一种快速创制无融合生殖亚麻种子的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速创制无融合生殖亚麻种子的方法。本发明专利技术提供了一种创制无融合生殖亚麻种子的方法，包括如下步骤：1)用具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质为父本，与雄性核不育亚麻种质的不育株为母本进行杂交，收获杂交果；2)将所述杂交果的种子进行播种，选取不育株套袋不授粉，所收获的果实中的种子，得到无融合生殖亚麻种子。本发明专利技术的方法可以简化获得无融合生殖种子方法中的去雄和激素诱导及失活花粉刺激等工作，提高获得无融合生殖亚麻种子的工作效率和准确性。因此，本发明专利技术在利用多胚亚麻种质的基础上，采用导入雄性核不育基因的方法，可以简化操作程序，快速准确获得无融合生殖的亚麻种子。

【技术实现步骤摘要】
一种快速创制无融合生殖亚麻种子的方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种快速创制无融合生殖亚麻种子的方法。
技术介绍
近50年来，全球主要农作物增产潜力明显发挥于杂种优势的充分利用，无融合生殖具有固定杂种优势、加速育种进程、积累优良基因的优势，因此可利用无融合生殖快速固定作物杂种优势、达到提质增产增效良好效果，在农业生产及遗传育种上将具有重要的意义和潜力(吴曼等，2010)。无融合生殖由于其具有固定杂种优势、加速育种进程、积累优良基因的优势,因此在农业生产及遗传育种上具有重要的意义和潜力[吴曼等，2010]。尽管目前已在被子植物52个科的400多种植物中发现了无融合生殖植物，但作物中普遍缺乏无融合生殖特性[郝建华等，2009]。自然界中植物无融合生殖常伴随着有性生殖发生，在一定条件下，即使专性无融合生殖后代中也偶尔出现有性生殖后代[Nogler，1984]，兼性无融合生殖体的有性胚与无性胚的比率也会受到外界环境因素如光周期、温度、无机盐以及营养水平的影响[郝建华等，2009]。开展可以达到人工诱导、调节和控制无融合生殖发生的工作，获得由无融合生殖产生的种子，可以简化育种中长期艰难的选择过程。亚麻是自花授粉作物，育种周期较长，采用常规杂交方法育成一个品种需10～15年的时间。在亚麻的栽培种(LinumusitatissimumL.)内存在极少部分的多胚种质[康庆华，2004；康庆华等，2011]。这种多胚种质一般表现为双胚的发生，并且其中的一个胚通常是通过无融合生殖途径产生，即胚囊的配子体细胞不经受精而发育成胚胎个体，多数为单倍体，少数为纯合二倍体或镶嵌体。目前在已经检测过的材料中还没有发现通过珠被细胞经无性生殖产生的母体体细胞克隆。因此，在亚麻育种上，可利用无融合生殖进行单倍体育种，其产生的非受精胚经筛选后进行表型选择。由于栽培种亚麻(LinumusitatissimumL.)内无融合生殖频率极低，为提高无融合生殖率，获得仅由无融合生殖产生的后代对育种十分有利。在亚麻的栽培种(LinumusitatissimumL.)内存在极少部分的多胚种质(康庆华，2004；康庆华等，2011)。多胚是无融合生殖的一个重要标志，但亚麻的多胚种质一般表现为双胚或三胚的发生，一个胚是经受精的有性胚，另一个或两个胚通常是通过无融合生殖途径产生(SecorandRussell,1998)，即胚囊的配子体细胞不经受精而发育成胚胎个体，多数为单倍体，少数为纯合二倍体或镶嵌体。目前在已经检测过的亚麻材料中还没有发现通过珠被细胞经无性生殖产生的母体体细胞克隆,也就是亚麻的无融合生殖目前已经发现的属于雌配子体参与的，可以通过对其产生的非受精胚经选择培育后获得种子，对其后代可直接进行表型选择，能缩短育种年限，提高育种效率。已有方法证明利用多胚亚麻种质可以获得无融合生殖的种子(康庆华，2014；专利：ZL201310355880.X)，但该方法需要采用2.4-D和灭活花粉蒙导去雄花蕾的方法诱发多胚亚麻获得无融合生殖种子(“生长调节剂对亚麻无融合生殖诱导的初步研究”中国麻业科学，康庆华，2013)，方法繁琐，去雄工作繁重，对诱导药剂浓度要求严格，成功率较低。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种创制无融合生殖亚麻种子的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤：1)用具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质为父本，与雄性核不育亚麻种质为母本进行杂交，收获杂交果；2)将所述杂交果的种子进行播种，选取不育株套袋不授粉，所收获的果实中的种子，得到无融合生殖亚麻种子。上述方法中，步骤2)中，选取不育株为选取所开放的花朵内花药无花粉或开花后无蒴果产生的植株。上述方法中，所述雄性核不育亚麻种质的不育株为雄性核不育亚麻种质M1401的不育株或其为雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育后代；所述具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质为多胚亚麻种质DH08007(1)。上述方法中，所述雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育后代按照如下方法制备：先将具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质DH08007(1)为父本，与雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育株为母本进行杂交，收获杂交果；再将所述杂交果的种子进行播种，选取不育株和可育株进行授粉，所收获的果实中的种子，得到雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育后代。雄性核不育亚麻种质在创制无融合生殖亚麻种子中的应用也是本专利技术保护的范围内。上述应用中，所述雄性核不育亚麻种质的不育株为雄性核不育亚麻种质M1401的不育株或其为雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育后代；上述中，雄性核不育亚麻种质M1401的不育株按照如下方法制备：以雄性核不育组合M8711不育株为母本，Viking(宋宪友，2004,26(2):53-55，中国麻业“纤维亚麻新品种黑亚15号的选育报告)为父本杂交获得的不育株再为母本，Viking再为父本连续26代回交获得的核不育杂交组合。上述雄性核不育组合M8711是以雄性核不育亚麻品系1745A(宋宪友，2004,26(2):53-55，中国麻业“纤维亚麻新品种黑亚15号的选育报告，”)为母本，以Viking为父本的雄性不育的杂交组合。上述应用中，所述雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育后代按照如下方法制备：先将具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质DH08007(1)为父本，与雄性核不育亚麻种质M1401为母本进行杂交，收获杂交果；再将所述杂交果的种子进行播种，选取不育株和可育株进行授粉，所收获的果实中的种子，得到雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育后代。上述应用为如下1)和2)1)用具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质为父本，与雄性核不育亚麻种质的不育株为母本进行杂交，收获杂交果；2)将所述杂交果的种子进行播种，选取不育株套袋不授粉，所收获的果实中的种子，得到无融合生殖亚麻种子。本专利技术快速获得无融合生殖种子方法的方法为采用具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质和雄性核不育种质为试验材料，筛选不育株配制杂交组合，观察鉴定杂交果结籽情况，并进行不育株花蕾套袋不经授粉处理可否自行结籽的现象的观察记载，如果在雄性不育株上有部分蒴果可以自行结籽，初步鉴定为是由无融合生殖(孤雌生殖)而产生的亚麻种子。通过本专利技术的方法可以简化获得无融合生殖种子方法中的去雄和激素诱导及失活花粉刺激等工作，提高获得无融合生殖亚麻种子的工作效率和准确性。因此，本专利技术在利用多胚亚麻种质的基础上，采用导入雄性核不育基因的方法，可以简化操作程序，快速准确获得无融合生殖的亚麻种子。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。雄性核不育亚麻种质2016KDZ188来自雄性核不育组合MH1503的雄性核不育植株，具体按照如下方法制备：以M1401不育株为母本，以多胚亚麻材料DH08007(1)(马廷芬等，中国麻业科学，2014,36(5)：234-238，多胚亚麻利用获得的品系评价及其多胚性分析)为父本的杂交组合材料。上述M1401不育株按照如下方法制备：以雄性核不育组合M8711不育株为母本，Viking(宋宪友，2004,26(2):53-55，中国麻业“纤维亚麻新品种黑亚1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种创制无融合生殖亚麻种子的方法，包括如下步骤：1)用具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质为父本，与雄性核不育亚麻种质的不育株为母本进行杂交，收获杂交果；2)将所述杂交果的种子进行播种，选取不育株套袋不授粉，所收获的果实中的种子，得到无融合生殖亚麻种子。

【技术特征摘要】
1.一种创制无融合生殖亚麻种子的方法，包括如下步骤：1)用具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质为父本，与雄性核不育亚麻种质的不育株为母本进行杂交，收获杂交果；2)将所述杂交果的种子进行播种，选取不育株套袋不授粉，所收获的果实中的种子，得到无融合生殖亚麻种子。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，选取不育株为选取所开放的花朵内花药无花粉或开花后无蒴果产生的植株。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述雄性核不育亚麻种质的不育株为雄性核不育亚麻种质M1401的不育株或其为雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育后代；所述具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质为多胚亚麻种质DH08007(1)。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述雄性核不育亚麻种质M1401的雄性不育后代按照如下方法制备：先将具有无融合生殖特性的多胚亚麻种质DH08007(1)为父本，与雄性核不育亚麻种质M1401的不育株为母本进行杂交，收获杂交果；再将所述杂交果的种子进行播种，选取不育株和可育株进行授粉，所收获的...

【专利技术属性】
技术研发人员：康庆华，王玉富，张树权，姜卫东，宋喜霞，孙中义，吴广文，袁红梅，徐涵，谢冬微，于莹，姚玉波，黄文功，陈晶，胡莹莹，刘岩，程莉莉，
申请(专利权)人：黑龙江省农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23