一种石松植株再生的快速繁殖方法技术

本发明专利技术研究了一种石松植株再生的快速繁殖方法，包括无菌孢子的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，生根诱导、炼苗移栽等步骤。本研究通过建立石松离体再生体系，获得了石松繁殖的新途径，克服了石松自然繁殖困难的缺点，有利于石松在我国短期内的大量推广种植。

A rapid propagation method for plant regeneration of Chinese Pine

The invention studies a rapid propagation method for plant regeneration of Lycopodium kaempferi, including the steps of obtaining aseptic spores, inducing callus, differentiating callus, inducing rooting and transplanting seedlings. In this study, the in vitro regeneration system of Pinus massoniana was established, and a new way of propagation of Pinus massoniana was obtained.

【技术实现步骤摘要】
一种石松植株再生的快速繁殖方法
本专利技术涉及植物组织培养的快繁方法，属于植物

技术介绍
石松，LycopodiumjaponicumThunb，别名伸筋草、过山龙、宽筋藤等，石松科，为多年生草本植物，是一种名贵中药材。其茎直立，为二歧式分枝，叶为小型叶，多为针状，叶的基部膨大，在茎、枝的表面留下的印痕叫叶座。它生长于海拔3000m左右的高山草甸，低海拔林缘、疏林下，路边、山坡及草从间。喜温暖湿润，耐荫、耐旱、不抗严寒。主要分布在中国台湾、湖北、四川、云南、西藏等地。其具有很好的药用价值，主治：祛风除湿、通经活络、消肿止痛、风湿腰腿痛、关节疼痛、屈伸不利、跌打损伤、刀伤、烫火伤。性味与归经：微苦、辛，温。归肝、脾、肾经，石松的繁殖困难，主要是孢子繁殖。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供石松植株再生的快速繁殖方法，本研究通过建立石松离体再生体系，获得了石松繁殖的新途径，克服了石松繁殖困难的缺点，有利于石松在我国短期内的推广种植。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：取石松幼嫩的孢子，洗衣粉中浸泡3min，流水冲洗20min，超净工作台上0.005mol/L的氨水中浸泡10min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的石松孢子，接入培养基为REG+NOA0.1mg/L+6-BA3mg/L+三醋酸腈1-1.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件暗培养，温度21±2℃，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基REG+ZT1mg/L+TDZ0.05mg/L+L-脯氨酸2mg/L，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件光照1600lx，光期12h/d，温度23±2℃，分化培养出来的石松芽苗放入培养基1/4MS+ABT6号生根粉0.3-0.4mg/L+NAA0.3mg/L培养基中进行生根诱导，附加琼脂粉5.5g/L，D-葡萄糖水溶液0.045mol/L，培养条件光照3000lx，光期14h/d，温度23±2℃，芽条转入生根培养基中后先在室内弱光条件下培养15天左右，发根率到60%时搬到室外炼苗大棚在自然散射光照培养15天，待生根小苗充分木质化，叶片舒展，叶色浓绿，倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，截去过长的根系，移栽于装有腐殖土的营养袋中，覆盖薄膜，保持温度25℃，湿度90%，并避免阳光直射。本专利技术方法采用石松孢子作为繁殖材料，制备出来的石松遗传稳定性好，繁殖系数大，操作过程中污染少，能耗小。下面将结合具体实施方式对本专利技术作进一步阐述，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式实施例1取石松幼嫩的孢子，洗衣粉中浸泡3min，流水冲洗20min，超净工作台上0.005mol/L的氨水中浸泡10min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的石松孢子，接入培养基为REG+NOA0.1mg/L+6-BA3mg/L+三醋酸腈1mg/L进行愈伤组织诱导，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件暗培养，温度21±2℃，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基REG+ZT1mg/L+TDZ0.05mg/L+L-脯氨酸2mg/L，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件光照1600lx，光期12h/d，温度23±2℃，分化培养出来的石松芽苗放入培养基1/4MS+ABT6号生根粉0.3mg/L+NAA0.3mg/L培养基中进行生根诱导，附加琼脂粉5.5g/L，D-葡萄糖水溶液0.045mol/L，培养条件光照3000lx，光期14h/d，温度23±2℃，芽条转入生根培养基中后先在室内弱光条件下培养15天左右，发根率到60%时搬到室外炼苗大棚在自然散射光照培养15天，待生根小苗充分木质化，叶片舒展，叶色浓绿，倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，截去过长的根系，移栽于装有腐殖土的营养袋中，覆盖薄膜，保持温度25℃，湿度90%，并避免阳光直射，石松成活率88%。实施例2取石松幼嫩的孢子，洗衣粉中浸泡3min，流水冲洗20min，超净工作台上0.005mol/L的氨水中浸泡10min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的石松孢子，接入培养基为REG+NOA0.1mg/L+6-BA3mg/L+三醋酸腈1.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件暗培养，温度21±2℃，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基REG+ZT1mg/L+TDZ0.05mg/L+L-脯氨酸2mg/L，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件光照1600lx，光期12h/d，温度23±2℃，分化培养出来的石松芽苗放入培养基1/4MS+ABT6号生根粉0.4mg/L+NAA0.3mg/L培养基中进行生根诱导，附加琼脂粉5.5g/L，D-葡萄糖水溶液0.045mol/L，培养条件光照3000lx，光期14h/d，温度23±2℃，芽条转入生根培养基中后先在室内弱光条件下培养15天左右，发根率到60%时搬到室外炼苗大棚在自然散射光照培养15天，待生根小苗充分木质化，叶片舒展，叶色浓绿，倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，截去过长的根系，移栽于装有腐殖土的营养袋中，覆盖薄膜，保持温度25℃，湿度90%，并避免阳光直射，石松成活率89%。实施例3取石松幼嫩的孢子，洗衣粉中浸泡3min，流水冲洗20min，超净工作台上0.005mol/L的氨水中浸泡10min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的石松孢子，接入培养基为REG+NOA0.1mg/L+6-BA3mg/L+三醋酸腈1.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件暗培养，温度21±2℃，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基REG+ZT1mg/L+TDZ0.05mg/L+L-脯氨酸2mg/L，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件光照1600lx，光期12h/d，温度23±2℃，分化培养出来的石松芽苗放入培养基1/4MS+ABT6号生根粉0.3mg/L+NAA0.3mg/L培养基中进行生根诱导，附加琼脂粉5.5g/L，D-葡萄糖水溶液0.045mol/L，培养条件光照3000lx，光期14h/d，温度23±2℃，芽条转入生根培养基中后先在室内弱光条件下培养15天左右，发根率到60%时搬到室外炼苗大棚在自然散射光照培养15天，待生根小苗充分木质化，叶片舒展，叶色浓绿，倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，截去过长的根系，移栽于装有腐殖土的营养袋中，覆盖薄膜，保持温度25℃，湿度90%，并避免阳光直射，石松成活率90%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.本专利技术研究了一种石松植株再生的快速繁殖方法，包括无菌孢子的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，生根诱导，炼苗移栽等，其主要步骤如下：（1）取石松的孢子进行消毒处理；（2）将步骤（1）消毒处理过的石松孢子，接入培养基为REG+NOA0.1mg/L+6‑BA3mg/L+三醋酸腈1‑1.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加琼脂粉6.8g/L，D‑葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件暗培养，温度21±2℃；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织放入分化培养基REG+ZT1mg/L+TDZ0.05mg/L+L‑脯氨酸2mg/L，附加琼脂粉6.8g/L，D‑葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件光照1600lx，光期12h/d，温度23±2℃；（4）取步骤（3）分化培养出来的石松芽苗放入培养基1/4MS+ABT6号生根粉0.3‑0.4mg/L+NAA0.3mg/L培养基中进行生根诱导，附加琼脂粉5.5g/L，D‑葡萄糖水溶液0.045mol/L，培养条件光照3000lx，光期14h/d，温度23±2℃；（5）取步骤（4）生根后的石松进行炼苗移栽。

【技术特征摘要】
1.本发明研究了一种石松植株再生的快速繁殖方法，包括无菌孢子的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，生根诱导，炼苗移栽等，其主要步骤如下：（1）取石松的孢子进行消毒处理；（2）将步骤（1）消毒处理过的石松孢子，接入培养基为REG+NOA0.1mg/L+6-BA3mg/L+三醋酸腈1-1.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件暗培养，温度21±2℃；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织放入分化培养基REG+ZT1mg/L+TDZ0.05mg/L+L-脯氨酸2mg/L，附加琼脂粉6.8g/L，D-葡萄糖水溶液0.025mol/L，培养条件光照1600lx，光期12h/d，温度23±2℃；（4）取步骤（3）分化培养出来的石松芽苗放入培养基1/4MS+ABT6号生根粉0.3-0.4mg/L+NAA0.3mg/L培养基中进行生根诱导，附加琼脂粉5.5g/L，D-葡萄糖水溶液0.045mol/L，培养条件光照3000lx，光期14h/d，温度23±2℃；（5）取步骤（4）生...

【专利技术属性】
技术研发人员：于霞，
申请(专利权)人：南京标科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32