测定对照管吸光值A1和测定管A2，计算△A＝A2-A1；过氧化物酶活性计算公式如下：PAL(U/g鲜重)＝ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.1÷T＝17.3×ΔA÷W；式中，V反总-反应体系总体积，单位为mL；V样-加入样本体积，单位为mL；V样总-加入提取液体积，单位为mL；T-反应时间，单位为min；W-样本质量，单位为g。与现有技术相比，本专利技术的有益之处在于：本专利技术所述的一种检测杨树感染腐烂病的方法，在外界条件未发生较大变化时，通过对过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β-1,3-葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶中的一种酶或多种酶进行酶活性检测，并根据酶活性的变化，判断杨树是否感染腐烂病，该方法可以有效检测出腐烂病的侵入期和潜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测杨树感染腐烂病的方法，其特征在于，包括以下步骤：检测杨树中酶的活性，并根据酶活性的变化，判断杨树是否感染腐烂病；所述酶为过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β‑1,3‑葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶中的至少一种。

【技术特征摘要】
1.一种检测杨树感染腐烂病的方法，其特征在于，包括以下步骤：检测杨树中酶的活性，并根据酶活性的变化，判断杨树是否感染腐烂病；所述酶为过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β-1,3-葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶中的至少一种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，所述过氧化物酶的酶活性大于109.64U/g时，杨树感染腐烂病；所述过氧化氢酶的酶活性大于558.41nmol/min/g时，杨树感染腐烂病；所述超氧化物歧化酶的酶活性大于634.61U/g时，杨树感染腐烂病；所述β-1,3-葡聚糖酶的酶活性大于74.49mg/h/g时，杨树感染腐烂病；所述苯丙氨酸解氨酶的酶活性大于150.98U/g时，杨树感染腐烂病。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中，所述过氧化物酶的酶活性为109.64-190.05U/g时，杨树感染腐烂病；所述过氧化氢酶的酶活性为558.41-905.37nmol/min/g时，杨树感染腐烂病；所述超氧化物歧化酶的酶活性为634.61-877.53U/g时，杨树感染腐烂病；所述β-1,3-葡聚糖酶的酶活性为74.49-91.01mg/h/g时，杨树感染腐烂病；所述苯丙氨酸解氨酶的酶活性为150.98-234.04U/g时，杨树感染腐烂病。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，所述酶为过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β-1,3-葡聚糖酶和苯丙氨酸解氨酶。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，所述检测部位为杨树中间部位的新鲜叶片或树皮组织。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，其中，所述过氧化物酶采用过氧化物酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：(1)制备粗酶液：按照1g：10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，8000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；(2)将粗酶液和试剂在25℃下预热10min后，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2；计算ΔA＝A2-A1；过氧化物酶活性计算公式如下：POD(U/g鲜重)＝ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T＝7133×ΔA÷W式中：V反总-反应体系总体积，单位为mL；V样-加入样本体积，单位为mL；V样总-加入提取液体积，单位为mL；T-反应时间，单位为min；W-样本质量，单位为g。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，其中，所述过氧化氢酶采用过氧化氢酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：(1)制备粗酶液：按照1g：5-10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，8000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；(2)将粗酶液和试剂在25℃下预热10min后，立即混匀并计时，室温下立即测定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA＝A1-A2；过氧化氢酶活性计算公式如下：CAT(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T＝678×ΔA÷W；式中：V反总-反应体系总体积...

【专利技术属性】
技术研发人员：张王斌，朱宗财，刘振亚，严海璘，岳娟，仪子博，王飞亚，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65