本发明专利技术公开了MARCH1基因可以作为类风湿性关节炎和/或骨关节炎诊断的分子标志物，本发明专利技术的实验证明：与正常人相比，MARCH1基因在类风湿性关节炎和/或骨关节炎患者表达量高。本发明专利技术还公开了MARCH1基因可以用于制备治疗类风湿性关节炎和/或骨关节炎的药物。本发明专利技术的研究成果提供了一种新的类风湿性关节炎和/或骨关节炎临床诊断方法，同时提供了一种治疗类风湿性关节炎和/或骨关节炎的药物新靶标。
MARCH1 gene as a marker for diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis and osteoarthritis
The invention discloses that MARCH1 gene can be used as a molecular marker for the diagnosis of rheumatoid arthritis and/or osteoarthritis. The experiment of the invention proves that the expression of MARCH1 gene is higher in patients with rheumatoid arthritis and/or osteoarthritis than in normal people. The invention also discloses that MARCH1 gene can be used to prepare drugs for treating rheumatoid arthritis and/or osteoarthritis. The present invention provides a new clinical diagnostic method for rheumatoid arthritis and/or osteoarthritis, and a new drug target for the treatment of rheumatoid arthritis and/or osteoarthritis.
【技术实现步骤摘要】
作为类风湿性关节炎和骨关节炎诊治标志物的MARCH1基因
本专利技术涉及分子诊断、治疗领域，更具体地，本专利技术涉及以检测MARCH1异常为手段的诊断方法；及抑制MARCH1基因或蛋白质的治疗剂。
技术介绍
类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病，以多关节受累为特征，可进展出现关节破坏和畸形，常累及外周关节。病因不清，关节外器官受累如肺间质病变和干燥综合征等也很常见。恰当的早期治疗可以改善关节症状和功能，降低死亡率，减少并发症。一篇2010年的系统回顾研究发现，北美和北欧的类风湿关节炎发病率估计在0.5％～1.1％。发展中国家的发病率相对更低(0.1％～0.5％)。类风湿关节炎在女性更常见(男女发病率1：3)。任何年龄均可发病，一项回顾队列研究称中位发病年龄为55.6岁；英国每年新诊断类风湿关节炎病例数约为20，000。由此推算，每位全科医生每2年可接诊1例新发病患者。来自英国、欧洲、美国的研究均发现全科医师存在类风湿关节炎诊断延迟。英国国家审计署2009年报告，确诊为类风湿关节炎之前，患者去其全科医师处就诊平均达4次之多，有18％的患者甚至需就诊8次才能确诊。在初级医疗中，早期类风湿关节炎的诊断与其他骨骼肌肉问题一样困难：临床特征表现不易辨识，炎症标志如血沉和C反应蛋白又没有特征性意义，而特异性标志阴性如类风湿因子(31％患者出现血清阴性)和抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP，33％患者血清阴性)又常见血清阴性表现。类风湿关节炎导致的残疾可使28％的患者在一年内失去工作能力。从症状发生开始，在3个月内的「窗口期」开始治疗，可以延缓疾病进展。而延迟治疗则增加影像学关节破坏和致死的风险。而且，在3～6个月后再开始治疗更易出现单药治疗失败并导致耐药。类风湿性关节炎就是关节疾病里面的一种类风湿性关节炎，会出现关节肿痛的一些症状。但是还有很多的疾病和类风湿性关节炎的症状是非常相似的，特别容易让人产生误导，如骨关节炎。骨关节炎是冲为退行性关节炎或者是骨质增生，影响到了人体关节的一种疾病，主要的原因就是关节长时间的负重而导致的关节表面的软骨受到了损伤周围的骨性组织增生，当骨性关节炎出现在手指上的时候，就有可能会被误诊为类风湿性关节炎。所以寻找一种可以在早期有效区别诊断类风湿性关节炎和骨关节炎的方法是亟待解决的问题，以免因误诊误治延误病情，保证患者得到正确的治疗。近年来，在分子层面研究用于诊断类风湿性关节炎或骨关节炎的标志物不断涌现，如以下所列申请号的专利：201310596649.X，201580058686.2，201380044584.6，201310483384.2，200610070393.9，201510725004.0，201510627048.X，201510724747.6，201510548635.X，201510548624.1，201510549564.5，201510725755.2。还未见有任何关于区别诊断类风湿性关节炎和骨关节炎的分子标志物，申请人在这样的背景下开展了本研究。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测MARCH1基因表达差异来实现诊断类风湿性关节炎和/或骨关节炎的方法。本专利技术的目的之二在于提供一种通过抑制MARCH1基因表达来治疗类风湿性关节炎和/或骨关节炎的方法。本专利技术的目的之三在于提供一种用于筛选类风湿性关节炎和/或骨关节炎治疗药物的方法。本专利技术的目的之四在于提供一种用于治疗类风湿性关节炎和/或骨关节炎的药物。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测MARCH1的试剂在制备类风湿性关节炎和/或骨关节炎诊断工具中的应用。进一步，所述检测MARCH1的试剂包括检测MARCH1基因表达量的试剂。更进一步，所述检测MARCH1的试剂包括能够定量MARCH1基因mRNA的试剂，和/或能够定量MARCH1蛋白的试剂。本专利技术的定量MARCH1基因mRNA的试剂可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该试剂可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。所述能够定量MARCH1基因mRNA的试剂可以是MARCH1基因或转录本的特异性引物，也可以是MARCH1基因或转录本的特异性识别探针，或同时包括引物和探针。上面所述的MARCH1基因或转录本的特异性引物包括实时定量PCR中使用的特异扩增MARCH1基因的引物。在本专利技术的的具体实施例中，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。引物可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的定量MARCH1蛋白的试剂可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的定量MARCH1蛋白的试剂包括特异性结合MARCH1蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的定量MARCH1蛋白的试剂可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的MARCH1蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对MARCH1蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测MARCH1的试剂在制备诊断类风湿性关节炎和/或骨关节炎的工具中的应用。
【技术特征摘要】
1.检测MARCH1的试剂在制备诊断类风湿性关节炎和/或骨关节炎的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测MARCH1的试剂包括检测MARCH1基因表达量的试剂。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述检测MARCH1的试剂包括能够定量MARCH1基因mRNA的试剂，和/或能够定量MARCH1蛋白的试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述能够定量MARCH1基因mRNA的试剂包括实时定量PCR中使用的特异扩增MARCH1基因的引物；所述能够定量MARCH1蛋白的试剂包括特异性结合MARCH1蛋白的抗体。5.一种用于诊断类风湿性关节炎和/或骨关节炎的工具，其特征在于，所述工具包括能够检测MARCH1基因表达量的工具；优选的，所述工具包括能够定量MARCH1基因mR...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖枫，李曙光，孙耀兰，常鹏，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。